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用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素的方法研究 被引量：2
1
作者 马卫列 刘芳 何承伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1476-1478,共3页
目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线。方法用pTh ioH is-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pylth io-galactoside,... 目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线。方法用pTh ioH is-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pylth io-galactoside,IPTG)诱导表达重组融合蛋白,或诱导表达不同时间后,采用SDS-PAGE分析表达产物;按所优化的条件进行重组内皮抑素的表达、包涵体的提取、洗涤、变性和复性,最后经N i+柱纯化,再通过SDS-PAGE分析纯化的结果。结果3种大肠杆菌表达效果相差无几,最佳IPTG的浓度0.9 mmol/L,最佳诱导时间为5 h,经N i+柱纯化后可获得可溶性的重组内皮抑素。结论利用本实验的优化条件可获得高产量、高纯度、可溶性的小鼠内皮抑素重组蛋白。 展开更多
关键词 ENDOSTATIN 硫氧还蛋白融合表达系统 融合蛋白
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小麦硫氧还蛋白TaTrxh10的特征及活性鉴定
2
作者 焦中发 王晓腾 +6 位作者 丁帅静 吴玉杰 景姝涵 张莉 孟晓丹 孟凡荣 李永春 《麦类作物学报》 北大核心 2025年第10期1324-1330,共7页
硫氧还蛋白是一类在植物中普遍存在的氧化还原调控蛋白,在植物生长发育过程中发挥重要调控功能。为了探讨小麦硫氧还蛋白TaTrxh10的生物学功能,系统分析了该蛋白的序列特征、三维结构及其基因表达模式,并将该蛋白原核表达后进行了其对... 硫氧还蛋白是一类在植物中普遍存在的氧化还原调控蛋白,在植物生长发育过程中发挥重要调控功能。为了探讨小麦硫氧还蛋白TaTrxh10的生物学功能,系统分析了该蛋白的序列特征、三维结构及其基因表达模式,并将该蛋白原核表达后进行了其对二硫键还原活性的体外鉴定。蛋白序列特征分析显示,小麦TaTrxh10包含3个成员,分别由3个同源基因TaTrxh10-A、TaTrxh10-B和TaTrxh10-D编码;3个成员均包含143个氨基酸,序列一致性为94.4%,且具有经典的硫氧还蛋白保守结构域和催化活性中心(WCGPC)。蛋白高级结构分析显示,TaTrxh10可形成由5个β-折叠和4个α-螺旋组成的三明治型特定空间结构。基因表达特性分析发现,TaTrxh10的3个同源基因在小麦根、茎和叶中的表达量极低,在子房和成熟种子中有较低水平的表达,而在成熟花粉中高表达。利用DTNB进行的硫氧还蛋白还原活性鉴定表明,TaTrxh10的3个成员均具有催化二硫键还原的功能,不过其还原活性在3个成员间存在一定差异;在较低浓度硫氧还蛋白的反应体系中,TaTrxh10-D的催化活性最高,TaTrxh10-B次之。以上结果表明,小麦TaTrxh10是一类在花粉中特异表达的有活性的氧化还原调控蛋白,这为进一步探讨小麦中依赖于氧化还原的发育调控机制提供了重要信息。 展开更多
关键词 小麦 硫氧还蛋白 序列特征 原核表达 还原活性
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新孢子虫硫氧还蛋白的生物信息学分析及其原核表达的鉴定 被引量：1
3
作者 齐闻新 张旻 +8 位作者 李晨 周思含 徐啊慧 钱伟锋 胡苏辉 王天奇 位治国 洪炀 闫文朝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期691-699,共9页
为研究新孢子虫硫氧还蛋白(Trx)的生物学特性,本研究利用PCR扩增犬新孢子虫Trx(NcTrx)基因的编码区序列,构建pET-32a(+)-NcTrx原核表达载体,经双酶切与测序鉴定正确后,利用系列生物信息学软件分析NcTrx基因及其编码氨基酸序列的生物信... 为研究新孢子虫硫氧还蛋白(Trx)的生物学特性,本研究利用PCR扩增犬新孢子虫Trx(NcTrx)基因的编码区序列,构建pET-32a(+)-NcTrx原核表达载体,经双酶切与测序鉴定正确后,利用系列生物信息学软件分析NcTrx基因及其编码氨基酸序列的生物信息学特征,并对其蛋白互作网络中排名前100的蛋白进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析。重组质粒中NcTrx基因的测序结果显示,NcTrx基因片段为1 287 bp,编码428个氨基酸;该蛋白含1个信号肽,1个跨膜区,主要位于内质网上;NcTrx蛋白的二、三级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲组成,有12个B细胞抗原表位;该蛋白属于硫氧还蛋白家族,存在典型的氧化还原基序“-CXXC-”,有38个磷酸化位点、10个O-糖基化位点;与NcTrx蛋白互作最强的为酪氨酸激酶样蛋白,二者通过氢键和静电作用实现相互对接;GO功能及KEGG信号通路的显著性富集分析结果显示,NcTrx与其互作的蛋白主要参与蛋白质转运、蛋白质二硫键异构酶活性等生物学过程,与内质网蛋白质加工、硫代谢等信号通路密切相关。将pET-32a(+)-NcTrx转化BL21(DE3)感受态细胞,并经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法纯化重组NcTrx蛋白(rNcTrx),经SDS-PAGE检测该蛋白的表达及纯化效果,采用Bradford法测定纯化蛋白的浓度。采用western blot鉴定rNcTrx的反应原性。SDS-PAGE结果显示,rNcTrx分子量约66 ku,主要以包涵体的形式表达,且纯化效果较好,浓度为0.8 mg/mL。Western blot检测结果显示,纯化的rNcTrx能够与鼠His MAb、新孢子虫感染的小鼠血清发生特异性反应,在66 ku处出现特异性条带。本研究首次经PCR扩增NcTrx基因,对NcTrx基因及其蛋白进行了生物信息学分析,并经原核系统表达及鉴定了NcTrx蛋白,为后续深入探究该蛋白的生物学功能提供参考依据。 展开更多
