磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p55PIK表达载体的构建及单克隆株的筛选 被引量：2

1

作者 左学良 王桂华 +6 位作者 蔡娟 邓豫 董硕 蔡少鑫 李小兰 陶德定 胡俊波 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期366-368,共3页

目的构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株。方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确。转染人胚胎肾细胞株HEK293,G41... 目的构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株。方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确。转染人胚胎肾细胞株HEK293,G418筛选稳定表达p55PIK的单克隆细胞株,应用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达。结果 pEGFP-N1-p55PIK质粒经PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达,Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-p55PIK的细胞中p55PIK表达水平增高。结论正确构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,并在HEK293细胞中成功筛选出稳定表达p55PIK的细胞株,为进一步探讨p55PIK的功能提供了良好的工具。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇3-激酶 p55pIK 基因表达 克隆细胞

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褐飞虱磷脂酰肌醇3激酶p85α亚基基因NlPIK3R1的克隆与功能分析

2

作者 陆潮峰 郝培应 +3 位作者 马艳 朱家骏 冯娅琳 俞晓平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期487-495,共9页

【目的】PI3K信号通路在生物体中发挥重要功能,涉及糖和脂质的代谢、细胞和组织生长以及生物个体寿命等。本研究旨在探明该通路中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在褐飞虱Nilaparvata lugens中的功能。【方法】根据转录组提供的PI3K p85α核心序... 【目的】PI3K信号通路在生物体中发挥重要功能,涉及糖和脂质的代谢、细胞和组织生长以及生物个体寿命等。本研究旨在探明该通路中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在褐飞虱Nilaparvata lugens中的功能。【方法】根据转录组提供的PI3K p85α核心序列信息,应用c DNA末端快速克隆的技术(RACE)获得了编码PI3K p85α的基因Nl PIK3R1的全长c DNA(Gen Bank登录号为KP635379),并应用荧光定量PCR和通过给成虫喂食ds Nl PIK3R1对Nl PIK3R1进行RNA干扰(RNAi)分别对该基因的表达规律和功能进行了研究。【结果】荧光定量PCR测定结果表明,Nl PIK3R1在褐飞虱若虫和雄成虫中表达量均较低,但在怀卵雌成虫中大量表达。RNAi结果表明,给褐飞虱成虫喂食0.1和0.5μg/μL ds Nl PIK3R1均导致Nl PIK3R1的表达明显受到抑制,高浓度组的抑制效果尤为明显。喂食ds Nl PIK3R1对褐飞虱成虫具有极显著致死效果,高浓度组的褐飞虱成虫在饲喂第7天时存活率仅为37.5%,相比于空白对照组(87.00%)和ds GFP对照组(76.67%)均达到了极显著差异(P<0.01)。对Nl PIK3R1的RNAi导致褐飞虱成虫羽化率下降和体重变轻。【结论】本研究结果显示,Nl PIK3R1基因对褐飞虱的生存、生长和发育具有重要作用,可以作为防治褐飞虱的潜在靶标。 展开更多

关键词 褐飞虱 磷脂酰肌醇3激酶 p85α NlpIK3R1基因 RNA干扰

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磷脂酰肌醇-3-激酶p55γ-N末端24个氨基酸对体外培养HaCaT细胞增殖的影响 被引量：1

3

作者 吕峰 王桂华 +3 位作者 邓豫 蔡少鑫 胡俊波 龚建平 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期806-809,814,共5页

