橡胶树硫氧还蛋白基因HbTRXo2克隆、表达及功能分析

1

作者 杨娜 吴双 +5 位作者 逯锐琳 何其光 胡义钰 朱春梅 王真辉 刘辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期1999-2009,共11页

硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分... 硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分子量为21.90 kDa,理论等电点为7.59。蛋白保守结构域和系统进化分析结果显示,HbTRXo2含有TRX保守结构域,与其他植物o型硫氧还蛋白聚在一起,表明该蛋白属于o型硫氧还蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,HbTRXo2基因在橡胶树根、树皮、胶乳、成熟叶、衰老叶、新梢、雌花和雄花组织中均表达,其中在胶乳中的表达量显著高于其他组织。同健康橡胶树相比,割面干涸橡胶树树皮和胶乳中HbTRXo2的表达量显著降低。在低温、聚乙二醇(PEG)诱导的干旱以及过氧化氢(H_(2)O_(2))和甲基紫精(MV)诱导的氧化胁迫处理下,HbTRXo2基因的表达显著上调,表明该基因参与了橡胶树对非生物胁迫的应答。为了研究HbTRXo2在抗逆中的功能,本研究构建其酵母表达载体,并转入酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)。比较重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)和转空载体对照酵母INVSc1(pYES2)在H_(2)O_(2)、PEG和低温胁迫处理后的存活差异。结果显示,重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)在PEG和H_(2)O_(2)处理后的存活率明显高于对照酵母,而在低温胁迫处理后的存活率明显低于对照酵母,表明转HbTRXo2基因提高了重组酵母对干旱和氧化胁迫的抗性,但降低了对低温胁迫的抗性。以上研究结果证明,HbTRXo2在橡胶树产排胶和抗逆过程中起着重要作用。本研究为进一步解析HbTRXo2在橡胶树中的生物学功能提供重要的参考依据。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白 橡胶树 基因表达 酵母表达 抗氧化性 非生物逆境胁迫

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反义TRX s基因对转基因小麦籽粒硫氧还蛋白还原活性的影响 被引量：5

2

作者 尹钧 李志岗 +3 位作者 任江萍 周苏玫 李磊 李永春 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1344-1348,共5页

以转反义TRX s基因小麦纯合系为材料,分析了转基因小麦TRX h活性和清蛋白、球蛋白、谷蛋白和麦醇溶蛋白各组分及其还原状态的变化。结果表明,不同成熟期转基因小麦籽粒和胚乳中TRX h活性平均比对照降低76.2%和14.2%,其籽粒中的清蛋白、... 以转反义TRX s基因小麦纯合系为材料,分析了转基因小麦TRX h活性和清蛋白、球蛋白、谷蛋白和麦醇溶蛋白各组分及其还原状态的变化。结果表明,不同成熟期转基因小麦籽粒和胚乳中TRX h活性平均比对照降低76.2%和14.2%,其籽粒中的清蛋白、球蛋白、麦醇溶蛋白和谷蛋白巯基含量平均比对照分别低41%、44%、14%和13%,胚乳中分别比对照低37%、17%、45%和6%,而不同成熟期转基因小麦籽粒和胚乳中4种蛋白组分含量比对照都相应提高。说明导入的反义TRX s基因对小麦TRX h基因表达有显著(P<0.05)的抑制作用,进而影响TRX h对各蛋白组分的还原作用,造成还原态蛋白组分(巯基含量)降低,被动员消耗的蛋白质数量减少,而各蛋白组分含量显著(P<0.05)高于对照。本研究结果为转反义TRX s基因小麦种子发芽延缓和抗穗发芽特性提供了直接的证据。 展开更多

关键词 反义trx s基因 小麦 硫氧还蛋白 琉基 蛋白质

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应答非生物胁迫的甘蔗硫氧还蛋白基因ScTRXh2的克隆 被引量：1

3

作者 傅志伟 郭晋隆 +1 位作者 陈云 许莉萍 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第2期165-171,共7页

