GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达 被引量：37

1

作者 耿德贵 王义琴 +1 位作者 李文彬 孙勇如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第2期35-39,共5页

利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达 ,研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响 ,并比较了CaMV35S、Ubil、Ubil Ω、CaMV35S U bil和CaMV35S Ubil Ω 5种启动子的转化效率。结果表明 ,培养 5d的盐藻在 6kV的... 利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达 ,研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响 ,并比较了CaMV35S、Ubil、Ubil Ω、CaMV35S U bil和CaMV35S Ubil Ω 5种启动子的转化效率。结果表明 ,培养 5d的盐藻在 6kV的脉冲电压、0 .0 5s的脉冲持续时间和 2 10的脉冲次数下电激可获得较高的转化率 ,为转化最佳条件。 5种启动子中 ,Ubil Ω启动子的转化效率最高 。 展开更多

关键词 杜氏盐藻细胞 转化率 杜氏盐藻 GUS基因 电激法 瞬间表达 转基因 基因表达

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高羊茅组织培养再生体系及GUS基因瞬间表达研究 被引量：11

2

作者 高丽美 徐子勤 +2 位作者 张永彦 黄萱 刘杨 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期40-45,共6页

以成熟种子为外植体,对高羊茅组织培养和植株再生体系进行了优化,分析了不同浓度2,4-D、6-BA和激动素对高羊茅愈伤组织诱导和愈伤组织分化成苗的影响,结果表明:9.0mg/L2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳,0.2mg/L激动素是愈伤组织分化成苗... 以成熟种子为外植体,对高羊茅组织培养和植株再生体系进行了优化,分析了不同浓度2,4-D、6-BA和激动素对高羊茅愈伤组织诱导和愈伤组织分化成苗的影响,结果表明:9.0mg/L2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳,0.2mg/L激动素是愈伤组织分化成苗的最适浓度,二者的诱导率和分化率分别达到68.08%和45.83%.在愈伤组织继代培养基中附加1.0mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA和1.25mg/LCuSO4有利于胚性愈伤组织的形成,可以明显促进愈伤组织分化.同时,采用基因枪法将GUS基因导入高羊茅愈伤组织中,通过组织化学染色检测到了GUS瞬间表达活性;并对影响GUS基因瞬间表达的因素进行了分析,以期为提高基因枪法遗传转化效率提供参考. 展开更多

关键词 高羊茅 组织培养 基因枪 GUS基因 瞬间表达

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GFP基因在软枣猕猴桃愈伤组织原生质体中瞬间表达的初步研究 被引量：16

3

作者 朱道圩 米银法 +2 位作者 陈延惠 王静毅 刘中杰 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期145-148,共4页

用PEG介导法对游离出来的软枣猕猴桃原生质体进行遗传转化,成功地将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入了原生质体,并获得了瞬间表达.结果表明,影响GFP基因转化的因素主要是材料的生理状态,PEG的种类和浓度;适宜的转化条件和方法为,将从白色、... 用PEG介导法对游离出来的软枣猕猴桃原生质体进行遗传转化,成功地将绿色荧光蛋白(GFP)基因导入了原生质体,并获得了瞬间表达.结果表明,影响GFP基因转化的因素主要是材料的生理状态,PEG的种类和浓度;适宜的转化条件和方法为,将从白色、较为疏松愈伤组织中游离的原生质体,悬浮到质量分数为13%甘露醇的洗液(CPW13)中,置于45℃水浴中热激5min,再放在冰浴中迅速冷却;加入质粒,轻轻混匀后静止10min;逐滴加入质量分数40%PEG6000介导转化,终浓度为100g·L-1,在室温下放置20min;逐滴加入CPW13稀释转化后的原生质体,以避免PEG浓度剧烈变化造成细胞膜破裂. 展开更多

关键词 软枣猕猴桃 愈伤组织 原生质体 瞬间表达 GFP基因 PEG介导法 遗传转化 绿色荧光蛋白 报告基因

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甘薯叶绿体表达载体构建及其融合基因在叶绿体中的瞬间表达 被引量：7

4

作者 王玉华 张秀海 +3 位作者 吴忠义 王永勤 黄丛林 贾敬芬 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1747-1755,共9页

