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铁皮石斛硫氧还蛋白基因(DoTrxL2)的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 范静 毛欢 +3 位作者 刘楚琪 龙涛 周康 王万军 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期18-22,共5页
运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC... 运用c DNA末端快速扩增技术(RACE)和巢式PCR技术克隆出铁皮石斛硫氧还蛋白超家族基因(Thioredoxin like 2,DoTrxL2)。序列分析表明DoTrxL2基因开放阅读框(ORF)长度为639 bp,编码213个氨基酸,编码产物含有一个硫氧还蛋白家族保守的CXXC功能结构域,通过两个半胱氨酸的双硫键得失电子,起到氧化还原作用。分子进化分析显示,DoTrxL2同小兰屿蝴蝶兰、石刁柏亲缘关系较近。qRT-PCR分析显示,DoTrxL2在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有表达差异,其中在原球茎形成早期表达量较高,表明该基因对原球茎形成有着促进作用;而在种子和花中表达量高,表明该基因对植物组织的生殖发育具有重要调控作用。 展开更多
关键词 铁皮石斛 硫氧还蛋白基因 RACE 实时荧光定量PCR
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大豆硫氧还蛋白基因的克隆与分析 被引量:3
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作者 王伟旗 侯文胜 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期351-355,共5页
通过对大豆耐盐品种文丰7盐处理抑制差减文库的筛选,获得了一些差异表达的EST序列,与NCBI中EST数据库进行比对分析后发现,其中1个与硫氧还蛋白相关。据此预测了大豆硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因的cDNA序列,并采用RT-PCR方法克隆了大... 通过对大豆耐盐品种文丰7盐处理抑制差减文库的筛选,获得了一些差异表达的EST序列,与NCBI中EST数据库进行比对分析后发现,其中1个与硫氧还蛋白相关。据此预测了大豆硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因的cDNA序列,并采用RT-PCR方法克隆了大豆Trx基因。生物信息学分析表明:该基因包含1个354 bp的完整开放阅读框,编码118个氨基酸,与拟南芥和烟草的同源性分别为72%和76%。Real-time PCR结果显示:盐处理后,Trx基因在耐盐和盐敏感品种中的表达量均有所提高,但耐盐品种的上调幅度显著高于盐敏感品种,说明其可能具有提高大豆品种耐盐性的作用。 展开更多
关键词 大豆 硫氧还蛋白基因 基因克隆
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日本凋毛藻(Griffithsiajaponica)硫氧还蛋白基因及其编码的蛋白特征
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作者 刘晨临 黄晓航 +2 位作者 LEE Yookyung LEE Hungkum 李光友 《海洋科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期54-59,共6页
从日本凋毛藻的表达序列标记 EST库中筛选到 2 条全长的编码硫氧还蛋白的 cDNA序列,分别命名为GjTRX1和GjTRX2。将这2条基因编码的蛋白序列与其它藻类(包括酵母)进行比较,结果表明不同物种及同一物种间TRX的相似性都较差,除GjTRX2编码... 从日本凋毛藻的表达序列标记 EST库中筛选到 2 条全长的编码硫氧还蛋白的 cDNA序列,分别命名为GjTRX1和GjTRX2。将这2条基因编码的蛋白序列与其它藻类(包括酵母)进行比较,结果表明不同物种及同一物种间TRX的相似性都较差,除GjTRX2编码的蛋白序列外,所有蛋白在活性位点序列 WCGPC处都完全保守。推测GjTRX1属于细胞质内分布的硫氧还蛋白。GjTRX1序列推导的蛋白二级结构单元与以往报道的传统上保守的TRX的二级结构单元类型一致,但是顺序有所不同。 展开更多
关键词 日本凋毛藻 表达序列标记 硫氧还蛋白基因
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陆地棉干旱胁迫相关基因GhTrx的克隆及表达 被引量:1
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作者 宋贵方 周凯 +4 位作者 王俊娟 樊伟丽 王德龙 王帅 叶武威 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1951-1957,共7页