目的观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用。方法构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测... 目的观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位p55γ-N末端24个氨基酸抑制人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖的作用。方法构建含有PI3K-p55γ-N末端24个氨基酸的腺病毒载体AD-N24-GFP及对照病毒AD-GFP,感染HaCaT细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU/PI双掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,CFDA-SE(细胞增殖示踪荧光探针)标记法检测细胞增殖情况。结果 AD-N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,AD-N24-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(84.18±1.73)%,S期(7.60±1.47)%,G2/M期(8.22±1.33)%,而AD-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(61.14±2.76)%,S期(24.54±1.29)%,G2/M期(14.32±1.61)%,空白对照组各期细胞分布为:G0/G1期(65.78±2.11)%,S期(22.22±1.92)%,G2/M期(12.00±1.19)%,AD-N24-GFP组与AD-GFP组及空白对照组间G0/G1期和S期细胞比例的差异有显著性意义(P<0.05);BrdU阳性细胞比例显示:AD-N24-GFP组R2为:(5.89±1.33)%,AD-GFP组R2为:(27.09±2.61)%,空白对照组R2为:(24.91±2.04)%,提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的DNA合成;CFDA-SE检测显示AD-N24-GFP组增殖指数(PI)为:(33.60±2.52),AD-GFP组PI为:(52.47±4.41),空白对照组PI为:(55.29±7.61),提示AD-N24能有效抑制HaCaT细胞的增殖。结论在HaCaT细胞中过表达N24能有效阻滞HaCaT细胞周期进程,干预其细胞DNA合成,抑制其细胞增殖。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇-3-激酶 p55γ 细胞周期 细胞增殖 人永生化角质形成细胞

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磷脂酰肌醇-3激酶/Akt在体外神经干细胞存活和分化中作用的实验研究 被引量：3

4

作者 王爽 贾延劼 +4 位作者 谢鹏 牟君 赵裕光 王运良 董为伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第4期489-492,496,共5页

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法:分为对照组、wortmannin组和LY294002组;免疫组化检测Nestin、NSE和S100的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;Western Blotting检测磷酸化Akt、Caspase-9... 目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用。方法:分为对照组、wortmannin组和LY294002组;免疫组化检测Nestin、NSE和S100的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;Western Blotting检测磷酸化Akt、Caspase-9的表达。结果:随着wortmannin和LY294002浓度增大,细胞凋亡率逐渐增加。随着wortmannin和LY294002浓度增大,磷酸化Akt的表达逐渐减弱。高浓度时磷酸化的Caspase-9表达减弱。结论:神经干细胞存活依赖于PI3K/Akt途径的活化,其机制可能是PI3K/Akt活化后,促进了Caspase-9等蛋白的磷酸化,抑制了细胞凋亡事件的发生。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇-3激酶(p13K) AKT 神经干细胞 凋亡

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RNA干扰靶向抑制PI3K p85α表达对5-FU诱导大肠癌细胞凋亡的影响 被引量：2

5

作者 杨慧 倪丽 +1 位作者 马豫茜 宋于刚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1085-1088,共4页

目的探讨应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达对5-FU诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法培养已成功沉默PI3Kp85α表达的大肠癌LoVo细胞(PI3Kp85α/RNAi-LoVo)及LoVo对照组细胞,MTT法计算两组细胞5-FU的半数抑制率(IC50),JC-1染色检测线... 目的探讨应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达对5-FU诱导大肠癌LoVo细胞凋亡的影响。方法培养已成功沉默PI3Kp85α表达的大肠癌LoVo细胞(PI3Kp85α/RNAi-LoVo)及LoVo对照组细胞,MTT法计算两组细胞5-FU的半数抑制率(IC50),JC-1染色检测线粒体膜电位(Δψm)的变化,Western blotting检测凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达。结果 PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组5-FU的IC50值(1.056±0.03562μmol/L)显著低于LoVo对照组(2.796±0.10947μmol/L)(P=0.000),JC-1染色显示5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞线粒体膜电位较LoVo对照组细胞显著降低,表明PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞对5-FU更敏感。5-FU刺激48h后,PI3Kp85α/RNAi-LoVo细胞组凋亡蛋白Bcl-6和Bim的表达较LoVo对照组细胞显著增加(P=0.000)。结论应用RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α表达可促进5-FU诱导大肠癌细胞LoVo的凋亡。 展开更多

关键词 大肠肿瘤 磷脂酰3-激酶p85α亚基 RNA干扰 细胞凋亡 线粒体膜电位 5-氟脲嘧啶

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熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响 被引量：17