利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基... 利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计引物,从甘薯(Ipomoeabatatas)叶绿体基因组中克隆了2个相邻的功能基因rbcL(GenBank登录号为AY942199)和accD(GenBank登录号为AY942200),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体基因组的强启动子Prrn和Rps-bA-pro分别驱动选择标记基因aadA及phaC-gfp融合基因,构建成表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter与RpsbA-pro-phaC-gfp-RpsbA-ter,然后将这2个表达盒串联在一起克隆进甘薯叶绿体同源片段中,获得甘薯叶绿体定点整合表达载体pSC-GFP。酶切分析证明,所构建的载体符合预期设计;采用该载体对甘薯叶片进行基因枪转化,结果显示,phaC-gfp融合基因可在叶绿体特异启动子和终止子的调控下在甘薯幼嫩叶片中瞬间表达,证明构建的载体pSC-GFP可用于甘薯叶绿体转化。 展开更多

关键词 甘薯 叶绿体同源片段 叶绿体表达载体 瞬间表达 中长链聚羟基脂肪酸酯

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不同调控序列控制下的gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达 被引量：8

5

作者 王锋 朱祯 +1 位作者 李向辉 章文才 《福建农业学报》 CAS 1998年第2期1-5,共5页

通过ＰＥＧ法及转化脂介导法将不同调控序列控制下的ｇｕｓ基因导入柑桔原生质体中，研究了ｇｕｓ基因在柑桔原生质体中的瞬间表达情况，结果表明，在柑桔原生质体中，控制ｇｕｓ基因表达水平的能力由大至小依次为ＣａＭＶ３５Ｓ启动子... 通过ＰＥＧ法及转化脂介导法将不同调控序列控制下的ｇｕｓ基因导入柑桔原生质体中，研究了ｇｕｓ基因在柑桔原生质体中的瞬间表达情况，结果表明，在柑桔原生质体中，控制ｇｕｓ基因表达水平的能力由大至小依次为ＣａＭＶ３５Ｓ启动子、ＡｄｈＩ启动子及ｒｂｃｓ启动子，内含子的存在可以提高ｇｕｓ基因在柑桔原生质体中的表达水平。 展开更多

关键词 瞬间表达 GUS基因 调控序列 柑桔 原生质体

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根癌农杆菌介导转化甘蓝型油菜子叶GUS基因瞬间表达 被引量：4

6

作者 谢伶俐 李加纳 +3 位作者 殷家明 柴友荣 许本波 林呐 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期9-13,共5页

为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化甘蓝型油菜外源基因的瞬间表达率和优化遗传转化体系,利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napusL.)湘油15带柄子叶,通过组织化学染色法检测GUS基因瞬间表达情况,研究... 为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化甘蓝型油菜外源基因的瞬间表达率和优化遗传转化体系,利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napusL.)湘油15带柄子叶,通过组织化学染色法检测GUS基因瞬间表达情况,研究了预培养基、蔗糖浓度、无机盐浓度和乙酰丁香酮对GUS基因瞬间表达的影响。结果表明,预培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L、菌悬液为MS+蔗糖30g/L+乙酰丁香酮100μmol/L或1/2MS+蔗糖60g/L+乙酰丁香酮100μmol/L时GUS基因瞬间表达率较高,达到约40%。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 子叶 根癌农杆菌 GUS基因 瞬间表达

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利用瞬间表达技术分析小麦几丁质酶和β-1,3葡聚糖苷酶基因的抗病性功能 被引量：5

7

作者 王华忠 邢莉萍 +1 位作者 李万隆 陈佩度 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期7-12,共6页

几丁质酶基因和-β1,3葡聚糖苷酶基因是植物抗病反应过程中的两类重要的病程相关蛋白(PR)基因。为了快速准确地评价此类基因组成性表达后的抗病效果及在分子育种上的应用价值,利用瞬间表达技术分别在感病小麦品种离体叶片表皮细胞中过... 几丁质酶基因和-β1,3葡聚糖苷酶基因是植物抗病反应过程中的两类重要的病程相关蛋白(PR)基因。为了快速准确地评价此类基因组成性表达后的抗病效果及在分子育种上的应用价值,利用瞬间表达技术分别在感病小麦品种离体叶片表皮细胞中过量表达1个小麦几丁质酶基因Cht4和2个小麦-β1,3葡聚糖苷酶基因G lb3s2和G lb3s6,并以GUS基因的共表达标识阳性转化细胞。基因枪轰击后高密度接种白粉病菌孢子,40h后观察转化阳性表皮细胞及其表面孢子的发育,并以阳性转化细胞中白粉病菌成功侵入的细胞所占比例(侵入频率)为指标分析目标基因的表达对白粉病菌入侵及吸器形成产生的影响(对照为单独导入GUS基因的表皮细胞)。结果表明,小麦几丁质酶基因Cht4(侵入频率为18.3%,对照为25.04%)和小麦-β1,3葡聚糖苷酶基因G lb3s2(侵入频率为19.63%,对照为24.63%)在感病小麦品种叶片表皮细胞中的瞬间表达,对白粉病菌侵入和吸器形成均有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性。 展开更多

