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绿色木霉碱性蛋白酶基因TvALP的克隆与原核表达
被引量：
1
1
作者
徐杨玉
刘付香
+6 位作者
洪彦彬
陈小平
李海芬
温世杰
李杏瑜
李玲
梁炫强
《热带生物学报》
2024年第6期683-690,共8页
基于绿色木霉中抗菌蛋白质的de-novo质谱测定得到的部分肽段序列,通过BLASTp数据库检索,发现该肽段由碱性蛋白酶基因编码,采取同源克隆技术扩增出目的基因片段。生物信息学分析揭示,TvALP基因(GenBank编号KJ659907)完整开放读码框为1 23...
基于绿色木霉中抗菌蛋白质的de-novo质谱测定得到的部分肽段序列,通过BLASTp数据库检索,发现该肽段由碱性蛋白酶基因编码,采取同源克隆技术扩增出目的基因片段。生物信息学分析揭示,TvALP基因(GenBank编号KJ659907)完整开放读码框为1 230 bp,并编码了一个由409个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白质的预测分子量约为43 kD,且含有一段由20个氨基酸组成的信号肽。根据分类,该蛋白质属于Peptidase inhibitor_I9超家族,并且是枯草杆菌蛋白酶家族丝氨酸蛋白酶S8家族的一个成员。利用双酶切法将测序正确的质粒连接至原核表达载体pET30a中,在宿主菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达。结果在45 kD处显示出1条特异蛋白质条带,与生物性信息预测目的蛋白大小一致,表明切除信号肽的表达质粒pET30a-ΔTvALP(“Δ”表示切除信号肽)在宿主菌BL21(DE3)pLysS中成功表达。经超声波破碎后,蛋白形成了包涵体。但经体外复性技术,未能获得有活性的蛋白进行抗菌机理研究。
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关键词
绿色木霉
碱性蛋白酶基因
原核表达
包涵体
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职称材料
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析
被引量：
12
2
作者
黄庆
潘皎
+2 位作者
彭勇
李昕
张义正
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2004年第2期31-35,共5页
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离，并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果，且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定，以...
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离，并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果，且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定，以及对该序列的同源性分析后，设计出相应引物，用PCR方法扩增了该菌株的碱性蛋白酶基因AP。测序结果表明，该克隆基因全长1588bp，有一个全长1149bp的编码区序列，推测蛋白质序列长383个氨基酸残基，成熟肽分子量为27．8kD。推测的成熟蛋白酶N′-末端具有与DHAPN′-末端完全匹配的序列，说明克隆到的基因为脱毛蛋白酶基因。同源性分析表明，该基因序列与已报道的其他碱性蛋白酶基因有较高的同源性。
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关键词
短小芽孢杆菌
碱性蛋白酶基因
PCR
基因
克隆
序列分析
制革业
脱毛工艺
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职称材料
降解乳蛋白菌株中蛋白酶基因的克隆及分析
被引量：
1
3
作者
徐速
刘晓辉
徐香玲
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2010年第6期8-12,共5页
从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06中克隆蛋白酶基因apr,分析蛋白酶基因apr结构,预测蛋白酶性质。以PCR方法从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中扩增一碱性蛋白酶基因apr片段,对其克隆测序;提取菌体总R...
