基于磁微粒化学发光免疫分析方法的禽白血病病毒检测

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作者 季晶晶 纪方轩 +5 位作者 沈艳 汪最 朱燕锋 朱思锋 罗青平 陈利苹 《养殖与饲料》 2025年第9期56-62,共7页

[目的]建立1种检测禽白血病病毒的磁微粒化学发光免疫分析方法,为禽白血病的净化提供更高效的检测工具。[方法]采用双抗体夹心法原理,选用2株针对P27蛋白的单克隆抗体分别作为包被抗体和标记抗体,配套全自动化学发光分析仪,检测禽白血... [目的]建立1种检测禽白血病病毒的磁微粒化学发光免疫分析方法,为禽白血病的净化提供更高效的检测工具。[方法]采用双抗体夹心法原理,选用2株针对P27蛋白的单克隆抗体分别作为包被抗体和标记抗体,配套全自动化学发光分析仪,检测禽白血病病毒P27抗原参考阳性和参考阴性样本,系统优化包被抗体和标记抗体的工作浓度、反应时间、吸样量参数,并验证建立方法的特异性、最低检测限、重复性、加速稳定性、符合率。[结果]包被抗体和标记抗体的最佳工作浓度均为0.25μg/mL,最佳反应时间为20 min,最佳吸样量为10μL;建立的CLIA检测方法与其他禽类病原无交叉反应;用阴性细胞培养上清稀释样本时,最低检测限为1 pg/mL P27蛋白,用阴性蛋清稀释样本时,最低检测限为10 pg/mL P27蛋白;重复性试验中样本测值变异系数≤5%;试剂组分在2~8℃预估可保存12个月以上,与国产商品化ELISA试剂盒的总符合率达99.8%。[结论]本研究建立的禽白血病病毒磁微粒化学发光群特异抗原检测方法特异性高、灵敏度好,重复性、稳定性和准确度达到商品化试剂盒的标准,兼具自动化、操作简便的优势。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 P27蛋白 磁微粒化学发光免疫分析 ELISA

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顺磁性微粒子化学发光免疫分析法检测血清维生素B_(12)的性能评价 被引量：7

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作者 安崇文 李海霞 +2 位作者 孟群 胡建平 徐向东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1508-1513,共6页

目的：评估顺磁性微粒子化学发光免疫分析法（Chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA）检测血清维生素B12（Vitamin B12,VitB12）的分析性能。方法：应用美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP5-A2、EP15-A2、EP7-A2、EP6-A... 目的：评估顺磁性微粒子化学发光免疫分析法（Chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA）检测血清维生素B12（Vitamin B12,VitB12）的分析性能。方法：应用美国临床和实验室标准化协会（CLSI）EP5-A2、EP15-A2、EP7-A2、EP6-A、C28-A3c方法评价CMIA检测VitB12的精密度、正确度、抗干扰性、分析测量范围（AMR）、临床可报告范围（CRR）、生物参考区间。采用美国国家标准技术研究所（National Institute of Standards and Technology,NIST）有证参考物质SRM 1955、美国病理学家协会（CAP）发放的室间质评物（K-C）、校准验证/线性评价物（LN5-B）评估CMIA系统检测VitB12正确度。结果：VitB12在108.84~874.43 pmol/L时,批内、批间精密度均小于厂家声明的标准。正确度验证显示测定有证参考物质NIST SRM1955,结果符合验证要求;检测CAP室间质评物（K-C）、校准验证/线性评价物（LN5-B）显示,结果均符合CAP校准验证/线性评价误差界限所规定的标准,VitB12浓度在89~1 057 pmol/L范围内通过线性验证,95%验证区间也包含其指定均值,相对偏差均小于卫生部临床检验中心室间质量评价标准（TEa：靶值±25%）。抗干扰性评估显示在TG≤20 mmol/L、Bil≤300μmol/L、Vit C≤1.5 g/L时对VitB12检测系统（CMIA）无显著干扰。AMR验证判断最佳拟合方程为二元一次多项式,VitB12浓度在0~1 107 pmol/L范围内存在线性关系。CRR上限为110 700 pmol/L,最大稀释倍数为100倍。生物参考区间验证显示本研究选择的参考个体VitB12水平符合厂家试剂说明书给定参考区间,女性略高于男性,但无显著差异。结论：CMIA检测血清VitB12的各项性能指标基本满足实验室要求,其可为实验室提供可靠的VitB12结果,为实验室评价人群VitB12营养状况提供信息。 展开更多

