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中华按蚊电转化显微注射技术平台的构建及其在基因瞬时过表达中的应用被引量：1: 1; 作者车林茸何正波 +4 位作者韩宝珠陈晓洁闫振天乔梁陈斌《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期561-571,共11页; 【目的】构建在中华按蚊 Anopheles sinensis 中的电转化显微注射技术平台,并利用该技术平台实现活体基因瞬时过表达对其进行验证,为开展系统的基因功能研究奠定基础。【方法】以CUY21EDIT Ⅱ电转仪为主体构建中华按蚊中的电转化显微注... 展开更多; 关键词中华按蚊电转化显微注射增强型绿色荧光蛋白基因芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶基因瞬时过表达基因功能; 在线阅读下载PDF 职称材料

NbJAZ3在苜蓿花叶病毒侵染本氏烟过程中的作用: 2; 作者赖诗雨梁巧兰 +5 位作者魏列新牛二波陈应娥周鑫杨思正王博《生物技术通报》北大核心 2025年第8期186-196,共11页; 【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法... 展开更多; 关键词苜蓿花叶病毒侵染本氏烟 NbJAZ3 亚细胞定位瞬时过表达基因沉默生物信息学分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

棉花凝集素类受体蛋白激酶基因GhLecRK1响应棉蚜危害的功能分析: 3; 作者何华楚龙燕 +2 位作者李建平张建民于永浩《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2116-2125,共10页; 【目的】克隆棉花(Gossgpium hirsutum)凝集素类受体蛋白激酶(LecRK1)基因GhLecRK1,分析其在响应棉蚜危害中的功能,为培育棉花抗蚜新品种提供理论参考。【方法】在棉蚜诱导的棉花叶片全转录组测序数据分析基础上,克隆响应棉蚜危害的GhLe... 展开更多; 关键词棉花 GhLecRK1基因抗蚜性瞬时过表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

中国樱桃CpMADS47基因调控果实成熟软化的功能分析: 4; 作者田泰刘一璇 +8 位作者王杨玥琨黄凤庭杨帅威王浩张静何文陈清王小蓉王燕《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1186-1194,共9页; 【目的】探究中国樱桃CpMADS47基因的生物学特性及其在果实成熟软化中的作用。【方法】克隆获得与中国樱桃果实质地相关的MADS-box基因CpMADS47,进行生物信息学分析,异源瞬时过表达草莓果实进行功能验证。【结果】中国樱桃CpMADS47属SEP... 展开更多; 关键词中国樱桃 CpMADS47 果实成熟软化生物信息学分析瞬时过表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

紫丁香SoDXR基因克隆及其在单萜类物质合成中的功能分析: 5; 作者杨艺慧邹吉睿 +3 位作者马波冷平生胡增辉吴静《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期912-919,共8页; [目的]探究1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因在紫丁香单萜类物质合成中的作用,为紫丁香花香分子育种提供有效的基因资源和理论基础。[方法]以紫丁香花瓣为材料,克隆了SoDXR基因,并对其进行生物信息学和亚细胞定位分析、不同... 展开更多; 关键词紫丁香萜类化合物 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶瞬时过表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名中华按蚊电转化显微注射技术平台的构建及其在基因瞬时过表达中的应用被引量：1: 1; 作者车林茸何正波韩宝珠陈晓洁闫振天乔梁陈斌; 机构重庆师范大学生命科学学院媒介昆虫重庆市重点实验室; 出处《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期561-571,共11页; 基金国家自然科学基金项目(31672363,31772527,31872262) 重庆市自然科学基金项目(CSTC2017JCYJAX0023) 重庆师范大学青年拔尖人才培育计划; 文摘【目的】构建在中华按蚊 Anopheles sinensis 中的电转化显微注射技术平台,并利用该技术平台实现活体基因瞬时过表达对其进行验证,为开展系统的基因功能研究奠定基础。