6

作者 施凤 何文华 +3 位作者 朱萱 李弼民 张琨和 黄雯 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期328-334,339,共8页

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活... 目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalmatrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达。结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91^(phox)、p22^(phox)、p67p^(phox)、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91^(phox)、p67^(phox)蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91p^(phox)、p22ph^(phox)、p67p^(phox)、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。 展开更多

关键词 肝星状细胞(HSC) 熊果酸(UA) NADpH氧化酶(NOX) 磷脂酰肌醇-3-羟激酶 蛋白激酶(pI3K Akt) p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MApK)

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PI3K p85α在大肠癌癌变过程中的表达及意义 被引量：14

7

作者 孙嫣 田华 +2 位作者 肖法嫚 谢晓云 宋于刚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期416-418,共3页

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验... 目的研究磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3K p85α)在大肠癌癌变过程中,即大肠正常组织、大肠腺瘤、大肠癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测116例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有明显统计学意义(P<0.05)。统计分析显示在大肠癌中PI3K p85α蛋白与患者的肿瘤分化程度无关,但是与临床分期相关(P<0.05)。结论在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K p85α蛋白的异常表达并与临床分期密切相关,PI3K/AKT信号传导通路在大肠癌癌变过程中有重要作用。 展开更多

关键词 大肠癌 磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位 免疫组织化学

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p38及PI3K的激活在IGF-1促进MSCs成肌分化中的作用 被引量：3

8

作者 王劲 罗成基 +4 位作者 郭朝华 冉新泽 徐辉 粟永萍 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第13期1137-1139,共3页

目的　探讨胰岛素样生长因子 1(Insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)体外对 5 氮杂胞苷 ( 5 Aza CRcytidine ,5 Aza CR)所诱导的骨髓间充质干细胞 (Mesenchymalstemcells ,MSCs)成肌分化的影响及p3 8和磷脂酰肌醇 3激酶 (Phosphoino... 目的　探讨胰岛素样生长因子 1(Insulin likegrowthfactor 1,IGF 1)体外对 5 氮杂胞苷 ( 5 Aza CRcytidine ,5 Aza CR)所诱导的骨髓间充质干细胞 (Mesenchymalstemcells ,MSCs)成肌分化的影响及p3 8和磷脂酰肌醇 3激酶 (Phosphoinosit ide 3kinases ,PI3K)的激活在此过程中的作用。方法　以 10 μmol L 5 Aza CR体外诱导MSCs成肌分化 ,加用 1nmol LIGF 1作用 ,不同时相以逆转录聚合酶链反应 (Reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)鉴定成肌素 (Myogenin)的表达 ;免疫印迹 (Western blot)测定p3 8及PI3K的变化。结果　 10 μmol L 5 Aza CR诱导后 2 4h ,MSCS开始表达myogenin ,加用IGF 1后 ,myogenin所表达的时相无改变 ,但至 72h后其表达量明显升高 ;磷酸化p3 8及磷酸化Akt在 5 Aza CR诱导后 ,其蛋白含量随时相增加而逐渐增强 ,加用IGF 1后 ,与作用前同时相比较 ,二者明显升高。结论　IGF 1体外可增强 5 Aza CR所诱导的成肌调节因子的表达 。 展开更多

关键词 间充质干细胞 5-氮杂胞苷 胰岛素样生长因子-1 p38 磷脂酰肌醇-3激酶

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RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白对大肠癌细胞侵袭与转移的影响 被引量：1

9

作者 孙嫣 田华 +2 位作者 谢晓云 肖法嫚 宋于刚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期496-499,共4页

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验... 目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白表达对大肠癌细胞侵袭与转移的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌LoVo细胞。用蛋白质印迹法筛选出一组抑制效率最高的细胞进行细胞划痕实验和Transwell实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的LoVo细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达77%,选择该组细胞作为有效干扰组进行后续实验。细胞划痕实验显示,干扰组细胞的划痕愈合能力明显低于对照组细胞(P<0.05)。Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显少于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3Kp85α蛋白表达缺失可明显降低大肠癌LoVo细胞的迁移运动能力,PI3Kp85α可能成为治疗大肠癌转移的新靶点。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位 RNA干扰 肿瘤转移