关键词 维生素B12 微粒子化学发光免疫法 微粒子化学发光免疫分析仪

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化学发光微粒子免疫检测法筛查梅毒的结果分析 被引量：13

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作者 王克迪 苏建荣 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第4期519-522,共4页

目的应用全自动微粒子发光免疫分析仪(i2000)进行梅毒筛查,并通过梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponema pallidum particle agglutination assay,TPPA)进行确证,对采用化学发光微粒子免疫检测法(chemiluminescent microparticle immunoassa... 目的应用全自动微粒子发光免疫分析仪(i2000)进行梅毒筛查,并通过梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponema pallidum particle agglutination assay,TPPA)进行确证,对采用化学发光微粒子免疫检测法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CLIA)法筛查梅毒的结果进行分析。方法 36 000例标本均经过CLIA检测,以S/CO值大于1.0为阳性,阳性者进行TPPA确证,计算CLIA方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果以TPPA作为参考标准,CLIA的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100%、99.7%、68.3%和100%,当S/CO值为1.08时,Youden指数最大,敏感度为100%,特异度94.8%。结论 CLIA法是进行梅毒螺旋体感染初筛的可靠方法。 展开更多

关键词 化学发光微粒子免疫分析法 梅毒螺旋体 敏感度 特异度

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利用金磁微粒免疫化学发光技术检测高敏C反应蛋白 被引量：3

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作者 郭博阳 马乐 +4 位作者 张梦丹 杨江存 杜海平 马婷 崔亚丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1468-1472,1478,共6页

目的建立灵敏、准确的高敏C反应蛋白（hsCRP）检测方法。方法以金磁微粒为载体，辣根过氧化物酶．鲁米诺．双氧水为化学发光体系，建立hsCRP的检测方法。对方法的线性、灵敏度、精密度、准确性等进行评估。对233例临床样本进行检测，与... 目的建立灵敏、准确的高敏C反应蛋白（hsCRP）检测方法。方法以金磁微粒为载体，辣根过氧化物酶．鲁米诺．双氧水为化学发光体系，建立hsCRP的检测方法。对方法的线性、灵敏度、精密度、准确性等进行评估。对233例临床样本进行检测，与德国西门子散射比浊法检测结果进行比对。结果该方法在（0．15～25．00）mg／L范围内呈现优良线性（R^2=0．9937），最低检测限为0．076mg／L，批内精密度〈10．00％、批间精密度〈15．00％，平均回收率为97．80％。与德国西门子散射比浊法相比，具有相关性、一致性良好的特点。结论利用金磁微粒免疫化学发光技术可成功检测hsCRP。 展开更多

关键词 金磁微粒 夹心法 化学发光免疫分析 高敏C反应蛋白

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磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法测定抗中性粒细胞胞浆抗体的结果比较 被引量：13

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作者 张立娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1175-1178,共4页

目的:比较分析磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体的检测结果。方法:分别采用磁微粒化学发光法(A方法)和酶联免疫吸附法(B方法)对166例自身免疫病患者血清、50例健康者血清中抗PR3抗体、抗MPO抗体进行定量检测,... 目的:比较分析磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体的检测结果。方法:分别采用磁微粒化学发光法(A方法)和酶联免疫吸附法(B方法)对166例自身免疫病患者血清、50例健康者血清中抗PR3抗体、抗MPO抗体进行定量检测,对检测结果进行统计分析。结果:A方法测定高、中、低质控血清的批内和批间重复性优于B方法,A、B方法测定质控血清的准确度均符合要求;A、B方法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体临床样本的线性相关系数r分别为0.987 8,0.989 6;A、B方法的检测结果采用kappa分析,kappa系数分别为0.897和0.882。结论:磁微粒化学发光法(A方法)测定抗PR3抗体、抗MPO抗体优于酶联免疫吸附法(B方法),更符合临床应用要求。 展开更多

关键词 抗中性粒细胞胞浆抗体 髓过氧化物酶 蛋白酶3 酶联免疫吸附法 磁微粒化学发光法

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化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌 被引量：2

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作者 介明沙 蓝晟恺 +1 位作者 万嘉芸 李新燕 《粮食与油脂》 北大核心 2023年第11期144-148,共5页