【方法】以CUY21EDIT Ⅱ电转仪为主体构建中华按蚊中的电转化显微注射技术平台;使用同源重组法构建 EGFP 和 Bm-iAANAT 基因的瞬时过表达质粒,在中华按蚊化蛹3 h时注射该质粒进入蛹体,随即使用电转仪对注射后的蛹进行电击,待注射个体发育至化蛹39 h时,利用体视荧光显微镜观察蛹体表皮着色和发光情况,并通过荧光定量PCR检测 EGFP 和 Bm-iAANAT 的表达。【结果】构建了用于显微注射的 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40和 PIZ-modi-Aepub-AANAT- T2A-EGFP-SV 40过表达载体。 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40注射组中华按蚊在化蛹39 h时约87.5%的个体成活并正常黑化,这其中约92.7%的个体的表皮检测到明显的绿色荧光,注射无启动子载体 PIZ-modi-EGFP-SV 40并进行电击的阴性对照组和注射过表达载体 PIZ-modi-Aepub-EGFP-SV 40但未进行电击的阳性对照组个体则没有明显的绿色荧光;并且荧光定量PCR结果显示,注射组中发光个体的 EGFP 基因明显高表达。 PIZ-modi-Aepub-AANAT-T 2 A-EGFP-SV 40注射组的蛹在化蛹39 h时有80.4%个体存活,这其中92.2%的个体相对于注射无启动子载体 PIZ-modi-AANAT- T2A -EGFP-SV 40的阴性对照组和注射过表达载体 PIZ-modi-Aepub-AANAT- T2A -EGFP-SV 40但未进行电击的阳性对照组个体黑化明显受阻,且有明显的绿色荧光;并且荧光定量PCR结果显示,报告基因 Bm-iAANAT 和 EGFP 的表达明显提高。【结论】成功构建了在中华按蚊中的电转化显微注射技术平台;通过此技术平台能够便捷、快速和高效地实现报告基因在活蛹中的瞬时过表达,并产生了目的表型。这为中华按蚊功能基因组研究奠定了基础。; 关键词中华按蚊电转化显微注射增强型绿色荧光蛋白基因芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶基因瞬时过表达基因功能; Keywords Anopheles sinensis electroporation-mediated microinjection enhanced green fluorescent protein gene arylalkylamine-N-acetyltransferase gene transient overexpression gene function; 分类号 Q963 [生物学—昆虫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名NbJAZ3在苜蓿花叶病毒侵染本氏烟过程中的作用: 2; 作者赖诗雨梁巧兰魏列新牛二波陈应娥周鑫杨思正王博; 机构甘肃农业大学植物保护学院; 出处《生物技术通报》北大核心 2025年第8期186-196,共11页; 基金国家自然科学基金项目(31860039)。; 文摘【目的】探究本氏烟(Nicotiana benthamiana)中编码茉莉酸ZIM结构域蛋白3(jasmonate ZIM-domain protein 3,JAZ3)基因NbJAZ3对苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus, AMV)侵染本氏烟的影响,为进一步解析AMV侵染机制提供理论依据。【方法】以本氏烟和AMV为材料,采用摩擦接种法将AMV接种于本氏烟,取接种后1、7、15、21 d的本氏烟叶片进行转录组测序分析,对茉莉酸(jasmonic acid, JA)信号转导途径中差异基因进行筛选,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NbJAZ3在AMV侵染中的表达变化;克隆NbJAZ3,进行生物学信息分析,构建系统进化树并进行多序列比对;构建pCAMBIA1300-NbJAZ3瞬时过表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察NbJAZ3蛋白亚细胞定位,利用Western blot检测蛋白表达量;当NbJAZ3在本氏烟叶片中瞬时过表达后,接种AMV,采用RT-q PCR法检测接种后第5天的AMV CP相对表达量;利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus, TRV)诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术构建pTRV2-NbJAZ3沉默载体,沉默NbJAZ3后摩擦接种AMV,利用RTqPCR检测AMV CP相对表达量。