从甘蔗蔗茎cDNA文库中获得1个TRXⅠ类第3亚组成员的硫氧还蛋白家族基因全长cDNA序列,命名为ScTRXh2(登录号:KF921298).该基因全长752 bp,开放阅读框长381 bp,5'非翻译区长57 bp,3'非翻译区长314 bp,编码126个氨基酸残基,氨基酸... 从甘蔗蔗茎cDNA文库中获得1个TRXⅠ类第3亚组成员的硫氧还蛋白家族基因全长cDNA序列,命名为ScTRXh2(登录号:KF921298).该基因全长752 bp,开放阅读框长381 bp,5'非翻译区长57 bp,3'非翻译区长314 bp,编码126个氨基酸残基,氨基酸序列与拟南芥TRXs具有高度同源性.实时定量PCR检测显示,该基因在甘蔗中为组成型表达,叶片和蔗茎中的表达量显著高于根和芽.在H2O2和PEG逆境胁迫下,甘蔗ScTRXh2基因的应答模式基本相同,呈现初期(3 h)略微下调,早中期(6 h或12 h)表达量明显上调,中后期(24、48、72 h)显著下调并维持基本稳定的低水平表达.甘蔗ScTRXh2基因对NaCl胁迫的应答较快,虽然也呈现中期(12 h)表达量显著上调,后期(24、48、72 h)显著下调并维持基本稳定的低水平表达,但表达模式与H2O2和PEG胁迫应答有明显不同,表现在胁迫初期(3 h)基因表达显著下调.上述结果提示,甘蔗ScTRXh2基因积极应答非生物逆境H2O2、PEG和NaCl的胁迫,在应答的基因表达谱模式上存在一些差异. 展开更多

关键词 甘蔗 硫氧还蛋白 实时荧光定量PCR 基因克隆 基因表达

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青蛤(Cyclina sinensis)金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因的克隆与表达分析 被引量：10

4

作者 吕达 罗凯娅 +1 位作者 潘宝平 高虹 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期47-51,共5页

利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5... 利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5个氨基酸构成的活性中心。采用实时定量PCR方法分析了两种基因在Cd2+胁迫下的表达变化,结果显示,金属硫蛋白基因在Cd2+胁迫下6—12hmRNA表达量急剧上升,与对照组有显著性差异(P<0.01)。硫氧还蛋白基因在Cd2+胁迫下mRNA在6h明显升高,在6—24h与对照组出现显著性差异(P<0.05)。说明Cd2+能够诱导青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白基因表达的时序性升高,二者的转录过程反映了贝类抵御重金属胁迫的分子调控过程。 展开更多

关键词 青蛤 金属硫蛋白(MTs) 硫氧还蛋白(trx) 基因表达

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甜橙硫氧还蛋白基因CsTRXh1克隆与表达分析 被引量：1

5

作者 王淘 杨澄 +2 位作者 闫亚娜 王雨潇 李瑞民 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期880-885,共6页

[目的]通过甜橙硫氧还蛋白基因CsTRXh1克隆与表达分析,以期为解析甜橙硫氧还蛋白基因的功能及胁迫应答机制提供参考依据。[方法]基于甜橙基因组数据使用同源克隆法克隆甜橙硫氧还蛋白基因,利用生物信息学分析CsTRXh1蛋白与其他物种同源... [目的]通过甜橙硫氧还蛋白基因CsTRXh1克隆与表达分析,以期为解析甜橙硫氧还蛋白基因的功能及胁迫应答机制提供参考依据。[方法]基于甜橙基因组数据使用同源克隆法克隆甜橙硫氧还蛋白基因,利用生物信息学分析CsTRXh1蛋白与其他物种同源蛋白的相似性、系统进化和理化性质,使用qRT-PCR方法分析CsTRXh1基因在健康甜橙树和感染黄龙病甜橙树叶片中的表达模式,通过瞬时转化烟草叶片分析CsTRXh1蛋白在植物细胞中的亚细胞定位。[结果]获得1个甜橙硫氧还蛋白基因CsTRXh1,GenBank登录号为ON125405。蛋白质序列比对分析表明,CsTRXh1与其他植物来源的硫氧还蛋白具有较高的序列相似度,包含保守结构域Thioredoxin。聚类分析表明,CsTRXh1为h型硫氧还蛋白。表达分析结果表明,CsTRXh1基因在感染黄龙病甜橙叶片中上调表达。亚细胞定位分析表明,CsTRXh1定位于细胞质和细胞膜。[结论]CsTRXh1基因受黄龙病菌侵染诱导表达,推测CsTRXh1在黄龙病菌侵染柑橘过程中参与生理生化调控功能。 展开更多

