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光滑念珠菌磷酸吡哆醇氧化酶的定向进化改造: 1; 作者王美玲陈宇娴 +2 位作者郑晓音卢蓓丝杨欣伟《福建农业科技》 2024年第12期1-6,共6页; 磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine 5'-phosphate oxidase,PdxH)是磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5'-phosphate,PLP)生物合成途径的限速酶,是影响PLP高效合成的关键。以来源于光滑念珠菌Nakaseomyces bracarensis中的PdxH(NbPdxH)为研究对象... 展开更多; 关键词磷酸吡哆醛磷酸吡哆醇氧化酶定向进化高通量筛选; 在线阅读下载PDF 职称材料

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶在E.coli中的表达及酶学特征研究被引量：1: 2; 作者王振张剑韵黄龙全《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期503-506,共4页; 磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5′-phosphate oxidase,PNPO)是维生素B6(VB6)代谢的关键酶。采用重组质粒pET32a(+)-PNPO原核表达家蚕(Bombyx mori)PNPO,经Ni2+亲和层析纯化后对其基本酶学性质进行分析。结果表明,纯化后的家蚕重组PNPO经... 展开更多; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶原核表达分离纯化酶学性质; 在线阅读下载PDF 职称材料

外源激素处理后家蚕吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶转录水平的变化: 3; 作者杨欢欢姚丽丽 +1 位作者张剑韵黄龙全《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1285-1290,共6页; 【目的】研究家蚕Bombyx mori经蜕皮激素（20-hydroxyecdysone,20-E）和保幼激素类似物（juvenile hormone analogue,JHA）处理后引起吡哆醛激酶（pyridoxal kinase,PLK）和磷酸吡哆醇氧化酶（pyridoxine-5＇-phosphate oxidase,PNPO）... 展开更多; 关键词家蚕蜕皮激素保幼激素类似物吡哆醛激酶磷酸吡哆醇氧化酶转录水平; 在线阅读下载PDF 职称材料

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶基因的表达谱分析: 4; 作者葛俊楠张剑韵黄龙全《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期877-880,共4页; 【目的】了解家蚕Bombyx mori维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase,PNPO)基因在家蚕不同发育阶段及5龄幼虫不同组织中的表达差异。【方法】将家蚕PNPO基因的重组表达质粒pET-22b(+)-PNPO转化入大... 展开更多; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶 WESTERN BLOT 荧光定量PCR 表达谱; 在线阅读下载PDF 职称材料

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定: 5; 作者童宁张剑韵黄龙全《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1231-1235,共5页; 【目的】研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine5'-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响。【方法】用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111(AAA)突变为Glu(GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC);构建重... 展开更多; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶定点突变基因表达蛋白纯化酶活性; 在线阅读下载PDF 职称材料