从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06中克隆蛋白酶基因apr,分析蛋白酶基因apr结构,预测蛋白酶性质。以PCR方法从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中扩增一碱性蛋白酶基因apr片段,对其克隆测序;提取菌体总RNA,进行RT-PCR;地高辛随机引物法标记探针,进行菌落原位杂交。结果表明,从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中克隆到碱性蛋白酶基因apr,ORF1146bp编码382个氨基酸,理论分子量为39 ku,信号肽长30个氨基酸,是分泌型蛋白酶,蛋白酶原352个氨基酸,成熟酶275个氨基酸,GC含量51.4%,理论分子量为27.4 ku。RT-PCR、菌落原位杂交方法证实该基因的存在与表达。
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关键词
降解乳
蛋白
碱性蛋白酶基因
克隆
分析
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职称材料
题名
绿色木霉碱性蛋白酶基因TvALP的克隆与原核表达
被引量：
1
1
作者
徐杨玉
刘付香
洪彦彬
陈小平
李海芬
温世杰
李杏瑜
李玲
梁炫强
机构
广东省农业科学院作物研究所
广东农垦热带农业研究院有限公司
广东省中山市实验中学
华南师范大学生命科学学院
出处
《热带生物学报》
2024年第6期683-690,共8页
基金
2023年国家花生产业技术体系遗传改良研究室岗位科学家项目(CARS-13)
广东省自然科学基金重点项目(07117967)。
文摘
基于绿色木霉中抗菌蛋白质的de-novo质谱测定得到的部分肽段序列,通过BLASTp数据库检索,发现该肽段由碱性蛋白酶基因编码,采取同源克隆技术扩增出目的基因片段。生物信息学分析揭示,TvALP基因(GenBank编号KJ659907)完整开放读码框为1 230 bp,并编码了一个由409个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白质的预测分子量约为43 kD,且含有一段由20个氨基酸组成的信号肽。根据分类,该蛋白质属于Peptidase inhibitor_I9超家族,并且是枯草杆菌蛋白酶家族丝氨酸蛋白酶S8家族的一个成员。利用双酶切法将测序正确的质粒连接至原核表达载体pET30a中,在宿主菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达。结果在45 kD处显示出1条特异蛋白质条带,与生物性信息预测目的蛋白大小一致,表明切除信号肽的表达质粒pET30a-ΔTvALP(“Δ”表示切除信号肽)在宿主菌BL21(DE3)pLysS中成功表达。经超声波破碎后,蛋白形成了包涵体。但经体外复性技术,未能获得有活性的蛋白进行抗菌机理研究。
关键词
绿色木霉
碱性蛋白酶基因
原核表达
包涵体
Keywords
Trichoderma viride
alkaline proteinase gene
prokaryotic expression
inclusion bodies
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析
被引量：
12
2
作者
黄庆
潘皎
彭勇
李昕
张义正
机构
四川大学生命科学学院分子生物学实验室四川省分子生物学及生物技术重点实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2004年第2期31-35,共5页
文摘
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离，并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果，且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定，以及对该序列的同源性分析后，设计出相应引物，用PCR方法扩增了该菌株的碱性蛋白酶基因AP。测序结果表明，该克隆基因全长1588bp，有一个全长1149bp的编码区序列，推测蛋白质序列长383个氨基酸残基，成熟肽分子量为27．8kD。推测的成熟蛋白酶N′-末端具有与DHAPN′-末端完全匹配的序列，说明克隆到的基因为脱毛蛋白酶基因。同源性分析表明，该基因序列与已报道的其他碱性蛋白酶基因有较高的同源性。
关键词
短小芽孢杆菌
碱性蛋白酶基因
PCR
基因
克隆
序列分析
制革业
脱毛工艺
分类号
TS541 [轻工技术与工程—皮革化学与工程]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
降解乳蛋白菌株中蛋白酶基因的克隆及分析
被引量：
1
3
作者
徐速
刘晓辉
徐香玲
机构
东北农业大学食品学院
中国农业大学食品科学与营养工程学院
哈尔滨师范大学生命科学与技术学院
出处
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2010年第6期8-12,共5页
文摘
从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06中克隆蛋白酶基因apr,分析蛋白酶基因apr结构,预测蛋白酶性质。以PCR方法从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中扩增一碱性蛋白酶基因apr片段,对其克隆测序;提取菌体总RNA,进行RT-PCR;地高辛随机引物法标记探针,进行菌落原位杂交。结果表明,从降解乳蛋白菌株Bacillus subtilis strain ZJ06基因组中克隆到碱性蛋白酶基因apr,ORF1146bp编码382个氨基酸,理论分子量为39 ku,信号肽长30个氨基酸,是分泌型蛋白酶,蛋白酶原352个氨基酸,成熟酶275个氨基酸,GC含量51.4%,理论分子量为27.4 ku。RT-PCR、菌落原位杂交方法证实该基因的存在与表达。
关键词
降解乳
蛋白
碱性蛋白酶基因
克隆
分析
Keywords
milk-protein degradation
alkaline protease gene
clone
analyses.
分类号
Q93-3 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
绿色木霉碱性蛋白酶基因TvALP的克隆与原核表达
徐杨玉
刘付香
洪彦彬
陈小平
李海芬
温世杰
李杏瑜
李玲
梁炫强
《热带生物学报》
2024
1
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职称材料
2
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析
黄庆
潘皎
彭勇
李昕
张义正
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2004
12
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
降解乳蛋白菌株中蛋白酶基因的克隆及分析
徐速
刘晓辉
徐香玲
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2010
1
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职称材料
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