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朱砂叶螨硒代谢通路基因筛选及硒磷酸合成酶TcSPS1的原核表达和特性分析
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作者 张梦宇 戚翠翠 +1 位作者 胡佳 徐志峰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期566-573,共8页
【目的】本研究旨在筛选朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus硒代谢通路的关键基因,探究其在朱砂叶螨硒代谢中的功能。【方法】使用基因克隆技术对8条朱砂叶螨硒代谢通路基因进行克隆;利用qPCR技术检测这些基因在不同浓度(0,5,20和50μmol... 【目的】本研究旨在筛选朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus硒代谢通路的关键基因,探究其在朱砂叶螨硒代谢中的功能。【方法】使用基因克隆技术对8条朱砂叶螨硒代谢通路基因进行克隆;利用qPCR技术检测这些基因在不同浓度(0,5,20和50μmol/L)亚硒酸钠(Na_(2)SeO_(3))处理的豇豆苗上饲养3 d的朱砂叶螨品系(短期硒饲养品系)雌成虫间以及朱砂叶螨普通品系(豇豆苗饲养)和长期硒饲养品系(20μmol/L Na_(2)SeO_(3)处理的豇豆苗饲养超1年)雌成虫间的表达量差异,并分析它们对硒诱导的表达响应;原核表达差异表达基因TcSPS1,并测定获得的重组蛋白生化特性。【结果】成功克隆了朱砂叶螨硒代谢通路的8条基因TcTxnrd1,TcTxnrd2,TcSPS1,TcSPS2,TcSPS2-1,TcSPS2-2,TcSG和TcPSTK。qPCR结果表明TcSPS1和TcTxnrd2在短期硒饲养和长期硒饲养朱砂叶螨品系中均上调表达,且TcSPS1的表达量变化与硒浓度变化密切相关。原核表达系统成功获得TcSPS1可溶性重组蛋白,测得其重组蛋白比活力为2.366±0.046 nmol/mg pro·min,Km和Vmax值分别为10.054±0.062μmol/L和29.633±1.777 nmol/mg pro·min。【结论】通过硒代谢通路基因分析,初步解释了朱砂叶螨对硒的适应的分子机制,并证明了上调表达的TcSPS1基因在朱砂叶螨产生对硒的适应中起着重要的功能。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 代谢通路 硒磷酸合成酶 差异表达基因 原核表达 酶活性
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硒代磷酸合成酶的研究进展
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作者 瞿祥虎 黄开勋 徐辉碧 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期357-360,共4页
硒代磷酸合成酶(SPS)的催化产物硒代磷酸(SP)是合成硒蛋白所必需的活性硒供体,所以SPS可能对硒蛋白合成的调控起重要作用。近来发现SPS广泛分布于哺乳动物、细菌和古细菌。SPS催化如下反应:ATP+硒化合物+H2... 硒代磷酸合成酶(SPS)的催化产物硒代磷酸(SP)是合成硒蛋白所必需的活性硒供体,所以SPS可能对硒蛋白合成的调控起重要作用。近来发现SPS广泛分布于哺乳动物、细菌和古细菌。SPS催化如下反应:ATP+硒化合物+H2O→SP+AMP+正磷酸。ATP是该酶的特异性底物,AMP是其竞争性抑制剂。 展开更多
关键词 蛋白合成 磷酸 磷酸合成酶 催化机理
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高富硒酵母菌株的筛选及其富硒特性分析 被引量:11
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作者 孙朝阳 张玉英 +3 位作者 潘利华 杨思林 魏春厅 罗建平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2020年第9期116-120,共5页
以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为出发菌株,NaN3为诱变剂、H2O2为选择压力进行菌株诱变筛选,以总硒及有机硒的含量与产率、硒磷酸合成酶(SPS)活性和蛋白硒含量为评价指标进行菌株富硒特性研究。结果表明,经10 mol/L NaN3处理40 ... 以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为出发菌株,NaN3为诱变剂、H2O2为选择压力进行菌株诱变筛选,以总硒及有机硒的含量与产率、硒磷酸合成酶(SPS)活性和蛋白硒含量为评价指标进行菌株富硒特性研究。结果表明,经10 mol/L NaN3处理40 min和2.50%H2O2筛分,从出发菌株中得到两株富硒水平高、富硒能力稳定的菌株HXS-01和HXS-02,经48 h摇瓶富硒培养后,菌株HXS-01和HXS-02总硒和有机硒含量及产率、SPS活性和蛋白硒含量分别比出发菌株高3.4~4.0倍、2.9~3.5倍、0.7~1.1倍和0.9~1.1倍,且以菌株HXS-02的富硒能力更高,其总硒含量和产率分别为2303.97μg/g和7945.19μg/L,有机硒占总硒的百分比超过97%。利用H2O2作为一种新的选择压力可以有效筛选出具有高SPS活性的富硒酵母菌株。 展开更多
关键词 酵母 筛选 特性 硒磷酸合成酶 有机
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家蚕Bmsps1基因的克隆和原核表达
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作者 范晓东 李春峰 +2 位作者 黄科 刘文明 周泽扬 《蚕学通讯》 2007年第4期5-11,共7页
从家蚕EST数据中检索到果蝇(D.melanogaster)硒磷酸合成酶基因(patuf)的氨基酸序列,用seq MAN延伸,电子克隆家蚕sps1的cds,用PCR克隆家蚕sps1基因序列。家蚕sps1基因cDNA长1817bp(登录号:ABA43639.1)。利用BLASTN进行同源性分析表明与... 从家蚕EST数据中检索到果蝇(D.melanogaster)硒磷酸合成酶基因(patuf)的氨基酸序列,用seq MAN延伸,电子克隆家蚕sps1的cds,用PCR克隆家蚕sps1基因序列。家蚕sps1基因cDNA长1817bp(登录号:ABA43639.1)。利用BLASTN进行同源性分析表明与果蝇的同源性为94%,与大肠杆菌序列同源性最差为46%。Bmsps1基因在家蚕基因组中是单拷贝的,只有一个外显子。推导3'UTR序列包含AATAA终止信号和Poly(A)。同时我们对Bmsps1进行了原核表达研究。 展开更多
关键词 硒磷酸合成酶 家蚕 克隆 表达
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