采用RACE和RT-PCR技术,克隆了陆地棉干旱胁迫硫氧还蛋白基因,利用荧光定量PCR技术分析该基因在不同组织和不同时期的表达情况.结果表明,陆地棉硫氧还蛋白基因(GhTrx)的cDNA全长1 340 bp,其中ORF 864 bp,推测编码288个氨基酸.该基因编码... 采用RACE和RT-PCR技术,克隆了陆地棉干旱胁迫硫氧还蛋白基因,利用荧光定量PCR技术分析该基因在不同组织和不同时期的表达情况.结果表明,陆地棉硫氧还蛋白基因(GhTrx)的cDNA全长1 340 bp,其中ORF 864 bp,推测编码288个氨基酸.该基因编码蛋白与杨树、蓖麻、拟南芥的相似性分别为70%、72%和76%,系统发育树分析显示,GhTrx与蓖麻中该蛋白的亲缘关系最近.RT-PCR分析显示,GhTrx基因表达受干旱胁迫诱导,在干旱诱导下,该基因在抗旱材料中H177中上调表达,在根中的表达量明显高于叶.研究表明,GhTrx基因在干旱胁迫时根部进行大量表达,对抵御外界的干旱威胁起到关键作用,可能对提高陆地棉抗旱性方面具有一定的作用. 展开更多
关键词 陆地棉 棉花硫氧还蛋白基因 干旱胁迫 上调表达
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转TrxS基因大麦Y001籽粒灌浆期淀粉酶活性变化研究 被引量:1
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作者 邓德芝 牛洪斌 +4 位作者 卫丽 尹钧 李巧云 陈小霞 彭博 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第12期26-29,共4页
对过量表达PaTrxS基因的T4代稳定大麦品系Y001不同灌浆期种子中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的变化进行了动态跟踪。经PCR检测,转基因大麦豫啤1号(YP1)植株均出现了886 bp的目的带,说明目的基因已经整合到大麦基因组上。对不同发育时期转... 对过量表达PaTrxS基因的T4代稳定大麦品系Y001不同灌浆期种子中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的变化进行了动态跟踪。经PCR检测,转基因大麦豫啤1号(YP1)植株均出现了886 bp的目的带,说明目的基因已经整合到大麦基因组上。对不同发育时期转基因种子和对照种子的α-淀粉酶和β-淀粉酶活性进行测定,结果表明:转TrxS基因种子的α-淀粉酶活性在花后30 d内均比对照高,且峰值出现较对照早5 d;β-淀粉酶活性在整个籽粒发育时期都明显高于对照,差异达到极显著水平。表明TrxS基因对啤酒大麦的淀粉酶活性有促进作用。同时转基因大麦种子在成熟期淀粉含量和蛋白组分含量与对照相比差异并不明显。 展开更多
关键词 啤酒大麦 还蛋白S基因 淀粉酶活性 淀粉 蛋白组分
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TrxS基因过表达对大麦种子抗老化能力的影响 被引量:1
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作者 邓利 李冬兵 +4 位作者 曹玲珑 熊大斌 赵楠 李巧云 尹钧 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页
为探索TrxS基因对转基因大麦种子耐贮藏能力的影响,以转TrxS基因大麦纯合株系Y002及其非转基因受体(CK1)为材料,采用高温高湿老化处理法,研究了TrxS基因过表达对转基因大麦种子耐贮藏性的影响。结果表明:(1)与非老化处理(CK2)相比,老化... 为探索TrxS基因对转基因大麦种子耐贮藏能力的影响,以转TrxS基因大麦纯合株系Y002及其非转基因受体(CK1)为材料,采用高温高湿老化处理法,研究了TrxS基因过表达对转基因大麦种子耐贮藏性的影响。结果表明:(1)与非老化处理(CK2)相比,老化处理导致大麦种子发芽率和发芽势显著下降(P<0.05),转基因株系Y002种子发芽率和发芽势的降低速率慢于非转基因种子(CK1),处理3d时Y002种子的发芽势和发芽率分别比CK1高20.00%和22.20%(P<0.05);(2)大麦种子中MDA、羰基含量和相对电导率等氧化损伤指标均随着老化处理时间的延长而增加,转基因株系Y002的上述指标增加率普遍低于CK1,处理3d时Y002的MDA含量、羰基含量和电导率分别比CK1低22.69%、15.02%、17.75%(P<0.05);(3)在老化处理条件下,转基因种子的抗氧化酶活性高于CK1,处理3d时Y002的CAT活性与处理2d的POD活性分别比CK1高23.77%和43.27%(P<0.05)。以上结果说明,TrxS过表达能有效缓解高温高湿处理对大麦种子造成的氧化损伤,增强转基因大麦种子的抗老化能力。 展开更多
关键词 大麦 还蛋白S基因 过表达 老化处理 化酶
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TR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定 被引量:1
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作者 徐江英 许琳 +3 位作者 彭光勇 丁传林 卢是月 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期440-442,共3页