关键词 小麦 白粉病 瞬间表达 几丁质酶基因 β-1 3葡聚糖苷酶基因

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快速检测干旱和脱水可诱导植物启动子瞬间表达特性的方法 被引量：3

8

作者 萧凤回 段承俐 +2 位作者 翟虎渠 薛刚平 张红生 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期85-91,共7页

选择合适的诱导表达启动子是开展植物耐干旱和脱水等非生物逆境转基因研究的重要环节。我们通过几年的研究,已建立了一套以大麦幼苗完整活体和植物离体叶片为主要材料通过瞬间表达鉴定来快速检测干旱和脱水可诱导基因启动子表达特性的... 选择合适的诱导表达启动子是开展植物耐干旱和脱水等非生物逆境转基因研究的重要环节。我们通过几年的研究,已建立了一套以大麦幼苗完整活体和植物离体叶片为主要材料通过瞬间表达鉴定来快速检测干旱和脱水可诱导基因启动子表达特性的方法。来自大麦和水稻的启动子Dhn4 s、Dhn8 s、HVA1 s、Rab16B j、wsi18 j在大麦、小麦、水稻、高粱和蕨类植物的离体叶片中经干燥诱导可以瞬间表达GFP,在绿豆、番茄叶片中不表达。鉴定了HVA1 s和wsi18 j在大麦不同器官或组织中启动子的定性表达情况。进一步建立了GFP荧光点/GUS染色点计数分析和GUS活性/XYN活性测定分析的启动子表达的定量分析方法,并讨论该方法在环境可诱导植物启动子功能分析中的应用价值和前景。 展开更多

关键词 植物启动子 干旱 脱水 瞬间表达 检测

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用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达 被引量：3

9

作者 王劲 施华中 +3 位作者 周嫦 杨弘远 张献龙 章荣德 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期422-427,共6页

以β—葡糖苷酸酶（β—ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＧＵＳ）基因作为报告基因，用基因枪法将其导入烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉，探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表... 以β—葡糖苷酸酶（β—ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＧＵＳ）基因作为报告基因，用基因枪法将其导入烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉，探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表达的影响，比较了二者的转化频率。结果表明：玉米花粉特异启动子能启动ＧＵＳ基因在脱外壁花粉和完整花粉中表达，而ＣａＭＶ３５Ｓ启动子则不能。靶距离越近，着弹率越高，ＧＵＳ基因瞬间表达频率越高；当进气压力为９００ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｓｐｅｒｓｑ．ｉｎ．）、靶距为６ｃｍ时，脱外壁花粉的瞬间表达频率达最高，为０．４５％，约为完整花粉的６倍。表达的蓝色反应花粉经ＤＡＰＩ荧光染色后细胞学观察表明，金粉粒能够打入营养核和生殖核。 展开更多

关键词 脱外壁花粉 基因枪 GUS基因 瞬间表达 烟草

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β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在大型经济海藻裙带菜中的瞬间表达 被引量：6

10

作者 于道展 秦松 +1 位作者 孙国琼 曾呈奎 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第8期93-95,共3页

用高压氦气式基因枪将SV4 0启动子驱动下的 β 半乳糖苷酶基因 (lacZ)导入大型经济海藻裙带菜不同部位的组织切块中 ,4 8小时后染色检测 ,在假根、孢子叶和叶片中均检测到了lacZ的瞬间表达。研究还发现 ,对于裙带菜组织块的基因枪法转... 用高压氦气式基因枪将SV4 0启动子驱动下的 β 半乳糖苷酶基因 (lacZ)导入大型经济海藻裙带菜不同部位的组织切块中 ,4 8小时后染色检测 ,在假根、孢子叶和叶片中均检测到了lacZ的瞬间表达。研究还发现 ,对于裙带菜组织块的基因枪法转化 ,压强130 0psi优于 110 0psi。另外在裙带菜中没有发现半乳糖苷酶的染色本底。本文结果提示 :基因枪法是有效的裙带菜遗传转化方法 ;lacZ可以作为裙带菜基因工程研究的报告基因 ,SV4 0启动子能有效驱动外源基因在裙带菜中表达 ,没有组织特异性。这是lacZ在裙带菜中表达的首次报道 。 展开更多