关键词 新孢子虫 硫氧还蛋白 生物信息学 原核表达
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硫氧还蛋白-(His)_ 6 融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测(英文) 被引量：5
4
作者 张新元 廖建民 +1 位作者 孙石静 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期374-378,共5页
目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表... 目的 :构建硫氧还蛋白 (His) 6 瑞替普酶融合表达载体 ,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量 ,简化rPA的分离纯化。方法 :将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白 (组氨酸 ) 6标签下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中用乳糖进行诱导表达。采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后 ,使用Ni2 + 亲和层析柱 ,对包涵体复性液进行初步纯化。采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定。结果 :得到分子量约为 5 6kDa的融合蛋白 ,表达量达到总蛋白的 30 %以上。比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约 5 0 %。经过一步Ni2 + 亲和层析 ,融合蛋白纯度达到80 %以上。体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性。结论 :与非融合表达相比 ,融合表达的表达量明显提高。即使N端额外融合一段融合多肽 ,rPA仍然具有生物学活性。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 (组氨酸)6标签 瑞替普酶 融合蛋白 表达 纯化 活性
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橡胶树硫氧还蛋白基因HbTRXo2克隆、表达及功能分析
5
作者 杨娜 吴双 +5 位作者 逯锐琳 何其光 胡义钰 朱春梅 王真辉 刘辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期1999-2009,共11页
硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分... 硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分子量为21.90 kDa,理论等电点为7.59。蛋白保守结构域和系统进化分析结果显示,HbTRXo2含有TRX保守结构域,与其他植物o型硫氧还蛋白聚在一起,表明该蛋白属于o型硫氧还蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,HbTRXo2基因在橡胶树根、树皮、胶乳、成熟叶、衰老叶、新梢、雌花和雄花组织中均表达,其中在胶乳中的表达量显著高于其他组织。同健康橡胶树相比,割面干涸橡胶树树皮和胶乳中HbTRXo2的表达量显著降低。在低温、聚乙二醇(PEG)诱导的干旱以及过氧化氢(H_(2)O_(2))和甲基紫精(MV)诱导的氧化胁迫处理下,HbTRXo2基因的表达显著上调,表明该基因参与了橡胶树对非生物胁迫的应答。为了研究HbTRXo2在抗逆中的功能,本研究构建其酵母表达载体,并转入酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)。比较重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)和转空载体对照酵母INVSc1(pYES2)在H_(2)O_(2)、PEG和低温胁迫处理后的存活差异。结果显示,重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)在PEG和H_(2)O_(2)处理后的存活率明显高于对照酵母,而在低温胁迫处理后的存活率明显低于对照酵母,表明转HbTRXo2基因提高了重组酵母对干旱和氧化胁迫的抗性,但降低了对低温胁迫的抗性。以上研究结果证明,HbTRXo2在橡胶树产排胶和抗逆过程中起着重要作用。本研究为进一步解析HbTRXo2在橡胶树中的生物学功能提供重要的参考依据。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 橡胶树 基因表达 酵母表达 抗氧化性 非生物逆境胁迫
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青蛤(Cyclina sinensis)金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因的克隆与表达分析 被引量：10
6
作者 吕达 罗凯娅 +1 位作者 潘宝平 高虹 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期47-51,共5页
利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5... 利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5个氨基酸构成的活性中心。采用实时定量PCR方法分析了两种基因在Cd2+胁迫下的表达变化,结果显示,金属硫蛋白基因在Cd2+胁迫下6—12hmRNA表达量急剧上升,与对照组有显著性差异(P<0.01)。硫氧还蛋白基因在Cd2+胁迫下mRNA在6h明显升高,在6—24h与对照组出现显著性差异(P<0.05)。说明Cd2+能够诱导青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白基因表达的时序性升高,二者的转录过程反映了贝类抵御重金属胁迫的分子调控过程。 展开更多