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miR-409-3p通过抑制PIK3CA介导的自噬增强耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性 被引量：4

10

作者 廖凤儿 陶莹 +2 位作者 骆婕 李筠 郭琴 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2154-2163,共10页

目的:探究微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对耐药卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:用RT-qPCR检测化疗敏感和耐药卵巢癌组织、耐顺铂卵巢癌细胞及其亲本细胞中miR-409-3p的表达情况。对耐顺铂卵巢癌细胞转染miR-409-3p mimics或miR... 目的:探究微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对耐药卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:用RT-qPCR检测化疗敏感和耐药卵巢癌组织、耐顺铂卵巢癌细胞及其亲本细胞中miR-409-3p的表达情况。对耐顺铂卵巢癌细胞转染miR-409-3p mimics或miR-NC后,再给予顺铂处理,用WST-1法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例,Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、beclin-1、LC3和SQSTM1表达情况。生物信息学和双萤光素酶报告基因实验检测miR-409-3p的靶基因,并通过功能修复实验验证。构建荷瘤裸鼠模型,分析miR-409-3p及其靶基因在体内对耐顺铂卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响。结果:耐药卵巢癌组织中miR-409-3p的表达水平显著低于敏感组织(P<0.05),耐药卵巢癌细胞中miR-409-3p的表达水平显著低于亲本细胞(P<0.05)。转染miR-409-3p mimics后,耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性显著增强(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-409-3p mimic组PIK3CA和beclin-1表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.05),SQSTM1表达水平显著升高(P<0.05)。PIK3CA是miR-409-3p的靶基因。miR-409-3p能在体内增强耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论:miR-409-3p通过抑制靶基因PIK3CA来抑制促生存自噬,进而恢复耐药卵巢癌细胞的顺铂敏感性。 展开更多

关键词 卵巢癌 微小RNA-409-3p 磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α 顺铂 化疗敏感性 自噬

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长链非编码RNA HOTAIR通过调控PIK3R3促进肝癌HepG2细胞的转移和侵袭 被引量：7

11

作者 张婧婧 吴伟 +3 位作者 王鹏 杨景瑞 段巨洪 于海川 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1775-1781,共7页

目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运... 目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)对肝癌Hep G2细胞转移和侵袭的影响。方法:运用免疫组化技术检测磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3(phosphoinositide-3-kinase regulatory subunit 3,PIK3R3)在正常肝脏组织和肝癌组织的表达;运用q PCR和Western blot检测慢病毒LV3-sh HOTAIR和LV3-sh PIK3R3对HOTAIR和PIK3R3基因的沉默效率;Transwell侵袭实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2侵袭能力的影响;划痕实验检测HOTAIR和PIK3R3的表达对肝癌细胞Hep G2迁移能力的影响;q PCR检测沉默HOTAIR和PIK3R3后miR-214的表达;q PCR检测转染miR-214 mimics和miR-214 inhibitor后HOTAIR和PIK3R3的表达;双萤光素酶报告基因系统检测miR-214对HOTAIR和PIK3R3转录活性的影响。结果:和正常肝组织比较,PIK3R3在肝癌组织中的表达明显增加;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,肝癌细胞株Hep G2的侵袭和转移能力明显降低;沉默HOTAIR和PIK3R3基因后,miR-214表达上调;转染miR-214 mimics后,HOTAIR和PIK3R3的表达降低;转染miR-214 inhibitor后,HOTAIR和PIK3R3的表达上调;双萤光素酶报告基因系统检测结果显示miR-214可以直接调控HOTAIR和PIK3R3的转录活性。结论:HOTAIR可以通过miR-214调控PIK3R3的表达。 展开更多