关键词 Β-半乳糖苷酶基因 大型经济海藻 裙带菜 LACZ SV40启动子 基因枪法 瞬间表达 培育 基因工程

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基因枪介导的小麦叶片瞬间表达体系的优化及应用 被引量：1

11

作者 邢莉萍 钱晨 +4 位作者 李颖波 俞奇 曹爱忠 王秀娥 陈佩度 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期143-150,共8页

麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的... 麦类作物的叶片单细胞瞬间表达是一种高效而快速的基因功能验证方法,尤其适用于麦类作物与白粉病菌的互作系统,但由于影响参数较多、参检基因表达频率低而尚未广泛应用。本研究使用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对影响表达效率的多个转化参数进行优化,筛选出表达频率最高的参数组,即小麦叶片采用固体保鲜培养基固定,钨粉用量为每枪300μg,质粒DNA用量为每枪750ng,可裂膜氦压为1 350psi,可裂膜与受体膜距离6mm,受体与阻挡网距离6cm,与先前报道的方法相比表达频率有显著提高。应用上述参数在感病小麦品种离体叶片中过量表达一个已知具有抗白粉病功能的簇毛麦SGT1基因,结果表明该基因瞬间表达使互作细胞吸器指数降低,表现为对白粉病菌侵入和吸器形成具有抑制作用,在一定程度上增强了表达细胞对白粉病菌的抗性,使目标基因的抗性功能再次得到印证。本研究还进一步运用该优化体系开展瞬间表达介导的基因沉默(TIGS)实验,将携带抗白粉病基因Pm21的抗病小麦品种南农9918和感病小麦品种扬麦158中的内源SGT1和RAR1分别或同时沉默,结果显示南农9918的叶片表皮与白粉菌互作细胞的吸器指数增高,在一定程度上降低了表达细胞对白粉菌的抗性。而扬麦158中互作细胞的吸器指数较对照变化不显著。说明这两个基因均分别参与了Pm21介导的抗白粉病信号途径,且二者共同作用与白粉病抗性关系更加密切。 展开更多

关键词 小麦 叶片表皮细胞 瞬间表达 白粉菌互作 SGT1 RAR1

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共培养基对甘蓝型油菜下胚轴GUS瞬间表达及转化效率的影响 被引量：1

12

作者 许本波 殷家明 +2 位作者 谢伶俐 李加纳 柴友荣 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第25期8062-8064,共3页

为提高根癌农杆菌介导的甘蓝型油菜遗传转化效率,以甘蓝型油菜"湘油15"下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,研究了共培养基中α-NAA和6-BA浓度对根癌农杆菌介导法转化甘蓝型油菜过程中下胚轴GUS基因瞬间表达及转化效率的影响。... 为提高根癌农杆菌介导的甘蓝型油菜遗传转化效率,以甘蓝型油菜"湘油15"下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,研究了共培养基中α-NAA和6-BA浓度对根癌农杆菌介导法转化甘蓝型油菜过程中下胚轴GUS基因瞬间表达及转化效率的影响。结果表明,共培养基对GUS基因的瞬间表达和稳定表达具有重要影响,但共GUS基因的瞬间表达率和转化效率之间没有明显的线性关系。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 下胚轴 GUS基因 瞬间表达

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影响农杆菌渗入法瞬间表达重组蛋白系统的若干因素 被引量：1

13

作者 于翠梅 刘限 +1 位作者 马莲菊 张宝石 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期45-49,共5页

利用农杆菌渗入法(Agroinfiltration)在植物中瞬间表达重组蛋白的系统,具有高效、安全、简便的特点,是一种重要的生产重组蛋白的方法。概述了Agroinfiltration系统的建立、发展及在生产重组蛋白领域的应用进展;并对影响该系统的技术因... 利用农杆菌渗入法(Agroinfiltration)在植物中瞬间表达重组蛋白的系统,具有高效、安全、简便的特点,是一种重要的生产重组蛋白的方法。概述了Agroinfiltration系统的建立、发展及在生产重组蛋白领域的应用进展;并对影响该系统的技术因素作了深入探讨。 展开更多