关键词 甜橙 硫氧还蛋白 基因克隆 表达分析 亚细胞定位

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海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒硫氧还蛋白(TRX)基因的克隆及生物信息学分析 被引量：5

6

作者 张彦锋 刘静雯 +1 位作者 张稚兰 董双林 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期293-300,共8页

首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推... 首次从海洋球石藻病毒(Emiliania huxleyi virus-EhV99B1)中克隆了硫氧还蛋白(Trx)基因(该序列已提交GenBank,登录号:GU109280)。系统进化关系分析表明:EhV99B1-Trx与GenBank中已报道的EhV86-Trx(NC_007346)有很高的同源性,核酸及其推导的氨基酸序列的同源性分别为98%和100%,而与其它物种的Trx序列同源性仅为9.8%-18.8%。采用生物信息学方法和工具分析了EhV99B1-Trx的生化参数,预测了该蛋白的高级结构。结果表明:(1)EhV99B1-Trx基因的开放阅读框全长591bp,编码196个氨基酸,蛋白的相对分子量为22.1kDa,理论等电点为5.27;(2)EhV-99B1-Trx N端蛋白结构域具有保守的Cys-Gly-Pro-Cys(CGPC)硫氧还蛋白氧化还原活性位点氨基酸基序;(3)对该蛋白二、三级结构分析预测结果进一步证实EhV99B1-Trx基因编码的为一种新型的硫氧还蛋白家族成员。 展开更多

关键词 海洋球石藻病毒(EhV) 硫氧还蛋白(trx) 基因克隆及生物信息学分析

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铁皮石斛硫氧还蛋白基因(DoTrxL2)的克隆及表达分析 被引量：3

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作者 范静 毛欢 +3 位作者 刘楚琪 龙涛 周康 王万军 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期18-22,共5页

运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC... 运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC功能结构域,通过两个半胱氨酸的双硫键得失电子,起到氧化还原作用。分子进化分析显示,DoTrxL2同小兰屿蝴蝶兰、石刁柏亲缘关系较近。qRT-PCR分析显示,DoTrxL2在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有表达差异,其中在原球茎形成早期表达量较高,表明该基因对原球茎形成有着促进作用;而在种子和花中表达量高,表明该基因对植物组织的生殖发育具有重要调控作用。 展开更多

关键词 铁皮石斛 硫氧还蛋白基因 RACE 实时荧光定量PCR

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日本凋毛藻(Griffithsiajaponica)硫氧还蛋白基因及其编码的蛋白特征

8

作者 刘晨临 黄晓航 +2 位作者 LEE Yookyung LEE Hungkum 李光友 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期54-59,共6页

从日本凋毛藻的表达序列标记 EST库中筛选到 2 条全长的编码硫氧还蛋白的 cDNA序列,分别命名为GjTRX1和GjTRX2。将这2条基因编码的蛋白序列与其它藻类(包括酵母)进行比较,结果表明不同物种及同一物种间TRX的相似性都较差,除GjTRX2编码... 从日本凋毛藻的表达序列标记 EST库中筛选到 2 条全长的编码硫氧还蛋白的 cDNA序列,分别命名为GjTRX1和GjTRX2。将这2条基因编码的蛋白序列与其它藻类(包括酵母)进行比较,结果表明不同物种及同一物种间TRX的相似性都较差,除GjTRX2编码的蛋白序列外,所有蛋白在活性位点序列 WCGPC处都完全保守。推测GjTRX1属于细胞质内分布的硫氧还蛋白。GjTRX1序列推导的蛋白二级结构单元与以往报道的传统上保守的TRX的二级结构单元类型一致,但是顺序有所不同。 展开更多

关键词 日本凋毛藻 表达序列标记 硫氧还蛋白基因

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花生硫氧还蛋白AhTRX h基因的克隆及表达分析 被引量：2