关键词 HOX转录反义RNA 肝癌 磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基3

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胰岛素和佛波酯在蛋白质合成中经不同途径激活p70 S6激酶 被引量：1

12

作者 赵咏梅 付伟 +7 位作者 宋宇彤 王亚杰 刘奕 陈菲 宗志宏 于爱鸣 韩雅玲 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期229-233,共5页

为研究佛波酯 (PMA)和胰岛素在蛋白质合成中的信号传递 ,应用激酶活性测定和Western印迹等方法 ,分别检测mTOR(mammaliantargetofrapamycin)特异性抑制剂rapamycin或磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3K)的特异性抑制剂LY2 94 0 0 2预处理、PMA或... 为研究佛波酯 (PMA)和胰岛素在蛋白质合成中的信号传递 ,应用激酶活性测定和Western印迹等方法 ,分别检测mTOR(mammaliantargetofrapamycin)特异性抑制剂rapamycin或磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3K)的特异性抑制剂LY2 94 0 0 2预处理、PMA或胰岛素处理的血清饥饿的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)中p70S6激酶 (p70S6K)和蛋白激酶B(PKB)的活性及表达 .结果显示 ,PMA或胰岛素刺激促进p70S6K的活化和表达 .而rapamycin预处理可阻断PMA和胰岛素对p70S6K的激活作用 ,表明PMA和胰岛素可能是通过mTOR 依赖性途径激活p70S6K .结果还显示 ,胰岛素刺激促进PKB的活化和表达 ,而PMA对PKB的活性和表达无影响 .LY2 94 0 0 2预处理可阻断胰岛素对p70S6K和PKB的激活作用 ,但不能抑制PMA刺激引起的p70S6K的活化 .表明胰岛素和PMA介导p70S6K活化的信号途径有所不同 ,胰岛素介导p70S6K的活化可能依赖于PI3K途径 。 展开更多

关键词 胰岛素 佛波酯 蛋白质合成 信号传递 p70S6激酶 蛋白激酶B 磷脂酰肌醇-3激酶 细胞生长 mTOR

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PIK3CD表达上调与胃癌临床病理特征及患者预后的相关性 被引量：3

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作者 乔世峰 李世正 佟鑫 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期62-66,共5页

目的:分析磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK3CD)表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性。方法:收集2004年5月至2007年12月在辽宁医学院附属第一医院胃肠外科行肿瘤切除并经病理... 目的:分析磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK3CD)表达与胃癌临床病理特征和患者预后的相关性。方法:收集2004年5月至2007年12月在辽宁医学院附属第一医院胃肠外科行肿瘤切除并经病理证实的胃癌患者癌组织标本及相应癌旁组织标本各86例,采用免疫组织化学法检测PIK3CD蛋白在86例胃癌及癌旁组织中的表达;利用χ2检验及Spearman相关性检验探讨PIK3CD表达与胃癌临床病理特征的关系;应用Kaplan-Meier方法分析PIK3CD表达与胃癌患者术后5年生存率及生存时间。结果:相对于癌旁组织,PIK3CD在胃癌组织中的表达明显上调(P=0.006);PIK3CD表达与胃癌浸润深度呈显著相关性(P=0.005),与淋巴结阳性率(P=0.089)和临床分期(P=0.060)有相关趋势但无统计学意义,而与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结和远处转移等无相关性。高表达和低表达PIK3CD的患者术后5年累积生存率分别为18.9%和60.6%,中位生存时间为31.0(95%CI:23.9~38.1)个月和60.6(95%CI:53.8~67.4)个月,Kaplan-Meier分析显示其差异有显著统计学意义(χ2=19.791,P=0.000)。多因素分析显示,PIK3CD可作为一个独立的预后评估因素(P=0.000)。结论:(1)胃癌组织中PIK3CD表达的显著上调提示其具有潜在的促癌作用;(2)PIK3CD表达上调与胃癌的浸润程度和患者生存时间相关,可作为胃癌预后不良评估的一个独立影响因素。 展开更多