关键词 农杆菌渗入法 植物 瞬间表达 重组蛋白

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PEG法GUS基因在水稻原生质体及其愈伤组织中的瞬间表达初报 被引量：1

14

作者 褚启人 曹华兴 +3 位作者 范惠琴 王亦菲 ALEXEYEV M E 王新华 《上海农业学报》 CSCD 1995年第3期63-68,共6页

本文作者构建了ＰＸＭ１，和ＰＧＣＹ６两个质粒．其中质粒ＰＸＭ１，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽ＣｅｃｒｏｐｉｎＢ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为... 本文作者构建了ＰＸＭ１，和ＰＧＣＹ６两个质粒．其中质粒ＰＸＭ１，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽ＣｅｃｒｏｐｉｎＢ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为终止子。经纯化的质粒ＤＮＡ以ＰＥＧ法导入４个水稻品种：８９－２、Ｌａｃｃａｓｉｎ、Ｃｙｐｒｅｓｓ、台北３０９细胞悬浮系的原生质体中，组织化学检测结果表明，ＧＵＳ基因在原生质体、愈伤组织及再生小植株中均得以表达。 展开更多

关键词 基因 原生质体 瞬间表达 水稻 愈伤组织

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内源β-微管蛋白侧翼序列调控下条斑紫菜原生质体GUS基因的瞬间表达 被引量：1

15

作者 宫倩红 于文功 +4 位作者 戴继勋 刘红全 徐日富 管华诗 潘克厚 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期228-228,共1页

内源β-微管蛋白启动子经常被用在绿藻外源基因表达载体中，但在条斑紫菜瞬间表达载体中应用内源β-微管蛋白启动子尚未见报道。为检测内源的β-微管蛋白启动子在紫菜瞬间表达中的效率构建了瞬间表达载体和对照载体。质粒pA由pCATR3-enh... 内源β-微管蛋白启动子经常被用在绿藻外源基因表达载体中，但在条斑紫菜瞬间表达载体中应用内源β-微管蛋白启动子尚未见报道。为检测内源的β-微管蛋白启动子在紫菜瞬间表达中的效率构建了瞬间表达载体和对照载体。质粒pA由pCATR3-enhancer载体的骨架构建而成，瞬间表达载体则是将条斑紫菜β-微管蛋白基因的5’侧翼序列（Tub5’），β-葡萄糖醛酸苷酶（GUS）基因（gusA）和β-微管蛋白的3’侧翼序列（Tub3’）插入载体pA。而对照载体pA—GUSTub3只包含gusA和Tub3’。利用电击法进行条斑紫菜原生质体的瞬间表达。电击后24h开始进行GUS活性定量检测。结果表明在微管蛋白基因侧翼序列的控制下实现了GUS基因的瞬间表达，但是24h后GUS活性降低。同pBI221相比，利用pATubGUS电击后，原生质体表现出更强的GUS活性。结果显示内源微管蛋白启动子是条斑紫菜遗传转化的1种有潜力的调控元件。 展开更多

关键词 β-微管蛋白基因 GUS基因 瞬间表达 条斑紫菜 侧翼序列 原生质体 调控元件 基因表达载体

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兰花圆球茎基因枪转化后的GUS基因表达 被引量：13

16

作者 陈志俊 明小天 +2 位作者 刘荣维 李毅 陈章良 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第4期94-96,共3页

利用花椰菜花叶病毒 (CaMV ) 35S启动子引导的葡糖醛酸糖苷酶 (β glu curonidase ,GUS)基因检测基因枪法转化兰花圆球茎组织的瞬间表达效率。发现在基因枪轰击时在DNA 金粉悬液中加入 0 1mol/L的生长激素NAA ,轰击前预培养时使用0 1m... 利用花椰菜花叶病毒 (CaMV ) 35S启动子引导的葡糖醛酸糖苷酶 (β glu curonidase ,GUS)基因检测基因枪法转化兰花圆球茎组织的瞬间表达效率。发现在基因枪轰击时在DNA 金粉悬液中加入 0 1mol/L的生长激素NAA ,轰击前预培养时使用0 1mol/L甘露醇处理 ,每个培养皿轰击两次和轰击压力为 110 0 psi下 。 展开更多

关键词 GUS 兰花圆球式 基因枪 瞬间表达

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农杆菌介导的半夏GUS基因瞬时表达 被引量：11

17

作者 贾永芳 马玉坤 +1 位作者 郭余龙 李名扬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期42-45,共4页