关键词 青蛤 金属硫蛋白(MTs) 硫氧还蛋白(Trx) 基因表达
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谷氧还蛋白1和硫氧还蛋白1基因在云南乌金猪不同组织中的表达特点及L-组氨酸对其在氧化应激细胞中表达的影响 被引量：8
7
作者 张春勇 陈克嶙 +1 位作者 黄金昌 郭荣富 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2415-2423,共13页
本试验旨在研究抗氧化基因谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)在云南乌金猪脑垂体、下丘脑、甲状腺、胸腺、胰腺、生殖腺、肝脏、皮肤、十二指肠、空肠、回肠11种组织中的差异表达,探讨L-组氨酸对乌金猪氧化应激细胞中GRX1、TRX1基... 本试验旨在研究抗氧化基因谷氧还蛋白1(GRX1)、硫氧还蛋白1(TRX1)在云南乌金猪脑垂体、下丘脑、甲状腺、胸腺、胰腺、生殖腺、肝脏、皮肤、十二指肠、空肠、回肠11种组织中的差异表达,探讨L-组氨酸对乌金猪氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因表达的调节作用。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测乌金猪组织中GRX1、TRX1基因表达;以过氧化氢(H2O2)为氧化应激源建立氧化应激细胞模型,探讨L-组氨酸对GRX1、TRX1基因表达的调节作用。结果表明:1)GRX1、TRX1基因在乌金猪被检测组织中均有表达,肝脏表达量最高,其次是皮肤、空肠,其他组织中的表达量相对较低;2)乌金猪组织中TRX1基因表达量明显高于G RX1基因表达量;3)细胞培养结果表明,受到H2O2刺激时,氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,L-组氨酸对氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达具有调节作用,其适宜浓度约为280μg/mL。乌金猪GRX1、TRX1基因表达具有明显组织特异性,H2O2可诱导氧化应激细胞中GRX1、TRX1基因产生过表达,添加适宜浓度的L-组氨酸可以调节氧化应激细胞或非应激细胞中GRX1、TRX1基因表达。结果提示,通过营养途径可诱导乌金猪体内G RX1、TRX1基因的表达,这是缓解机体氧化应激损伤和增强抗氧化能力的一种有效方式。 展开更多
关键词 乌金猪 氧化应激 谷氧还蛋白1 硫氧还蛋白1 基因表达 L-组氨酸
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定 被引量：8
8
作者 王慧 侯秋莲 +2 位作者 张壮志 张富春 张文宝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期430-434,共5页
目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方... 目的克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase TPx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达,纯化融合蛋白抗原,免疫小鼠制备抗血清。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法扩增EgTPx基因,克隆到原核表达载体pET-41b中,转化大肠杆菌BL21,经过IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,通过谷胱甘肽Sepharose4B层析柱分离纯化获得重组蛋白并免疫小鼠,制备抗血清。Western blot鉴定抗血清的特异性,ELISA测定抗体的效价。结果用PCR方法扩增获得的EgTPx基因长度为582bp,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgTPx基因,SDS-PAGE结果显示表达融合蛋白相对分子质量约为54kDa,鼠抗EgTPx抗体能与融合蛋白和天然原头蚴抗原发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶256000。结论成功地制备了鼠抗EgTPx抗体,并能够特异识别原核表达的融合蛋白EgTPx和天然原头蚴抗原,为研制有效的包虫病疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶 融合蛋白 抗血清
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人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用 被引量：5
9
作者 曹丽 黄大无 +4 位作者 范慧 狄春辉 王应 陈建民 马大龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期733-736,共4页
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现... 为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 . 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白 大肠杆菌 高效表达 纯化 内毒素血症 小鼠 保护作用
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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析 被引量：5
10
作者 李航 李文卉 +6 位作者 李永光 苟惠天 王艳华 张德林 贾万忠 史大中 付宝权 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期708-711,共4页
目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化... 目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx) 基因表达 抗原性