【结果】转录组测序和RT-q PCR进一步验证表明,AMV接种后的不同天数NbJAZ3均下调表达,且第15天NbJAZ3相对表达量最低,与对照相比下降了84.43%;NbJAZ3 CDS序列长度为1 143 bp,编码380个氨基酸,包含ZIM和Jas-motif 2个保守结构域;NbJAZ3与林烟草(Nicotiana sylvestris)的NsJAZ3同源性最高,相似度为96.58%;显微镜观察到NbJAZ3蛋白定位于本氏烟叶片的细胞核、细胞质与细胞膜中;与对照组相比,NbJAZ3瞬时过表达和瞬时沉默的本氏烟接种AMV第5天时,AMV CP相对表达量分别降低了83.82%和增加了78.58%。【结论】AMV侵染会引起本氏烟中NbJAZ3下调,瞬时过表达NbJAZ3可抑制AMV对本氏烟的侵染,而沉默该基因可促进AMV的侵染,进一步表明NbJAZ3可作为本氏烟抗AMV侵染的正调控因子,在抵御病毒侵染中具有重要作用。; 关键词苜蓿花叶病毒侵染本氏烟 NbJAZ3 亚细胞定位瞬时过表达基因沉默生物信息学分析; Keywords alfalfa mosaic virus(AMV) infection Nicotiana benthamiana NbJAZ3 subcellular localization transient overexpression virus-induced gene silencing(VIGS) bioinformatics analysis; 分类号 S435.72 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名棉花凝集素类受体蛋白激酶基因GhLecRK1响应棉蚜危害的功能分析: 3; 作者何华楚龙燕李建平张建民于永浩; 机构武汉生物工程学院园林园艺学院长江大学农学院广西作物病虫害生物学重点实验室; 出处《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2116-2125,共10页; 基金国家自然科学基金面上项目(32372561) 教育部新农科研究与改革实践项目(教高厅函〔2020〕20号)。; 文摘【目的】克隆棉花(Gossgpium hirsutum)凝集素类受体蛋白激酶(LecRK1)基因GhLecRK1,分析其在响应棉蚜危害中的功能,为培育棉花抗蚜新品种提供理论参考。【方法】在棉蚜诱导的棉花叶片全转录组测序数据分析基础上,克隆响应棉蚜危害的GhLecRK1基因,并对其序列进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR检测GhLecRK1基因在棉蚜诱导下的表达模式,运用瞬时过表达技术研究其在棉花对棉蚜防御响应中的功能。【结果】GhLecRK1基因开放阅读框(ORF)长度1233 bp,编码410个氨基酸残基,理论等电点(pI)8.36,预测蛋白质分子量45948 Da,由具有1个α-甘露糖凝集素结合结构域、1个S-糖蛋白结构域(SLG)和1个纤溶酶原/苹果/线虫结构域(PAN)组成,属G型凝集素类受体蛋白激酶。同源序列比对分析结果表明,GhLecRK1与其他植物的G型LecRLKs序列具有高度相似性(94.39%)。系统发育分析结果表明,GhLecRK1与Gossypium raimondii的Gr012449778.1亲缘关系最近。在棉蚜取食诱导后24、48和72 h的棉花植株的子叶、根、茎中GhLecRK1基因的表达量均有不同程度上调,但是仅有子叶在棉蚜取食24 h时GhLecRK1基因相对表达量显著上调(P<0.05,下同)。选择性和非选择性试验结果显示,瞬时过表达GhLecRK1基因棉花上棉蚜的数量均少于WT植株和pMD植株,且在取食48 h时过表达GhLecRK1基因棉花上棉蚜蜜露的分泌量显著减少。【结论】GhLecRK1基因响应棉花对棉蚜的防御反应,GhLecRK1基因过量表达后可增强棉花对棉蚜的抗性。; 关键词棉花 GhLecRK1基因抗蚜性瞬时过表达; Keywords cotton GhLecRK1 gene aphid resistance transient overexpression; 分类号 S435.622.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名中国樱桃CpMADS47基因调控果实成熟软化的功能分析: 4; 作者田泰刘一璇王杨玥琨黄凤庭杨帅威王浩张静何文陈清王小蓉王燕; 机构四川农业大学园艺学院四川农业大学农业生物信息教育部重点实验室; 出处《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1186-1194,共9页; 基金四川省国际科技创新合作项目(2024YFHZ0302) 樱桃资源四川省科技资源共享服务平台项目。