目的 :构建含人硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因的重组腺病毒载体 ,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法 :从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码 5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段 ,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR... 目的 :构建含人硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因的重组腺病毒载体 ,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法 :从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码 5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段 ,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR。将带有CMV启动子的目的片段 ,插入E1、E3缺失的Adeno X病毒DNA中 ,以Adeno TRDNA通过脂质体转染HEK2 93细胞 ,获得重组腺病毒Adeno TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定。用重组腺病毒感染CV1细胞 ,通过免疫荧光染色与Westernblot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达。结果 :重组腺病毒Adeno TR的病毒滴度为 4 .4× 10 11pfu/L。PCR、荧光显微镜证实 ,以及Westernbolt分析 ,在相对分子质量 (Mr)约 5 5 0 0 0处均出现特异性条带。结论 :成功地构建了重组腺病毒载体 ,并能介导外源基因TR表达 ,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础。 展开更多
关键词 还蛋白还原酶基因 腺病毒 基因表达载体
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过量表达Trxs对H_2O_2胁迫下大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响
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作者 李巧云 牛洪斌 +2 位作者 任江萍 李永春 尹钧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第35期17423-17424,17428,共3页
[目的]分析过量表达Trxs对大麦幼苗叶片抗外源氧化剂胁迫的影响,为分析Trx参与植物抗氧化胁迫机制提供理论依据。[方法]以转Trxs基因大麦株系(LSY-11-1-1)及其非转基因对照株系为试材,研究了在1.5 mmol/L H2O2胁迫条件下,Trxs过量表达... [目的]分析过量表达Trxs对大麦幼苗叶片抗外源氧化剂胁迫的影响,为分析Trx参与植物抗氧化胁迫机制提供理论依据。[方法]以转Trxs基因大麦株系(LSY-11-1-1)及其非转基因对照株系为试材,研究了在1.5 mmol/L H2O2胁迫条件下,Trxs过量表达对大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响。[结果]在H2O2胁迫下,转基因大麦的Fv/Fm与Fv/Fo值高于对照,而丙二醛与H2O2含量低于对照;转基因大麦的过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性普遍高于对照;转基因大麦与对照的SOD与GSH-PX活性变化趋势不一致;转基因大麦出现2次活性高峰,而对照仅1次。[结论]过量表达Trxs能够通过增强抗氧化酶活性有效地缓解HO胁迫对转基因大麦幼苗生长所造成的氧化损伤。 展开更多
关键词 还蛋白s基因(Trxs) 大麦 H2O2 化胁迫 化酶
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小麦花粉管通道法转基因研究 被引量:8
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作者 余桂荣 尹钧 +1 位作者 任江萍 郭向云 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2004年第2期15-19,共5页
为了培育抗穗发芽的种质资源,以13个小麦品种(品系)的植株体为受体材料,用花粉管通道及子房注射法进行了硫氧还蛋白反义基因(Anti-TrxS,与穗发芽抗性有直接关系)的遗传转化。花粉管通道法共处理小花2036朵,收获T0代种子1616粒,结实率为7... 为了培育抗穗发芽的种质资源,以13个小麦品种(品系)的植株体为受体材料,用花粉管通道及子房注射法进行了硫氧还蛋白反义基因(Anti-TrxS,与穗发芽抗性有直接关系)的遗传转化。花粉管通道法共处理小花2036朵,收获T0代种子1616粒,结实率为79.4%,将T0代种子大田点播成株行,T1代共出苗1424棵,出苗率为88.1%。对T1代苗按品种和处理组合的方式进行抽样检测,抽样株系取10个单株分别提取叶片基因组DNA,然后将单株叶片DNA等量混合,进行株系基因组DNA的PCR检测。检测结果为31个株系中有16个株系呈阳性反应。子房注射法共转化豫麦49、豫麦70、豫麦18、郑新991和95519等5个小麦品种(品系)的小花1206朵,收获种子89粒,结实率为7.4%,T1代共出苗41棵,出苗率为46.1%。对郑新991T1代株系(12棵幼苗的叶片基因组DNA混合样)进行PCR检测,电泳结果呈阳性反应。 展开更多
关键词 小麦 花粉管通道法 基因转化 抗穗发芽 子房注射法 还蛋白反义基因 PCR
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