9

作者 李霞 潘春柳 +4 位作者 苏桂军 詹洁 王爱勤 肖冬 何龙飞 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1252-1260,共9页

h型硫氧还蛋白(TRX h)是最多的一类硫氧还蛋白,在种子萌发、氧化还原、信号传递以及响应生物和非生物胁迫等多种途径中起重要作用。以花生铝敏感品种‘中花2号’和耐铝品种‘99-1507’为材料,对h型硫氧还蛋白亚族成员AhTRX h进行克隆和... h型硫氧还蛋白(TRX h)是最多的一类硫氧还蛋白,在种子萌发、氧化还原、信号传递以及响应生物和非生物胁迫等多种途径中起重要作用。以花生铝敏感品种‘中花2号’和耐铝品种‘99-1507’为材料,对h型硫氧还蛋白亚族成员AhTRX h进行克隆和表达分析。结果表明:该基因包含长为429 bp的完整开放阅读框,编码142个氨基酸;进化树分析表明,花生TRX h与鹰嘴豆TRX h、拟南芥TH9亲缘关系较近,且含有保守活性位点WCGPC;亚细胞定位显示,AhTRX h定位于叶绿体;构建原核表达重组质粒pGEX-6p-1-AhTRX h,转化大肠杆菌Rosetta菌种,在上清和沉淀均有表达,纯化获得可溶的具活性的重组蛋白,体外检测重组蛋白没有明显的发生亚硝基化的趋势。酵母双杂显示,AhTRX h蛋白没有自激活性,筛选花生文库获得互作蛋白——钙网蛋白和金属硫蛋白。该结果表明AhTRX h可能通过与钙网蛋白和金属硫蛋白相互作用,参与花生对铝胁迫响应。 展开更多

关键词 花生 硫氧还蛋白 铝胁迫 基因克隆

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反义trxs基因的导入对小麦种子发芽的影响 被引量：28

10

作者 刘雷 尹钧 +1 位作者 任江萍 韩锦峰 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期801-805,共5页

用基因枪将反义trxs基因导入小麦幼胚 ,经组织培养获得了抗性再生植株。PCR及限制酶切检测显示 ,反义trxs基因在转基因植株中基本完整。生化指标测定及发芽特性试验表明 ,与对照相比 ,转基因籽粒中Trxh活性明显降低 ;水溶蛋白和醇溶蛋... 用基因枪将反义trxs基因导入小麦幼胚 ,经组织培养获得了抗性再生植株。PCR及限制酶切检测显示 ,反义trxs基因在转基因植株中基本完整。生化指标测定及发芽特性试验表明 ,与对照相比 ,转基因籽粒中Trxh活性明显降低 ;水溶蛋白和醇溶蛋白中巯基含量比率以及α 淀粉酶活性都有所下降 ;转基因种子的发芽势明显降低 ,但种子最终发芽率变化不大。 展开更多

关键词 反义trxs基因 小麦 种子发芽率 硫氧还蛋白h 转基因

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谷氧还蛋白1和硫氧还蛋白1基因在云南乌金猪不同组织中的表达特点及L-组氨酸对其在氧化应激细胞中表达的影响 被引量：8

11

作者 张春勇 陈克嶙 +1 位作者 黄金昌 郭荣富 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2415-2423,共13页

本试验旨在研究抗氧化基因谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)在云南乌金猪脑垂体、下丘脑、甲状腺、胸腺、胰腺、生殖腺、肝脏、皮肤、十二指肠、空肠、回肠11种组织中的差异表达,探讨L-组氨酸对乌金猪氧化应激细胞中GRX1、TRX1基... 本试验旨在研究抗氧化基因谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)在云南乌金猪脑垂体、下丘脑、甲状腺、胸腺、胰腺、生殖腺、肝脏、皮肤、十二指肠、空肠、回肠11种组织中的差异表达,探讨L-组氨酸对乌金猪氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因表达的调节作用。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测乌金猪组织中GRX1、TRX1基因表达;以过氧化氢(H2O2)为氧化应激源建立氧化应激细胞模型,探讨L-组氨酸对GRX1、TRX1基因表达的调节作用。结果表明:1)GRX1、TRX1基因在乌金猪被检测组织中均有表达,肝脏表达量最高,其次是皮肤、空肠,其他组织中的表达量相对较低;2)乌金猪组织中TRX1基因表达量明显高于G RX1基因表达量;3)细胞培养结果表明,受到H2O2刺激时,氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,L-组氨酸对氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达具有调节作用,其适宜浓度约为280μg/mL。乌金猪GRX1、TRX1基因表达具有明显组织特异性,H2O2可诱导氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,添加适宜浓度的L-组氨酸可以调节氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达。结果提示,通过营养途径可诱导乌金猪体内G RX1、TRX1基因的表达,这是缓解机体氧化应激损伤和增强抗氧化能力的一种有效方式。 展开更多

