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转录因子CREA敲除对黑曲霉形态和分泌β-葡萄糖苷酶的影响
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作者 程慧娟 王昕 +4 位作者 石小涛 马东旭 龚大春 胡骏鹏 谢智文 《生物技术通报》 北大核心 2025年第6期344-354,共11页
【目的】在黑曲霉中敲除转录因子CREA,探究其对菌丝发育和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL)表达的调控作用,为开发高产BGL的细胞工厂提供有效的调控改造靶点。【方法】以黑曲霉菌株An-1为研究对象,构建敲除cre A基因的操作质粒和供体... 【目的】在黑曲霉中敲除转录因子CREA,探究其对菌丝发育和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL)表达的调控作用,为开发高产BGL的细胞工厂提供有效的调控改造靶点。【方法】以黑曲霉菌株An-1为研究对象,构建敲除cre A基因的操作质粒和供体片段。经原生质体转化、抗性筛选和菌丝PCR验证,利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,获得敲除菌株Δcre A。通过平板培养和摇瓶发酵,分别考察转录因子CREA对菌体形态和产BGL的影响,并在不同浓度葡萄糖下,探究碳阻遏效应对BGL生物合成的影响。【结果】在黑曲霉菌株An-1中对cre A基因进行了精准敲除,获得缺失突变菌株Δcre A。与野生型菌株相比,Δcre A菌株的菌落形态呈现车轮状褶皱,在七叶苷显色平板上表现出较强的β-葡萄糖苷酶分泌能力。以纤维二糖和p-硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,Δcre A菌株的BGL活性分别为野生型菌株的1.5倍和1.8倍。荧光定量PCR显示,cre A的敲除使bgl A基因的表达量提升了8.4倍。在添加不同浓度葡萄糖的发酵过程中,Δcre A菌株的酶活水平始终高于野生型,表现出脱碳阻遏效应。【结论】CREA转录因子调控黑曲霉的菌丝发育和BGL表达,其敲除减轻了碳阻遏效应,提高了黑曲霉产BGL的能力,为调控改造黑曲霉以优化BGL的生产性能提供了理论支持。 展开更多
关键词 黑曲霉 Β-葡萄糖苷酶 转录因子 CRISPR-Cas9 基因敲除 碳阻遏效应
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代谢调控蛋白A调控革兰阳性菌代谢与毒力偶联的研究进展
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作者 杨紫瑜 秦娟秀 +1 位作者 李敏 刘倩 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期535-539,共5页
代谢调控蛋白A(catabolite control protein A,CcpA)是革兰阳性菌重要的多效调节因子,在磷酸烯醇丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统辅助下,能与靶基因上的特异性DNA序列——代谢反应元件结合,促进或阻遏靶基因表达,从而调控细菌的生理过程和... 代谢调控蛋白A(catabolite control protein A,CcpA)是革兰阳性菌重要的多效调节因子,在磷酸烯醇丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统辅助下,能与靶基因上的特异性DNA序列——代谢反应元件结合,促进或阻遏靶基因表达,从而调控细菌的生理过程和毒力。CcpA通过介导微生物碳分解代谢物阻遏效应,控制细菌摄取与利用外界环境中营养物质,保障其高效利用能源。CcpA通过直接或间接调控细菌的代谢过程和毒力基因表达,将细菌的代谢与毒力偶联。该文介绍了CcpA的作用机制及其对细菌多种代谢途径和致病性调控的研究进展。 展开更多
关键词 代谢调控蛋白A(CcpA) 分解代谢物效应(CCR) 代谢 毒力
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