; 文摘【目的】探究中国樱桃CpMADS47基因的生物学特性及其在果实成熟软化中的作用。【方法】克隆获得与中国樱桃果实质地相关的MADS-box基因CpMADS47,进行生物信息学分析,异源瞬时过表达草莓果实进行功能验证。【结果】中国樱桃CpMADS47属SEP1/2-like基因,CDS区全长741 bp,编码246个氨基酸。CpMADS47蛋白与蔷薇科物种的亲缘关系较近。瞬时过表达草莓果实表明,CpMADS47通过促进草莓果实硬度降低、花青素苷积累、细胞壁成分解聚和ABA合成从而介导果实的成熟软化。【结论】中国樱桃CpMADS47基因能够促进果实成熟软化,为后续中国樱桃果实质地品质改良奠定理论基础和提供基因资源。; 关键词中国樱桃 CpMADS47 果实成熟软化生物信息学分析瞬时过表达; Keywords Chinese cherry[Cerasus pseudocerasus(Lindl.)G.Don] CpMADS47 fruit ripening and softening bioinformatics analysis transient overexpression; 分类号 S662.5 [农业科学—果树学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名紫丁香SoDXR基因克隆及其在单萜类物质合成中的功能分析: 5; 作者杨艺慧邹吉睿马波冷平生胡增辉吴静; 机构北京农学院园林学院城乡生态环境北京实验室; 出处《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期912-919,共8页; 基金北京市教委生态修复工程学高精尖学科建设项目。; 文摘 [目的]探究1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)基因在紫丁香单萜类物质合成中的作用,为紫丁香花香分子育种提供有效的基因资源和理论基础。[方法]以紫丁香花瓣为材料,克隆了SoDXR基因,并对其进行生物信息学和亚细胞定位分析、不同花发育时期和器官组织中的qRT-PCR表达分析以及探究其在金鱼草花瓣中异源瞬时过表达后的功能。[结果]SoDXR基因全长为1425 bp,编码474个氨基酸,编码的蛋白具有保守的DXP_reductoisom结构域,与桂花和油橄榄的相似性高达95%。亚细胞定位显示该蛋白主要定位于质体,与软件预测结果一致。伴随着开花,SoDXR表达水平呈先升高后降低的趋势,在初开期最高,其在各个器官组织中均有表达,花瓣中表达量最高,茎中表达量最低。瞬时过表达表明,SoDXR基因的表达水平显著高于对照,促进了主要单萜成分罗勒烯和月桂烯的释放,释放量分别增加了15.03倍和4.83倍。[结论]SoDXR基因正调控紫丁香单萜类物质的合成,表明DXR基因在花香次级代谢物合成中起到重要作用。; 关键词紫丁香萜类化合物 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶瞬时过表达; Keywords Syringa oblata terpenoids 1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase transient overexpression; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学] Q786 [生物学—分子生物学] S685.26 [农业科学—观赏园艺]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	中华按蚊电转化显微注射技术平台的构建及其在基因瞬时过表达中的应用	车林茸何正波韩宝珠陈晓洁闫振天乔梁陈斌	《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	NbJAZ3在苜蓿花叶病毒侵染本氏烟过程中的作用	赖诗雨梁巧兰魏列新牛二波陈应娥周鑫杨思正王博	《生物技术通报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	棉花凝集素类受体蛋白激酶基因GhLecRK1响应棉蚜危害的功能分析	何华楚龙燕李建平张建民于永浩	《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	中国樱桃CpMADS47基因调控果实成熟软化的功能分析	田泰刘一璇王杨玥琨黄凤庭杨帅威王浩张静何文陈清王小蓉王燕	《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	紫丁香SoDXR基因克隆及其在单萜类物质合成中的功能分析	杨艺慧邹吉睿马波冷平生胡增辉吴静	《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料