关键词 胃癌 磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ 浸润 预后

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PIK3CA基因突变在子宫颈癌中的研究进展 被引量：1

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作者 黄慧娴(综述) 滕银成(审校) 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期272-276,共5页

磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因的突变在子宫颈癌、头颈部鳞癌、乳腺癌中均有报道且较为常见。PIK3CA突变促进了子宫颈上皮细胞的恶性转化,使肿瘤细胞有更强的迁移能力。增加肿瘤细胞对放化疗的抵抗,导致子宫颈癌... 磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因的突变在子宫颈癌、头颈部鳞癌、乳腺癌中均有报道且较为常见。PIK3CA突变促进了子宫颈上皮细胞的恶性转化,使肿瘤细胞有更强的迁移能力。增加肿瘤细胞对放化疗的抵抗,导致子宫颈癌患者更差的治疗效果和生存预后。突变的PIK3CA可能成为子宫颈癌治疗的新靶点,阿培利司、库潘尼西等PI3K抑制剂在携带PIK3CA突变的子宫颈癌中体现出一定抗肿瘤作用,与泛-人表皮生长因子受体(HER)抑制剂、自噬抑制剂、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂等药物联用可产生更好的抗肿瘤效果。深入研究有望增加晚期、复发性子宫颈癌患者的治疗手段。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇-4 5-二磷酸3-激酶催化亚基α 磷酯酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路 子宫颈癌 阿培利司 基因突变

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治疗PIK3CA基因突变晚期乳腺癌新药——阿培利西(alpelisib) 被引量：2

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作者 陈本川 《医药导报》 CAS 北大核心 2019年第11期1528-1534,I0001,共8页

携带不同基因结构的乳腺癌患者易产生磷脂酰肌醇-3-激酶催化σ亚基(PIK3CA)的基因突变,HR^+/HER2^-乳腺癌患者发生PIK3CA基因突变率约40%。瑞士诺华公司研制的阿培利西(alpelisib)是PI3K抑制药,能抑制PI3K酶亚基编码蛋白,靶向乳腺癌的PI... 携带不同基因结构的乳腺癌患者易产生磷脂酰肌醇-3-激酶催化σ亚基(PIK3CA)的基因突变,HR^+/HER2^-乳腺癌患者发生PIK3CA基因突变率约40%。瑞士诺华公司研制的阿培利西(alpelisib)是PI3K抑制药,能抑制PI3K酶亚基编码蛋白,靶向乳腺癌的PIK3CA基因突变,对HR^+/HER2^-晚期或转移性乳腺癌患者治疗及预后有重大作用,可显著延长乳腺癌患者无疾病生存期。2019年5月24日,美国食品药品管理局(FDA)批准阿培利西上市,片剂商品名为Piqray■。FDA批准阿培利西与内分泌治疗药氟维司群(fulvestrant)联合使用,治疗患有晚期或转移性乳腺癌的绝经后女性,这些患者通过FDA批准的试验检测为激素受体(HR)阳性,人表皮生长因子受体2(HER2)阴性,PIK3CA基因突变,接受内分泌治疗方案过程中或治疗后疾病发生进展。这是FDA批准首款治疗PIK3CA基因突变乳腺癌治疗药。该文对阿培利西的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。 展开更多

关键词 阿培利西 alpelisib 乳腺癌 磷脂酰肌醇-3-激酶催化σ亚基 pIK3CA基因突变

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PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂在淋巴瘤中的研究进展 被引量：1

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作者 本刊编辑部 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期492-492,共1页

磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）-蛋白激酶B（proteinkinaseB，PKB），又称AKT-雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、代谢等密切相关，在多种实体... 磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）-蛋白激酶B（proteinkinaseB，PKB），又称AKT-雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）信号通路与细胞的生长、增殖、分化、凋亡、代谢等密切相关，在多种实体肿瘤中已发现该信号通路的异常。 展开更多

关键词 信号通路 p13K/AKT mToR 淋巴瘤 抑制剂 磷脂酰肌醇-3激酶 RApAMYCIN 雷帕霉素靶蛋白

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LPS对猪中性粒细胞Mac-1表达的影响及相关信号机制 被引量：1