关键词 乌金猪 氧化应激 谷氧还蛋白1 硫氧还蛋白1 基因表达 L-组氨酸

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转反义Trxs基因小麦灌浆期内源Trxh基因表达及淀粉酶活性的研究 被引量：2

12

作者 任江萍 赵安民 +3 位作者 王新国 李永春 牛洪斌 尹钧 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期893-897,共5页

为了进一步揭示反义Trxs基因在抗穗发芽小麦中的作用机理,以转反义Trxs基因的T4代转基因株系（以豫麦70为受体）为材料,运用RT-PCR检测和酶活性测定方法,对其灌浆过程中硫氧还蛋白h（Trxh）基因在不同水平上的表达方式以及α-淀粉酶活... 为了进一步揭示反义Trxs基因在抗穗发芽小麦中的作用机理,以转反义Trxs基因的T4代转基因株系（以豫麦70为受体）为材料,运用RT-PCR检测和酶活性测定方法,对其灌浆过程中硫氧还蛋白h（Trxh）基因在不同水平上的表达方式以及α-淀粉酶活性进行了检测。结果表明,转基因小麦籽粒中内源Trxh基因mRNA转录量、Trxh硫氧还蛋白h活性和α-淀粉酶活性均显著低于未转基因的,平均分别比未转基因籽粒下降了21.1%,23.2%和12.6%。其中,花后25-30 d抑制作用最大。回归分析表明,Trxh基因表达量与Trxh活性、α-淀粉酶活性均呈极显著或显著正相关。说明反义Trxs基因的导入干扰或部分抑制了小麦内源同源基因的表达,致使Trxh表达量减少,Trxh活性降低,从而导致了α-淀粉酶活性的降低。 展开更多

关键词 转基因小麦 反义trxs基因 反转录聚合酶链式反应 硫氧还蛋白h Α-淀粉酶

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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析 被引量：5

13

作者 李航 李文卉 +6 位作者 李永光 苟惠天 王艳华 张德林 贾万忠 史大中 付宝权 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期708-711,共4页

目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化... 目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx) 基因表达 抗原性

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柽柳中一种新型硫氧还蛋白H基因的克隆与鉴定（英文） 被引量：2

14

作者 宋鑫 董京祥 +2 位作者 李开隆 李洪娇 李慧玉 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期340-346,354,共8页

硫氧还蛋白对维持生物体内稳定的氧化还原状态发挥着重要作用。为了研究硫氧还蛋白在非生物胁迫条件下的功能,我们从柽柳的cDNA文库中分离出来一条新的硫氧还蛋白cDNA序列,命名为ThTrx1。生物信息学分析表明,ThTrx1是硫氧还蛋白h亚家族... 硫氧还蛋白对维持生物体内稳定的氧化还原状态发挥着重要作用。为了研究硫氧还蛋白在非生物胁迫条件下的功能,我们从柽柳的cDNA文库中分离出来一条新的硫氧还蛋白cDNA序列,命名为ThTrx1。生物信息学分析表明,ThTrx1是硫氧还蛋白h亚家族的一个新成员,属于h1亚族。我们采用实时定量RT-PCR的方法检测在不同非生物胁迫(NaCl,PEG,CdCl2,低温和ABA)下,ThTrx1基因在刚毛柽柳根和叶中的表达。结果表明,在NaCl,PEG,CdCl2和ABA处理条件下,ThTrx1在柽柳根和叶中的mRNA水平都是上调表达。而在低温胁迫下,ThTrx1下调表达。我们通过Thrx1基因在大肠杆菌中的表达来分析它对于细菌生长和耐受性的影响。结果表明,含重组质粒的大肠杆菌(pET32a-Trx1)与对照相比,对于盐,金属离子和干旱胁迫体现出更高的耐受性。我们的结果表明,该ThTrx1是参与非生物胁迫应答,并且受依赖ABA信号转导途径的调节。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白 基因表达 非生物胁迫应答 刚毛柽柳