建立化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌,并优化化学发光条件和免疫反应条件。结果表明:最佳发光条件为鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚的浓度分别为5.0×10^(-3)、1.76×10^(-2)、5.0×10^(-3)mol/L,辣根过氧化... 建立化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌,并优化化学发光条件和免疫反应条件。结果表明:最佳发光条件为鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚的浓度分别为5.0×10^(-3)、1.76×10^(-2)、5.0×10^(-3)mol/L,辣根过氧化物酶的质量浓度为5.0×10^(-5)mg/mL;最佳免疫条件为免疫磁珠用量50μL、一抗体积稀释比1∶8000;方法的检出限为3.0×10^(3)CFU/mL,回收率为87.94%~113.04%。建立的方法可用于牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的检测。 展开更多

关键词 化学发光磁酶免疫分析法 鼠伤寒沙门氏菌 牛奶

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脱氧雪腐镰刀菌烯醇的高灵敏化学发光磁酶免疫法检测 被引量：7

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作者 丁丽华 于斐 +4 位作者 张冠军 熊亚敏 刘利娥 吴拥军 玉崧成 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期134-137,共4页

目的:建立一种快速简便、灵敏度高的新型化学发光磁酶免疫法(MECLIA)检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。方法:制备Fe_3O_4@SiO_2@Au金磁复合微粒及DON与卵清蛋白(OVA)的复合物(OVA-DON);以Fe_3O_4@SiO_2@Au为固相载体,优化条件,使其表面负载... 目的:建立一种快速简便、灵敏度高的新型化学发光磁酶免疫法(MECLIA)检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。方法:制备Fe_3O_4@SiO_2@Au金磁复合微粒及DON与卵清蛋白(OVA)的复合物(OVA-DON);以Fe_3O_4@SiO_2@Au为固相载体,优化条件,使其表面负载OVA-DON形成DON金磁免疫复合微粒;以鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶-苯酚类化合物作为增强化学发光体系,建立MECLIA对小麦中DON进行检测,并对所建立的方法进行方法学评价。结果:该方法标准曲线方程为Y=-521 951X+2 883 979(X为DON质量浓度的对数,Y为化学发光值,R2=0.998 6),线性范围为0.10~20.00μg/L,检测限为31 ng/L;批内RSD为2.2%~3.5%,批间RSD为4.9%~9.6%,标准样品回收率为95.0%~108.0%,小麦样品回收率为92.0%~106.0%。结论:该研究建立的MECLIA灵敏度高、精密度好、操作简单,可用于大批量小麦样品中DON的快速检测。 展开更多

关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 金磁复合微粒 化学发光磁酶免疫法

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全自动磁微粒化学发光法快速筛查呋喃类药物残留 被引量：3

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作者 梁高道 毛翔 +4 位作者 黄常刚 赵沙沙 金伟 张德军 计梦琴 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期178-183,共6页

文章通过开发硝基呋喃类药物磁微粒化学发光试剂盒,建立了以磁微粒作为固相载体、化学发光作为检测信号的硝基呋喃类药物残留快速检测方法。结合全自动化学发光仪,用磁微粒化学发光酶联免疫法(MCLIA)同时对4种硝基呋喃类药物(呋喃西林... 文章通过开发硝基呋喃类药物磁微粒化学发光试剂盒,建立了以磁微粒作为固相载体、化学发光作为检测信号的硝基呋喃类药物残留快速检测方法。结合全自动化学发光仪,用磁微粒化学发光酶联免疫法(MCLIA)同时对4种硝基呋喃类药物(呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)和呋喃妥因代谢物(AHD))在不同来源的鸡肉样、鱼样中的残留量进行定量检测,并与基于超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱联用仪的国家标准方法的检测结果进行了对比。共检测鱼肉、猪肉、鸡肉和贝类样品等共计78个样本,与国家标准方法检测结果的符合率在98%以上。结果表明全自动微粒化学发光酶联免疫法具备有自动化程度高,多项目同时检测,检测效率高,检测结果准确可靠等优势,可用于硝基呋喃类药物残留的快速筛查。 展开更多

关键词 硝基呋喃类药物 磁微粒化学发光酶联免疫法 全自动化学发光

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牛奶过敏原β-乳球蛋白的重组制备及磁微粒化学发光检测法的建立 被引量：6

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作者 杭鑫茹 耿荣庆 钱林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期193-198,共6页