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作者 王恩慈 郭雨楠 +5 位作者 张溪园 张旭日 王建民 汪洋 刘岩琪 姜代勋 《北京农学院学报》 2022年第4期67-71,共5页

【目的】研究致炎因子LPS对猪中性粒细胞表达巨噬细胞表面分子抗原(Mac)-1的诱导作用及有关的信号机制,为LPS致炎机制及抗炎药物机理研究提供依据。【方法】采用密度梯度离心法分离猪中性粒细胞,以流式细胞术检测Mac-1表达,以实时荧光定... 【目的】研究致炎因子LPS对猪中性粒细胞表达巨噬细胞表面分子抗原(Mac)-1的诱导作用及有关的信号机制,为LPS致炎机制及抗炎药物机理研究提供依据。【方法】采用密度梯度离心法分离猪中性粒细胞,以流式细胞术检测Mac-1表达,以实时荧光定量PCR检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、Janus激酶(JAK)、p65核转录因子(p65 NF-κB)mRNA相对表达量。【结果】1、10、100、1000 ng/mL的LPS对猪中性粒细胞Mac-1表达表现出增加趋势,其中100、1000 ng/mL的LPS明显促进Mac-1表达,差异极显著(P<0.01)。1、10、100、1000 ng/mL的LPS可呈剂量依赖性促进猪中性粒细胞JAK mRNA表达(P<0.01);100 ng/mL LPS可显著促进p38 MAPK mRNA表达(P<0.05);10 ng/mL LPS可分别显著促进PI3K、p65 NF-κB mRNA表达(P<0.05)。【结论】LPS呈剂量依赖性诱导猪中性粒细胞Mac-1表达,其信号机制与上调JAK和p38 MAPKmRNA表达有关。 展开更多

关键词 脂多糖 黏附分子巨噬细胞表面分子抗原 p38丝裂原活化蛋白激酶 磷脂酰肌醇-3-激酶 JANUS激酶 p65核转录因子 中性粒细胞 猪

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MiR-124a对胶原诱导性关节炎小鼠的影响及其机制 被引量：3

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作者 葛燕 阳璧玲 +3 位作者 许素清 谢希 李芬 田静 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期453-461,共9页

目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,微RNA已被证实在RA中起重要作用。微RNA-124a(microRNA-124a,miR-124a)在RA滑膜细胞中具有抗增殖及抗炎作用。本研究探讨过表达miR-124a对胶原诱导关节炎(collagen... 目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性自身免疫性疾病,微RNA已被证实在RA中起重要作用。微RNA-124a(microRNA-124a,miR-124a)在RA滑膜细胞中具有抗增殖及抗炎作用。本研究探讨过表达miR-124a对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠关节炎的影响及其可能的作用机制。方法:构建牛源性II型胶原和完全弗氏佐剂诱导的DBA/1小鼠CIA模型。初次免疫后第28天(D28),将CIA模型小鼠随机分成模型组、miR-124a治疗组和阴性对照(NC)组,分别在小鼠尾根部皮内注射生理盐水、miR-124a agomir、miR-124a agomir阴性对照,每3 d注射1次,共注射4次。观察并评估小鼠关节肿胀程度及关节炎指数。初次免疫后第63天(D63),处死小鼠获取踝关节滑膜组织。采用HE染色观察小鼠关节滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管翳、骨质侵蚀情况;TUNEL染色检测滑膜组织细胞凋亡情况;定量反转录PCR检测滑膜组织中miR-124a、磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)基因及下游基因Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫组织化学检测滑膜组织中PIK3CA、Bcl-2、Bax蛋白质的表达。结果:D28时,DBA/1小鼠足爪开始出现不同程度的肿胀,表明CIA模型构建成功。初次免疫后第48天(D48),miR-124a治疗组小鼠的足爪仅有轻微红肿,而模型组、NC组足爪红肿明显。初次免疫后第51、53、59、62天(D51、D53、D59、D62),miR-124a治疗组小鼠关节炎指数较NC组明显下降(均P<0.05)。D63时,miR-124a治疗组小鼠的滑膜细胞增殖、炎症细胞浸润、血管翳及骨质侵蚀评分均较模型组和NC组明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01或P<0.001),滑膜组织中miR-124a、Bax的表达水平明显上调且PIK3CA、Bcl-2的表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01或P<0.001),Bcl-2/Bax值明显下降(P<0.01或P<0.001)。结论:过表达miR-124a可减轻CIA小鼠关节炎,其机制可能是miR-124a靶向调控PIK3CA及其下游通路,促进滑膜细胞凋亡,抑制滑膜细胞增殖。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 胶原诱导关节炎 微RNA-124a 磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α 增殖 凋亡