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土壤宏基因组中硫氧还蛋白还原酶部分序列的克隆 被引量：2

15

作者 李亚楠 刘晶晶 +1 位作者 胡美英 范继巧 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期585-589,共5页

为探明硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在微生物中的保守性,利用宏基因组技术从农药厂废水淤泥中提取环境DNA,并以其为模板直接采用PCR方法进行TrxR基因克隆,最终获得了硫氧还蛋白还原酶基因的部分序列片段。该片段全长476 bp,通过多序列比对及... 为探明硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在微生物中的保守性,利用宏基因组技术从农药厂废水淤泥中提取环境DNA,并以其为模板直接采用PCR方法进行TrxR基因克隆,最终获得了硫氧还蛋白还原酶基因的部分序列片段。该片段全长476 bp,通过多序列比对及进化树分析,发现其与海杆菌、假单胞菌硫氧还蛋白还原酶基因序列的同源性高达80%以上,氨基酸序列同源性达98%以上,在进化中具有高度的保守性。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白还原酶 基因克隆 土壤宏基因组 进化树

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转TrxS基因大麦Y001籽粒灌浆期淀粉酶活性变化研究 被引量：1

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作者 邓德芝 牛洪斌 +4 位作者 卫丽 尹钧 李巧云 陈小霞 彭博 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第12期26-29,共4页

对过量表达PaTrxS基因的T4代稳定大麦品系Y001不同灌浆期种子中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的变化进行了动态跟踪。经PCR检测,转基因大麦豫啤1号(YP1)植株均出现了886 bp的目的带,说明目的基因已经整合到大麦基因组上。对不同发育时期转... 对过量表达PaTrxS基因的T4代稳定大麦品系Y001不同灌浆期种子中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的变化进行了动态跟踪。经PCR检测,转基因大麦豫啤1号(YP1)植株均出现了886 bp的目的带,说明目的基因已经整合到大麦基因组上。对不同发育时期转基因种子和对照种子的α-淀粉酶和β-淀粉酶活性进行测定,结果表明:转TrxS基因种子的α-淀粉酶活性在花后30 d内均比对照高,且峰值出现较对照早5 d;β-淀粉酶活性在整个籽粒发育时期都明显高于对照,差异达到极显著水平。表明TrxS基因对啤酒大麦的淀粉酶活性有促进作用。同时转基因大麦种子在成熟期淀粉含量和蛋白组分含量与对照相比差异并不明显。 展开更多

关键词 啤酒大麦 硫氧还蛋白s基因 淀粉酶活性 淀粉 蛋白组分

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TrxS基因过表达对大麦种子抗老化能力的影响 被引量：1

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作者 邓利 李冬兵 +4 位作者 曹玲珑 熊大斌 赵楠 李巧云 尹钧 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页

为探索TrxS基因对转基因大麦种子耐贮藏能力的影响,以转TrxS基因大麦纯合株系Y002及其非转基因受体(CK1)为材料,采用高温高湿老化处理法,研究了TrxS基因过表达对转基因大麦种子耐贮藏性的影响。结果表明:(1)与非老化处理(CK2)相比,老化... 为探索TrxS基因对转基因大麦种子耐贮藏能力的影响,以转TrxS基因大麦纯合株系Y002及其非转基因受体(CK1)为材料,采用高温高湿老化处理法,研究了TrxS基因过表达对转基因大麦种子耐贮藏性的影响。结果表明:(1)与非老化处理(CK2)相比,老化处理导致大麦种子发芽率和发芽势显著下降(P<0.05),转基因株系Y002种子发芽率和发芽势的降低速率慢于非转基因种子(CK1),处理3d时Y002种子的发芽势和发芽率分别比CK1高20.00%和22.20%(P<0.05);(2)大麦种子中MDA、羰基含量和相对电导率等氧化损伤指标均随着老化处理时间的延长而增加,转基因株系Y002的上述指标增加率普遍低于CK1,处理3d时Y002的MDA含量、羰基含量和电导率分别比CK1低22.69%、15.02%、17.75%(P<0.05);(3)在老化处理条件下,转基因种子的抗氧化酶活性高于CK1,处理3d时Y002的CAT活性与处理2d的POD活性分别比CK1高23.77%和43.27%(P<0.05)。以上结果说明,TrxS过表达能有效缓解高温高湿处理对大麦种子造成的氧化损伤,增强转基因大麦种子的抗老化能力。 展开更多