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橡胶树硫氧还蛋白基因HbCXXS1的克隆及表达分析 被引量：2
11
作者 王帅 袁坤 +5 位作者 何其光 胡义钰 冯成天 王真辉 刘进平 刘辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期214-222,共9页
硫氧还蛋白通过调控细胞内的氧化还原状态在植物生长发育及非生物胁迫应答等过程中发挥重要作用。研究硫氧还蛋白基因HbCXXS1在橡胶树各组织以及激素和非生物胁迫处理下的表达,为解析其生物学功能奠定基础。采用RT-PCR克隆HbCXXS1,对其... 硫氧还蛋白通过调控细胞内的氧化还原状态在植物生长发育及非生物胁迫应答等过程中发挥重要作用。研究硫氧还蛋白基因HbCXXS1在橡胶树各组织以及激素和非生物胁迫处理下的表达,为解析其生物学功能奠定基础。采用RT-PCR克隆HbCXXS1,对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR分析该基因在橡胶树不同组织及不同激素和非生物胁迫条件下的表达模式。结果表明,HbCXXS1开放阅读框为372 bp,编码123个氨基酸。HbCXXS1蛋白为亲水性蛋白,具有硫氧还蛋白保守结构域,活性中心为CXXS,属于h型硫氧还蛋白的第III组。HbCXXS1在橡胶树胶乳中的表达显著高于其他组织,且在死皮植株胶乳中的表达显著低于健康植株。脱落酸、茉莉酸甲酯、干旱和盐胁迫处理抑制了HbCXXS1的表达,乙烯利和低温处理上调了HbCXXS1的表达,而水杨酸和过氧化氢处理的不同时间点,HbCXXS1的表达既有上调也有下调。HbCXXS1可能在橡胶树产排胶和非生物胁迫应答中发挥重要调控作用。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 橡胶树 克隆 表达分析 非生物胁迫
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人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2
12
作者 徐江英 许琳 +3 位作者 戴荣 华超 卢是月 彭光勇 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-111,共3页
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取... 目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白还原酶 序列分析 原核表达 大肠杆菌 克隆 CDNA
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日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆和表达 被引量：2
13
作者 韩海勃 曹建平 刘述先 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第12期1035-1038,共4页
目的克隆和表达日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白(SjcTrx)的编码基因。方法根据日本血吸虫菲律宾株硫氧还蛋白基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入SalI酶切位点和终止密码子TAA。以日本血吸虫大陆... 目的克隆和表达日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白(SjcTrx)的编码基因。方法根据日本血吸虫菲律宾株硫氧还蛋白基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入SalI酶切位点和终止密码子TAA。以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SjcTrx基因。经双酶切并纯化的PCR产物与同样双酶切并纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcTrx,转化BL21感受态菌并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcTrx/BL21用IPTG诱导表达。结果SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334 bp,构建的重组pET28a-SjcTrx表达质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段。根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,约14kDa。Western blotting显示该重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清和重组抗原免疫小鼠血清所识别。结论SjcTrx基因的表达获得成功,并获得纯化蛋白,为开展动物保护性免疫试验创造了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 硫氧还蛋白 克隆 表达 重组抗原
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膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝脏组织硫氧还蛋白系统的影响 被引量：5
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作者 杨婧 贾彦 +3 位作者 王蔚 戚基萍 刘宏 代巧妹 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 2017年第4期701-705,共5页