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牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞表达白细胞介素-2 被引量：2

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作者 曲柳 于雅琼 +2 位作者 仇丽鸿 马楠 钟鸣 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期453-456,共4页

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞IL-23mRNA和蛋白表达的影响,以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路是否参与了该过程。方法:采用real-time PCR和Western blot法检测P.e LPS诱导MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA和蛋白... 目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞IL-23mRNA和蛋白表达的影响,以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路是否参与了该过程。方法:采用real-time PCR和Western blot法检测P.e LPS诱导MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA和蛋白的情况,以及用PI3K信号通路抑制剂LY294002预处理细胞后,IL-23mRNA和蛋白表达的变化。结果:P.e LPS刺激MC3T3-E1细胞后,IL-23mRNA的表达增加具有浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05),IL-23蛋白的表达增加具有时间依赖性(P<0.05);LY294002预处理细胞后,P.e LPS诱导的IL-23mRNA和蛋白的表达均显著降低(P<0.05)。结论:P.e LPS能诱导小鼠成骨细胞表达IL-23mRNA和蛋白,PI3K信号通路可能参与了此过程。 展开更多

关键词 牙髓卟啉单胞菌(p.e) 脂多糖(LpS) 成骨细胞 白细胞介素-23 磷脂酰肌醇-3激酶(pI3K)信号通路

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阳和汤加味对肺腺癌细胞的影响及作用机制

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作者 孙平一 刘娟 +2 位作者 刘思远 王荣 郑心 《世界中医药》 北大核心 2024年第24期3769-3774,共6页

目的:观察阳和汤加味含药血清对人肺腺癌细胞(A549、H1975)及其miR-1-3p/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的影响。方法:构建A549、H1975细胞微小RNA-1-3p(miR-1-3p)过表达及干扰稳转株,给予... 目的:观察阳和汤加味含药血清对人肺腺癌细胞(A549、H1975)及其miR-1-3p/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的影响。方法:构建A549、H1975细胞微小RNA-1-3p(miR-1-3p)过表达及干扰稳转株,给予阳和汤加味含药血清干预,通过肺腺癌细胞增殖及毒性检测实验(CCK-8)、划痕、Transwell实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-1-3p mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达水平。结果:miR-1-3p mRNA表达水平在2种肺腺癌细胞(A549、H1975)中明显低于正常肺泡上皮细胞Beas-2b(P<0.05);与空白血清比较,含药血清组肺腺癌细胞的miR-1-3p表达量增加,细胞增殖、迁移及侵袭能力受到明显抑制,干扰miR-1-3p后逆转了这种抑制作用(P<0.05);与空载组比较,miR-1-3p过表达组细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达量下降(P<0.05);含药血清干预后,2种肺腺癌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达量降低,干扰miR-1-3p可逆转对通路蛋白表达水平的抑制作用(P<0.05)。结论:阳和汤加味含药血清能够抑制肺腺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移及侵袭,其作用机制可能与调控miR-1-3p的表达进而抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。 展开更多

关键词 阳和汤加味 经典名方 肺腺癌 药理作用 作用机制 miR-1-3p 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pI3K/AKT/mTOR) 合理运用

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