运用原核系统表达牛奶β-乳球蛋白(Bos d5)蛋白,建立一种纳米磁微粒化学发光方法用于检测牛奶组分过敏原β-乳球蛋白特异性Ig E抗体的含量。通过优化合成牛奶β-乳球蛋白基因,与质粒重组导入Rosetta原核表达菌株中表达目标蛋白,纯化的... 运用原核系统表达牛奶β-乳球蛋白(Bos d5)蛋白,建立一种纳米磁微粒化学发光方法用于检测牛奶组分过敏原β-乳球蛋白特异性Ig E抗体的含量。通过优化合成牛奶β-乳球蛋白基因,与质粒重组导入Rosetta原核表达菌株中表达目标蛋白,纯化的重组蛋白采用生物素标记后,在化学发光平台上进行过敏原项目检测。获得纯度﹥85%的22.5 kD重组牛β-乳球蛋白,将生物素化的重组蛋白用于牛奶β-乳球蛋白纳米磁微粒检测试剂盒,检测临床110例血清样本,和Phadia进行方法学比对阳性符合率为88.9%,阴性符合率97.3%,总符合率94.5%,P<0.001,χ^2=84.238,Kappa=0.874,其与Phadia参照试剂盒同样具有良好的检测能力。原核表达系统中获得的重组牛奶过敏组分β-乳球蛋白具有较好的免疫活性,开发的免疫诊断试剂盒具备良好的性能,可用于临床辅助诊断。 展开更多

关键词 牛奶 Β-乳球蛋白 过敏原 重组蛋白 纳米磁微粒化学发光免疫检测

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6种不同J亚群禽白血病病毒检测试剂盒的比较

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作者 赵方钰 崔慧珍 +4 位作者 王一新 常爽 任志浩 崔文平 赵鹏 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第4期62-69,共8页

为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,... 为了比较6种不同J亚群禽白血病病毒(ALV-J)检测试剂盒的检测结果,以更好地实施禽白血病净化和鸡苗洁净度评估。本试验首先将ALV-J参考株以卵黄囊接种感染无特定病原体(SPF)鸡胚构建雏鸡携带ALV-J模型,对出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,随后分别将胎粪滤液和血浆接种鸡胚成纤维传代(DF-1)细胞进行病毒培养,维持7 d时收取细胞上清,以A、B、C三家公司的ALV p27抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒以及商品化的磁微粒化学发光检测试剂盒、胶体金试纸条和实时荧光定量PCR检测试剂盒分别对胎粪、不同稀释度胎粪样品、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清进行检测。结果显示,6种不同试剂盒对胎粪、胎粪病毒分离细胞上清和血浆病毒分离细胞上清的检测结果判定总体一致,其中以磁微粒化学发光检测试剂盒读数判定最为直观,其阳性样品与阴性样品的读值区分明显、易于判断。对不同稀释度胎粪样品的检测结果显示,以A公司ALV p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒和实时荧光定量PCR检测试剂盒相对灵敏,可检出低滴度病原。结果表明,不同检测方法对ALV-J检测的整体判定差异不显著,但针对低滴度样品检测时不同方法的检出率有差异,需要根据情况选择方法。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒(ALV-J) P27抗原 酶联免疫吸附测定(ELISA) 磁微粒化学发光检测试剂盒 胶体金试纸条 实时荧光定量PCR

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三种临床常用的梅毒螺旋体抗体检测方法的比较和评价 被引量：11

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作者 甄珠 刘克芹 《海南医学院学报》 CAS 2015年第4期553-555,558,共4页

目的:比较和评价3种临床常用的梅毒螺旋体(TP)抗体检测方法,并重点关注酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗TP抗体时存在假阳性的问题。方法:收集赤峰市第二医院5 227名门诊及住院患者血清,用ELISA法进行检测得到抗TP抗体阳性患者的血清,再... 目的:比较和评价3种临床常用的梅毒螺旋体(TP)抗体检测方法,并重点关注酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗TP抗体时存在假阳性的问题。方法:收集赤峰市第二医院5 227名门诊及住院患者血清,用ELISA法进行检测得到抗TP抗体阳性患者的血清,再用微粒子化学发光免疫分析法(CLIA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)对ELISA法梅毒螺旋体抗体阳性标本进行检测,对结果进行统计分析。结果:3种方法中,ELISA法检出121例阳性结果,CLIA法和TPPA法分别检出98例和96例阳性结果。以TPPA法为确证方法,ELISA法假阳性率最高,CLIA和TPPA两种方法比较无统计学意义(P>0.05);ELISA方法中,老年组的假阳性率明显高于中青年组(假阳性率分别为0.75%和0.33%)。结论:CLIA法与TPPA法均可作为梅毒抗体的确证试验;用ELISA法检测梅毒抗体时,老年人假阳性率较高,在临床工作中应慎重对待。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 酶联免疫吸附试验 微粒子化学发光免疫分析法 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集

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