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PCR法筛选日本血吸虫cDNA文库中磷酸丙糖转移酶基因
被引量：
5
1
作者
童畅
汪学龙
沈际佳
《安徽医科大学学报》
CAS
2002年第1期3-5,共3页
目的 用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶 (TPM )基因 ,为进一步亚克隆和表达奠定基础。方法 根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物 ,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率。根据测得的频率 ,...
目的 用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶 (TPM )基因 ,为进一步亚克隆和表达奠定基础。方法 根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物 ,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率。根据测得的频率 ,将适量的噬菌体接种于96孔细胞培养板上进行细菌培养扩增。再利用PCR鉴定阳性克隆所在位置 ,经过选择性扩增 ,筛选出阳性克隆 ,并环化成质粒 ,经测序验证后构建pGEM T/TPM克隆载体。结果 经过 3轮筛选 ,所得阳性克隆经过测序 ,用GenebankBLAST进行序列比较 ,证实为日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因。重组质粒 pGEM T经双酶切证实有约 76 0bp的插入片段。结论 从日本血吸虫cDNA文库中筛选出TPM基因 ,并成功地构建该基因的克隆载体 。
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关键词
聚合
酶
链反应
基因文库
日本血吸虫
磷酸丙糖转移酶
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职称材料
血吸虫磷酸丙糖转移酶基因的克隆及表达
被引量：
1
2
作者
童畅
沈际佳
+1 位作者
蒋作君
汪学龙
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第5期25-28,共4页
目的 对血吸虫磷酸丙糖转移酶基因进行克隆及原核表达 ,以寻找新的预防日本血吸虫感染的疫苗候选分子。方法 用血吸虫病人阳性混合血清经大肠杆菌预吸收后对日本血吸虫童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,所获阳性克隆测序后 ,送GenBankBLAS...
目的 对血吸虫磷酸丙糖转移酶基因进行克隆及原核表达 ,以寻找新的预防日本血吸虫感染的疫苗候选分子。方法 用血吸虫病人阳性混合血清经大肠杆菌预吸收后对日本血吸虫童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,所获阳性克隆测序后 ,送GenBankBLAST进行蛋白质序列同源性比较 ,证实与其它物种的磷酸丙糖转移酶有很高的同源性。将其克隆入 pGEM-T载体质粒 ,再定向亚克隆入pBK -CMV表达质粒载体上经IPTG诱导表达后 ,用SDS -PAGE和Western -blot分析和鉴定表达产物。结果 用PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定均证实TPM基因的重组成功 ,表达产物为 32kD的融合蛋白 ,表达产物可被免疫阳性血清识别。结论 首次成功构建编码日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因表达载体克隆 。
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关键词
日本血吸虫
磷酸丙糖转移酶
基因表达
基因克隆
疫苗
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职称材料
题名
PCR法筛选日本血吸虫cDNA文库中磷酸丙糖转移酶基因
被引量：
5
1
作者
童畅
汪学龙
沈际佳
机构
安徽医科大学病原生物学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
2002年第1期3-5,共3页
基金
安徽省科技厅科研基金 (编号 :0 0 2 2 0 31)
安徽省教育厅科研基金资助 (编号 :99ji0 1112 )
文摘
目的 用PCR法自日本血吸虫童虫cDNA文库筛选磷酸丙糖转移酶 (TPM )基因 ,为进一步亚克隆和表达奠定基础。方法 根据GeneBank中的日本血吸虫TPM基因开放阅读框设计合成一对引物 ,应用PCR测定cDNA文库中该基因的频率。根据测得的频率 ,将适量的噬菌体接种于96孔细胞培养板上进行细菌培养扩增。再利用PCR鉴定阳性克隆所在位置 ,经过选择性扩增 ,筛选出阳性克隆 ,并环化成质粒 ,经测序验证后构建pGEM T/TPM克隆载体。结果 经过 3轮筛选 ,所得阳性克隆经过测序 ,用GenebankBLAST进行序列比较 ,证实为日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因。重组质粒 pGEM T经双酶切证实有约 76 0bp的插入片段。结论 从日本血吸虫cDNA文库中筛选出TPM基因 ,并成功地构建该基因的克隆载体 。
关键词
聚合
酶
链反应
基因文库
日本血吸虫
磷酸丙糖转移酶
Keywords
polymerase chain reaction
gene library/schistosoma
Japanese
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
血吸虫磷酸丙糖转移酶基因的克隆及表达
被引量：
1
2
作者
童畅
沈际佳
蒋作君
汪学龙
机构
安徽医科大学寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002年第5期25-28,共4页
基金
安徽省科委资助项目 (0 0 2 2 0 3 1)
安徽省教育厅科研基金 (99jj0 1112)资助项目
文摘
目的 对血吸虫磷酸丙糖转移酶基因进行克隆及原核表达 ,以寻找新的预防日本血吸虫感染的疫苗候选分子。方法 用血吸虫病人阳性混合血清经大肠杆菌预吸收后对日本血吸虫童虫cDNA文库进行免疫学筛选 ,所获阳性克隆测序后 ,送GenBankBLAST进行蛋白质序列同源性比较 ,证实与其它物种的磷酸丙糖转移酶有很高的同源性。将其克隆入 pGEM-T载体质粒 ,再定向亚克隆入pBK -CMV表达质粒载体上经IPTG诱导表达后 ,用SDS -PAGE和Western -blot分析和鉴定表达产物。结果 用PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定均证实TPM基因的重组成功 ,表达产物为 32kD的融合蛋白 ,表达产物可被免疫阳性血清识别。结论 首次成功构建编码日本血吸虫磷酸丙糖转移酶基因表达载体克隆 。
关键词
日本血吸虫
磷酸丙糖转移酶
基因表达
基因克隆
疫苗
Keywords
Schistosoma japonicum
Triosephosphate transferase
Gene expression
分类号
R383.24 [医药卫生—医学寄生虫学]
R532.21 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
PCR法筛选日本血吸虫cDNA文库中磷酸丙糖转移酶基因
童畅
汪学龙
沈际佳
《安徽医科大学学报》
CAS
2002
5
在线阅读
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职称材料
2
血吸虫磷酸丙糖转移酶基因的克隆及表达
童畅
沈际佳
蒋作君
汪学龙
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2002
1
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职称材料
已选择
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