采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对GUS基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2... 采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对GUS基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2的EHA101或EHA105农杆菌液中感染15 min,叶柄暗处共培养3 d,愈伤组织2 d,能够得到较高的GUS基因瞬间表达。 展开更多

关键词 半夏 根癌农杆菌 GUS基因 瞬间表达

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植物源内含子对GUS基因表达模式的影响 被引量：5

18

作者 邹智 吴刚 +4 位作者 肖玲 武玉花 聂淑晶 肖娜 卢长明 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期78-82,共5页

采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆... 采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆菌中高效表达。为避免GUS基因在农杆菌中的表达对瞬间表达体系的影响,一拟南芥蛋白基因的内含子被插入到GUS基因的编码区,进而构建了含内含子的GUS植物表达载体pBI121-GUSint。组织化学染色结果表明,GUSint在农杆菌中没有表达,而在接种3d的油菜中可高效瞬间表达,其中在子叶柄(带子叶)中瞬间表达率高达100%,这一方面证实载体构建成功,另一方面也为进一步优化油菜及其它芸薹属植物转化体系及在油菜中快速研究目的基因的功能和表达调控模式奠定了基础。 展开更多

关键词 GUS 内含子 表达模式 根癌农杆菌 甘蓝型油菜 瞬间表达

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番红花组织基因枪转化瞬时表达检测 被引量：2

19

作者 唐琳 徐莺 +3 位作者 赵婷婷 颜钫 徐是雄 陈放 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期35-38,共4页

用高压氦气式基因枪将CaMV35S启动子驱动下的gus基因导入经济植物番红花的叶鞘和叶、芽来源的愈伤组织块中 ,4 8h后染色检测到了gus基因的瞬间表达 ,2 0d后仍检测到极少量表达 .研究发现 ,轰击前在加有 0 5mol L甘露醇的液体愈伤组织... 用高压氦气式基因枪将CaMV35S启动子驱动下的gus基因导入经济植物番红花的叶鞘和叶、芽来源的愈伤组织块中 ,4 8h后染色检测到了gus基因的瞬间表达 ,2 0d后仍检测到极少量表达 .研究发现 ,轰击前在加有 0 5mol L甘露醇的液体愈伤组织继代培养基上处理 6h ,明显增加了gus基因表达的数量 ;选择 110 0psi× 9cm的轰击条件 ,转化效果最好 ;高浓度卡那霉素 (5 0 0～ 80 0mg L)可以作为筛选剂 .结果表明 ,基因枪法是有效的番红花遗传转化方法 ,gus基因可以作为番红花基因工程研究的报告基因 。 展开更多

关键词 番红花 GUS基因 基因枪法 瞬间表达

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辣椒CaMAPK7启动子顺式作用元件及其表达分析 被引量：4

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作者 杨明星 申磊 +8 位作者 文嘉瑜 唐倩 石兰平 刘艳艳 杨晟 胡炯 刘彩玲 吴杨 何水林 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期673-679,共7页

促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在植物生长、发育和适应环境中起着十分重要的作用,但对该家族多数成员的表达调控机制认识仍十分有限。前期实验已分离获得辣椒一个MAPK家族成员Ca MAPK7,并发现该基因的表达受病原菌、高温等逆境的诱导,但... 促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在植物生长、发育和适应环境中起着十分重要的作用,但对该家族多数成员的表达调控机制认识仍十分有限。前期实验已分离获得辣椒一个MAPK家族成员Ca MAPK7,并发现该基因的表达受病原菌、高温等逆境的诱导,但其表达调控机制仍不清楚。本研究进一步分离了Ca MAPK7的启动子序列(p Ca MAPK7),发现其TATA框位于-165 bp与-170 bp之间,此外还发现W-box,HSE,TCA,LTR,ERE等多种与生物及非生物逆境胁迫应答相关的顺式作用元件。通过构建该启动子与报告基因GUS融合表达载体p Ca MAPK7::GUS,利用农杆菌介导的本氏烟草叶片瞬间表达系统分析发现p Ca MAPK7可应答青枯菌接种及水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(Me JA)、油菜素内酯(BR)、脱落酸(ABA)和乙烯(ET)等外源激素处理,表明Ca MAPK7应答青枯菌、外源激素处理主要是通过该启动子介导的转录调节实现的。 展开更多

关键词 辣椒 启动子 烟草瞬间表达系统

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