茶树鲜叶中维生素B_6代谢酶PNPO的活性分析: 6; 作者李艳霞张剑韵黄龙全《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期273-276,共4页; 采用液氮研磨、Tris-HCl+KPO4缓冲液(pH8.5)浸提法和硫酸铵沉淀法从茶树鲜叶中提取磷酸吡哆醇氧化酶(PNPO)粗酶液,并通过苯肼法研究其酶学性质。结果表明,以磷酸吡哆胺(PMP)为底物,PNPO催化反应的最佳时间为30min,最适温度为50℃,最适pH... 展开更多; 关键词茶树磷酸吡哆醇氧化酶维生素B6; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名光滑念珠菌磷酸吡哆醇氧化酶的定向进化改造: 1; 作者王美玲陈宇娴郑晓音卢蓓丝杨欣伟; 机构工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心/福建师范大学生命科学学院晋江市实验中学; 出处《福建农业科技》 2024年第12期1-6,共6页; 基金福建省自然科学基金面上项目(2021J01170)。; 文摘磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine 5'-phosphate oxidase,PdxH)是磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5'-phosphate,PLP)生物合成途径的限速酶,是影响PLP高效合成的关键。以来源于光滑念珠菌Nakaseomyces bracarensis中的PdxH(NbPdxH)为研究对象,通过定向进化和高通量筛选对NbPdxH进行改造,以提高酶的催化活性。结果表明:通过筛选成功获得1株催化效率提高的突变株pRB1s-NbpdxHM8/BW25113,使得PLP产量达到5.3 g·L^(−1),PNP转化率为71%,与原始菌株相比提高了27%。通过结构分析,推测NbPdxHM8活性位点附近的电荷发生改变,进而提高酶与底物的结合效率。研究结果为PLP的高效合成提供了新的思路。; 关键词磷酸吡哆醛磷酸吡哆醇氧化酶定向进化高通量筛选; Keywords PLP PdxH Directed evolution High-throughput screening; 分类号 R446.5 [医药卫生—诊断学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名家蚕磷酸吡哆醇氧化酶在E.coli中的表达及酶学特征研究被引量：1: 2; 作者王振张剑韵黄龙全; 机构安徽农业大学茶与食品科技学院安徽农业大学生命科学学院; 出处《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期503-506,共4页; 基金国家自然科学基金项目(No.30870338); 文摘磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5′-phosphate oxidase,PNPO)是维生素B6(VB6)代谢的关键酶。采用重组质粒pET32a(+)-PNPO原核表达家蚕(Bombyx mori)PNPO,经Ni2+亲和层析纯化后对其基本酶学性质进行分析。结果表明,纯化后的家蚕重组PNPO经SDS-PAGE鉴定为单一条带,比活力为529.81nmol/(min·mg)蛋白,纯化倍数为7.1倍;该酶的最适反应温度为40℃,在50℃以下稳定;在pH8.0～9.0之间酶活力最高,pH6.0～10.0之间活力保持稳定。该结果有助于进一步开展家蚕PNPO的催化作用和表达调控机制的研究。; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶原核表达分离纯化酶学性质; Keywords Bombyx mori Pyridoxine-5＇-phosphate oxidase Prokaryotic expression Isolation and purification Emzymological property; 分类号 S881.2 [农业科学—特种经济动物饲养] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名外源激素处理后家蚕吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶转录水平的变化: 3; 作者杨欢欢姚丽丽张剑韵黄龙全; 机构安徽农业大学茶与食品科技学院安徽农业大学外国语学院; 出处《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1285-1290,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31372262); 文摘【目的】研究家蚕Bombyx mori经蜕皮激素（20-hydroxyecdysone,20-E）和保幼激素类似物（juvenile hormone analogue,JHA）处理后引起吡哆醛激酶（pyridoxal kinase,PLK）和磷酸吡哆醇氧化酶（pyridoxine-5＇-phosphate oxidase,PNPO）的转录水平变化,为进一步研究激素对蚕体营养代谢等工作奠定基础。【方法】以20-E和JHA分别喂食不同发育时期（5龄第1,3和5天）的家蚕幼虫,以喂食蒸馏水的家蚕为对照,采用实时荧光定量PCR（realtime quantitative PCR）方法在处理后24和48 h对各组幼虫后部丝腺中PLP合成酶PLK和PNPO的转录水平进行分析。【结果】5龄第1天幼虫经20-E处理24和48 h后,PLK和PNPO的转录水平出现上调且与对照的差异达到极显著（P〈0.01）;5龄第3天幼虫经20-E处理,PLK的转录水平在48 h出现下调且与对照的差异达到显著（P〈0.05）,PNPO的转录水平在24和48 h均出现上调且与对照的差异达到极显著（P〈0.01）;5龄第5天幼虫经20-E处理后PLK和PNPO的转录水平无变化。5龄第1天幼虫经JHA处理后PLK和PNPO的转录水平未受到影响;5龄第3天幼虫经JHA处理后,PLK的转录水平在48 h出现显著下调且与对照的差异达到显著（P〈0.05）,PNPO的转录水平在24和48 h后均出现显著下调且与对照的差异达到极显著（P〈0.05）;5龄第5天幼虫经JHA处理24和48 h后,PLK和PNPO的转录水平出现下调且与对照的差异达到极显著（P〈0.01）。【结论】20-E和JHA显著影响家蚕5龄幼虫PLK和PNPO的转录水平,20-E提高5龄前期家蚕PLK和PNPO的转录水平,JHA降低5龄后期它们的转录水平,为深入研究激素对VB_6的调控奠定基础。