关键词 大麦 硫氧还蛋白s基因 过表达 老化处理 抗氧化酶

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大豆硫氧还蛋白基因的克隆与分析 被引量：3

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作者 王伟旗 侯文胜 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期351-355,共5页

通过对大豆耐盐品种文丰7盐处理抑制差减文库的筛选,获得了一些差异表达的EST序列,与NCBI中EST数据库进行比对分析后发现,其中1个与硫氧还蛋白相关。据此预测了大豆硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因的cDNA序列,并采用RT-PCR方法克隆了大... 通过对大豆耐盐品种文丰7盐处理抑制差减文库的筛选,获得了一些差异表达的EST序列,与NCBI中EST数据库进行比对分析后发现,其中1个与硫氧还蛋白相关。据此预测了大豆硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因的cDNA序列,并采用RT-PCR方法克隆了大豆Trx基因。生物信息学分析表明:该基因包含1个354 bp的完整开放阅读框,编码118个氨基酸,与拟南芥和烟草的同源性分别为72%和76%。Real-time PCR结果显示:盐处理后,Trx基因在耐盐和盐敏感品种中的表达量均有所提高,但耐盐品种的上调幅度显著高于盐敏感品种,说明其可能具有提高大豆品种耐盐性的作用。 展开更多

关键词 大豆 硫氧还蛋白基因 基因克隆

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过量表达Trxs对H_2O_2胁迫下大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响

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作者 李巧云 牛洪斌 +2 位作者 任江萍 李永春 尹钧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17423-17424,17428,共3页

[目的]分析过量表达Trxs对大麦幼苗叶片抗外源氧化剂胁迫的影响,为分析Trx参与植物抗氧化胁迫机制提供理论依据。[方法]以转Trxs基因大麦株系(LSY-11-1-1)及其非转基因对照株系为试材,研究了在1.5 mmol/L H2O2胁迫条件下,Trxs过量表达... [目的]分析过量表达Trxs对大麦幼苗叶片抗外源氧化剂胁迫的影响,为分析Trx参与植物抗氧化胁迫机制提供理论依据。[方法]以转Trxs基因大麦株系(LSY-11-1-1)及其非转基因对照株系为试材,研究了在1.5 mmol/L H2O2胁迫条件下,Trxs过量表达对大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响。[结果]在H2O2胁迫下,转基因大麦的Fv/Fm与Fv/Fo值高于对照,而丙二醛与H2O2含量低于对照;转基因大麦的过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性普遍高于对照;转基因大麦与对照的SOD与GSH-PX活性变化趋势不一致;转基因大麦出现2次活性高峰,而对照仅1次。[结论]过量表达Trxs能够通过增强抗氧化酶活性有效地缓解HO胁迫对转基因大麦幼苗生长所造成的氧化损伤。 展开更多

关键词 硫氧还蛋白s基因(trxs) 大麦 H2O2 氧化胁迫 抗氧化酶

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一种人硫氧还蛋白基因修饰肝细胞的制备

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作者 李华 汪根树 +4 位作者 张剑 姜楠 贾昌昌 杨扬 陈规划 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期572-576,共5页

【目的】制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞。【方法】逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrxcDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞。白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测... 【目的】制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞。【方法】逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrxcDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞。白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测。【结果】克隆出hTrx开放阅读框cDNA并制备出重组逆转录病毒,感染真核细胞后可分泌融合表达的hTrx并具有生物学活性。制备出hTrx基因修饰大鼠肝细胞,免疫组化SABC法显示肝细胞功能正常,MTT比色法检测具有较强的抗氧化应激能力(P<0.05),并可有效增殖。【结论】成功制备出一种具有较强抗氧化应激的hTrx基因修饰肝细胞。 展开更多

关键词 肝细胞 人硫氧还蛋白 基因修饰

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