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磁珠细胞分选CD 133^+/CD 44^+前列腺癌干细胞的初步鉴定
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作者 盛夏 王德林 +1 位作者 李文宾 罗照 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期454-458,共5页
目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情... 目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光(immunofluorescence,IF)表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phos-phatase,PAP)蛋白情况。结果:FCM检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后PAP分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;IF检测CD133+/CD44+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133+/CD44+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0,P=0.008)以及高于诱导后的CD133+/CD44+细胞(t=40.1,P=0.001);CD133+/CD44+细胞经过转化生长因子-β诱导后IHC和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133+/CD44+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133+/CD44+细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。 展开更多
关键词 前列腺癌 肿瘤干细胞 磁珠细胞分选 PC-3 CD133 CD44
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MACS法分选早孕期外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞 被引量:1
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作者 肖云山 孙丽洲 林其德 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期547-550,共4页
目的:探寻有效,简捷的分选出纯度较高,生物活性保存良好的外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞,用以研究妊娠早期单核巨噬细胞功能特征及其调控因素。方法:比较运用MACS法和传统方法分离、纯化妊娠早期外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞的效果。结... 目的:探寻有效,简捷的分选出纯度较高,生物活性保存良好的外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞,用以研究妊娠早期单核巨噬细胞功能特征及其调控因素。方法:比较运用MACS法和传统方法分离、纯化妊娠早期外周血和蜕膜组织单核巨噬细胞的效果。结果:经台盼兰染液检测细胞活性,传统贴壁法获得的单核细胞活性率为(92.50±0.57)%,MACS法获得的单核细胞活性率为(92.70±0.62)%,两者没有显著差异。传统贴壁法获得的巨噬细胞活性率为(82.40±0.64)%,MACS法获得的巨噬细胞活性率为(82.60±0.61)%,两者没有显著差异。经流式细胞仪检测细胞纯度,贴壁法获得的单核细胞纯度为(85.83±1.50)%,显著低于MACS法获得的单核细胞纯度(91.89±1.37)%。贴壁法获得的巨噬细胞纯度为(35.25±1.38)%,显著低于MACS法获得的巨噬细胞纯度(76.40±2.02)%(P<0.05)。结论:MACS方法分选得到的妊娠早期外周血单核细胞和蜕膜组织巨噬细胞纯度高,生物活性保存良好。MACS方法是一种有效,简捷的分离、纯化单核巨噬细胞的方法,运用此方法,有益于更确切的描述妊娠早期参与母胎界面免疫调控的职能细胞的作用及其调节方式。 展开更多
关键词 单核巨噬细胞 早孕 磁珠细胞分选
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人胎盘组织造血干/祖细胞的分离富集 被引量:4
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作者 章涛 陈代雄 +3 位作者 方宁 刘祖林 祁莹 刘金伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期955-958,共4页
为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞(HSPC)的标化流程,采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用羟乙基淀粉(6%HES)法从中分离出单个核细胞(MNC),再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞... 为了探索从胎盘组织中分离富集造血干/祖细胞(HSPC)的标化流程,采用机械法加胶原酶消化法制备人胎盘组织单个细胞悬液,用羟乙基淀粉(6%HES)法从中分离出单个核细胞(MNC),再经免疫磁珠分选法分选出CD34-、CD34+CD38-、CD34+CD38+3个细胞亚群,用流式细胞术对各阶段分选细胞进行表型分析并计算分选细胞的富集度和回收率。结果表明:机械法加胶原酶消化法制备的人胎盘组织单个细胞悬液中单个核细胞(MNC)数达(12.30±3.51)×108,与脐血初始样品所含的MNC数(8.86±5.38)×108比较差异无统计学意义,而其CD34+细胞所占百分率[(3.93±2.31)%]则明显高于脐血[(0.44±0.29)%]。胎盘组织单个细胞悬液经6%HES分离后MNC和CD34+细胞的回收率分别为(45.3±11.7)%和(51.1±9.8)%;MNC经免疫磁珠分选后,其CD34+细胞的纯度和回收率分别为(73.4±14.1)%和(52.7±11.7)%。结论:本实验所建立的"机械法加胶原酶消化法-HES分离MNC-MACS分选目标细胞"的分离纯化方法可从胎盘组织获得高丰度、高富集度、高活性的HSPC,为进一步研究胎盘HSPC提供了比较经济、效果较好的分离富集方案。 展开更多
关键词 CD34抗原 造血干细胞 胎盘 免疫磁珠细胞分选 脐血
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人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性 被引量:2
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作者 刘虹麟 陈代雄 +5 位作者 方宁 章涛 刘祖林 刘金伟 万卫红 祁莹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期125-128,共4页
本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期... 本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。 展开更多
关键词 CD133^+细胞 长期培养启动细胞 造血干/祖细胞 磁珠激活细胞分选 胎盘
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