; 关键词家蚕蜕皮激素保幼激素类似物吡哆醛激酶磷酸吡哆醇氧化酶转录水平; Keywords Bombyx mori 20-hydroxyecdysone juvenile hormone analogue pyridoxal kinase pyridoxine-5＇-phosphate oxidase transcriptional level; 分类号 Q966 [生物学—昆虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名家蚕磷酸吡哆醇氧化酶基因的表达谱分析: 4; 作者葛俊楠张剑韵黄龙全; 机构安徽农业大学茶与食品科技学院安徽农业大学生命科学学院; 出处《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期877-880,共4页; 基金国家自然科学基金项目(30870338); 文摘【目的】了解家蚕Bombyx mori维生素B6关键代谢酶磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase,PNPO)基因在家蚕不同发育阶段及5龄幼虫不同组织中的表达差异。【方法】将家蚕PNPO基因的重组表达质粒pET-22b(+)-PNPO转化入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,纯化蛋白制备多克隆抗体。分别采用荧光定量PCR和Western blot方法对家蚕PNPO基因进行了转录水平和翻译水平的表达分析。【结果】在家蚕发育水平上,5龄幼虫的PNPO翻译量为最高。PNPO基因在5龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为精巢、头、中肠、马氏管、卵巢、表皮、脂肪体、丝腺;翻译量也以精巢为最高,其次是头、中肠和马氏管。【结论】明确了PNPO在家蚕各发育阶段及5龄幼虫各组织中的表达情况。; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶 WESTERN BLOT 荧光定量PCR 表达谱; Keywords Bombyx mori pyridoxine 5′-phosphate oxidase Western blot real-time PCR expression profile; 分类号 Q966 [生物学—昆虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定: 5; 作者童宁张剑韵黄龙全; 机构安徽农业大学茶与食品科技学院安徽农业大学生命科学院; 出处《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1231-1235,共5页; 基金国家自然科学基金项目(30870338); 文摘【目的】研究家蚕Bombyx mori磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine5'-phosphate oxidase,PNPO)个别保守氨基酸残基对PNPO酶活性的影响。【方法】用重叠延伸法把氨基酸残基Lys111(AAA)突变为Glu(GAA),Ser160(AGC)定点突变为Ala(GCC);构建重组表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli Rosetta中诱导表达,经亲和纯化后进行酶活鉴定。【结果】重组蛋白的分子量约为45.0kDa。体外酶活分析发现,家蚕氨基酸残基Lys111突变体K111E活性降低了约78.0%,Ser160突变体S160A的活性降低了67.4%。【结论】结果提示氨基酸残基Lys111和Ser160对维持家蚕PNPO的酶活性有重要作用。本研究明确了家蚕磷酸吡哆醇氧化酶个别保守氨基酸残基的酶学功能。; 关键词家蚕磷酸吡哆醇氧化酶定点突变基因表达蛋白纯化酶活性; Keywords Bombyx mori pyridoxine 5＇-phosphate oxidase site-directed mutation gene expression protein purification enzyme activity; 分类号 Q966 [生物学—昆虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名茶树鲜叶中维生素B_6代谢酶PNPO的活性分析: 6; 作者李艳霞张剑韵黄龙全; 机构安徽农业大学茶与食品科技学院安徽农业大学生命科学学院; 出处《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期273-276,共4页; 基金安徽省教育厅自然科学重点科研项目(KJ2010A116); 文摘采用液氮研磨、Tris-HCl+KPO4缓冲液(pH8.5)浸提法和硫酸铵沉淀法从茶树鲜叶中提取磷酸吡哆醇氧化酶(PNPO)粗酶液,并通过苯肼法研究其酶学性质。结果表明,以磷酸吡哆胺(PMP)为底物,PNPO催化反应的最佳时间为30min,最适温度为50℃,最适pH6.5。在pH6.0~9.0,温度10~40℃的条件下,此酶稳定。在最适条件下测得反应底物PMP的Km值为2.34mmol/L。; 关键词茶树磷酸吡哆醇氧化酶维生素B6; Keywords tea plant pyridoxamine（Pyridoxine）-5 -phosphate oxidase vitamin B6; 分类号 S571.1 [农业科学—茶叶生产加工]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	光滑念珠菌磷酸吡哆醇氧化酶的定向进化改造	王美玲陈宇娴郑晓音卢蓓丝杨欣伟	《福建农业科技》	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	家蚕磷酸吡哆醇氧化酶在E.coli中的表达及酶学特征研究	王振张剑韵黄龙全	《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	外源激素处理后家蚕吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶转录水平的变化	杨欢欢姚丽丽张剑韵黄龙全	《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	家蚕磷酸吡哆醇氧化酶基因的表达谱分析	葛俊楠张剑韵黄龙全	《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	家蚕磷酸吡哆醇氧化酶的体外定点突变及其活性鉴定	童宁张剑韵黄龙全	《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	茶树鲜叶中维生素B_6代谢酶PNPO的活性分析	李艳霞张剑韵黄龙全	《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心	2010	0	在线阅读下载PDF 职称材料