目的:验证"膈下逐瘀汤抑制大鼠纤维化肝脏组织氧化应激的作用是通过增强硫氧还蛋白系统而实现"这一假说。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,正常大鼠+膈下逐瘀汤组、模型大鼠+膈下逐瘀汤组。大鼠免疫性肝纤维化模型通... 目的:验证"膈下逐瘀汤抑制大鼠纤维化肝脏组织氧化应激的作用是通过增强硫氧还蛋白系统而实现"这一假说。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,正常大鼠+膈下逐瘀汤组、模型大鼠+膈下逐瘀汤组。大鼠免疫性肝纤维化模型通过每周2次每只大鼠腹腔注射猪血清0.5 m L的方法制备。同时按含生药每天7.37 g·kg-1的剂量给予膈下逐瘀汤灌胃给药干预。采用分光光度法检测肝脏组织中脂质过氧化物(LipidPeroxidation,LPO)含量、硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin Reductase,Trx R)活性、PCR检测编码核转录因子E2相关因子2(Nuclear Factor Erythroid 2-related Factor 2,Nrf2)基因Nfe2l2的表达,利用Western blot检测硫氧还蛋白-1(Thioredoxin-1,Trx1)蛋白表达和Akt磷酸化水平。结果:与模型对照组大鼠比较,膈下逐瘀汤组大鼠纤维化肝脏组织LPO含量显著降低,Trx1蛋白表达和Trx R活性显著提高,Akt磷酸化水平显著增加,Nfe2l2 m RNA表达显著上调(均P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤增强机体肝脏硫氧还蛋白系统与其活化Akt-Nrf2信号通路有关,从而预防大鼠纤维化肝脏组织氧化应激状态,本实验结果为支持假说提供了实验依据。 展开更多
关键词 肝纤维化 膈下逐瘀汤 氧化应激 硫氧还蛋白系统 核转录因子E2相关因子2
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硫氧还蛋白系统研究进展 被引量：2
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作者 卜于骏 丁树哲 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期487-489,共3页
硫氧还蛋白系统 (TRXSYSTEM)是由TRX、NADPH及TRXR三部分组成的氧化还原敏感的多功能小分子蛋白系统。近来的研究表明TRX参与了氧应激和氧应激诱导的细胞凋亡。但更重要的是 ,在该系统中TRXR是一个高效的蛋白二硫化物还原酶。因此在机... 硫氧还蛋白系统 (TRXSYSTEM)是由TRX、NADPH及TRXR三部分组成的氧化还原敏感的多功能小分子蛋白系统。近来的研究表明TRX参与了氧应激和氧应激诱导的细胞凋亡。但更重要的是 ,在该系统中TRXR是一个高效的蛋白二硫化物还原酶。因此在机体的抗氧化机制中 ,TRX系统和GSH系统共同建立了机体内主要的抗氧化系统。此外 ,TRX还能激活NF -kB及其相关的信号传导通路。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白系统 研究进展 氧应激 细胞凋亡 核转录因子KB 脑损伤
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硫氧还蛋白系统与高氧肺损伤 被引量：1
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作者 蔡成 常立文 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期172-174,共3页
动物实验和临床研究表明,长期高浓度供氧可引起新生儿尤其早产儿产生氧化应激性损伤,多数学者认为这种氧化应激损伤在高氧肺损伤发生发展中起关键作用。高氧时,氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的影... 动物实验和临床研究表明,长期高浓度供氧可引起新生儿尤其早产儿产生氧化应激性损伤,多数学者认为这种氧化应激损伤在高氧肺损伤发生发展中起关键作用。高氧时,氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的影响包括对肺泡上皮细胞的损伤和对肺泡上皮细胞的保护。AECⅡ存活与凋亡有赖于细胞内的氧化还原状态,通过改变细胞内的氧化还原状态可干预氧化应激。硫氧还蛋白系统(thioredoxin system)在生物体内通过抗氧化和氧化还原调节,在基因表达、信号转导、细胞生长、细胞凋亡等方面起重要作用。 展开更多
关键词 高氧 活性氧 氧化应激 肺损伤 硫氧还蛋白系统
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小地老虎硫氧还蛋白基因AiTrx2的分子特性及其对杀虫剂胁迫的响应
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作者 洪牛 陈诗琪 +5 位作者 鄢敏 杨建 苗治国 刘苏 李茂业 杨洋 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2399-2409,共11页
鉴定小地老虎(Agrotis ipsilon)硫氧还蛋白基因(AiTrx2),明确其编码蛋白质的催化活性,阐明其在小地老虎不同发育期、不同组织及在氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和辛硫磷胁迫下的表达模式。利用同源检索方法从小地老虎转录组中鉴定AiTrx... 鉴定小地老虎(Agrotis ipsilon)硫氧还蛋白基因(AiTrx2),明确其编码蛋白质的催化活性,阐明其在小地老虎不同发育期、不同组织及在氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和辛硫磷胁迫下的表达模式。利用同源检索方法从小地老虎转录组中鉴定AiTrx2基因,利用大肠杆菌表达重组蛋白分析其活性,使用实时荧光定量PCR技术研究基因表达水平的变化。从小地老虎转录组中鉴定了AiTrx2的cDNA序列,其编码的蛋白具有硫氧还蛋白的典型特征,且与斜纹夜蛾亲缘关系最近。在大肠杆菌中成功表达了AiTrx2重组蛋白,测得该蛋白具有还原酶活性,过表达AiTrx2重组蛋白能够增强大肠杆菌对氧化胁迫的耐受性。在小地老虎不同组织与不同龄期中均检测出AiTrx2表达,分别以幼虫脂肪体和成虫阶段表达水平最高。使用LC_(50)浓度氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和辛硫磷处理小地老虎幼虫后,AiTrx2表达水平显著上调。明确了小地老虎AiTrx2的分子特性和表达模式,发现氯虫苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和辛硫磷处理能够诱导AiTrx2表达水平显著上调,说明AiTrx2可能在防御杀虫剂诱导的氧化胁迫中起重要作用。 展开更多
关键词 小地老虎 硫氧还蛋白 杀虫剂 抗氧化活性 表达模式
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中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征 被引量：1
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作者 廖剑 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期781-786,共6页
目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下... 目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组TPx蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析。结果:构建的重组质粒pET-32a(+)M-TPx在大肠杆菌中高效表达,经纯化后的重组TPx蛋白纯度可达90%以上,其单体相对分子质量为24460。重组TPx蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在,在二硫苏糖醇(DTT)存在时具有还原H2O2活性和对超螺旋DNA或对硫醇基敏感蛋白的保护作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组TPx蛋白,并且证实其活性与其高级结构紧密相关。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白过氧化物酶 青岛文昌鱼 原核表达 蛋白质纯化 酶活性 结构
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非洲猪瘟病毒P30-54融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及反应原性研究
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作者 李杰 张星星 +6 位作者 郭晶 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 孟庆玲 乔军 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期684-688,共5页
【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30... 【目的】非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种严重危害猪养殖业的急性烈性传染病。【方法】为了制备特异性强、敏感性高的ASFV血清学诊断用抗原,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了ASFV P30-54融合蛋白基因。将P30-54融合蛋白基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBac1中,构建重组质粒pFastBac-P30-54;将重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌进行重组,经抗性与蓝白斑筛选得到杆状病毒重组质粒Bacmid-P30-54;将reBacmid-P30-54转染sf9细胞,获得重组杆状病毒reAcMNPV-P30-54。将获得的reAcMNPV-P30-54接种sf9细胞,待细胞出现CPE时收集细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)和SDS-PAGE进行分析重组蛋白的表达情况;通过Western blot检测重组蛋白的反应原性。【结果】在重组杆状病毒中成功表达P30-54蛋白,该重组蛋白可与ASFV多克隆抗体发生免疫学反应。【结论】证实该重组蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 P30-54融合蛋白 杆状病毒表达系统 反应原性
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灯盏花素对UL补硒大鼠谷胱甘肽过氧化物酶和硫氧还蛋白还原酶基因表达和活性的影响 被引量：9
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作者 Ali Abdella 甘璐 +2 位作者 刘琼 刘宏 徐辉碧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1167-1170,共4页
目的　观察灯盏花素对允许的最高摄入量硒大鼠肝脏、肾脏、睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达和活性的影响。方法　采用RT PCR方法和酶活性测定分析GSH Px和TR基因表达水平和活性。结果　UL硒能降... 目的　观察灯盏花素对允许的最高摄入量硒大鼠肝脏、肾脏、睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因表达和活性的影响。方法　采用RT PCR方法和酶活性测定分析GSH Px和TR基因表达水平和活性。结果　UL硒能降低大鼠肝脏组织中GSH Px和TRmRNA表达水平及活性 ,灯盏花素能增加补硒大鼠肝脏中GSH Px和TRmRNA表达水平和活性。UL硒对大鼠肾脏、睾丸组织GSH Px和TRmRNA表达水平和活性无明显影响。结论　灯盏花素能有效拮抗UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降 ,且UL硒所致的GSH Px和TRmRNA表达和活性的下降具有组织特异性。 展开更多
关键词 硒 灯盏花素 谷胱甘肽过氧化物酶 硫氧还蛋白还 原酶 基因表达 酶活性
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