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瞬时受体电位M7通道蛋白对大鼠肝星状细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 刘红 李俊 +2 位作者 黄成 黄艳 周德喜 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期486-489,共4页
目的通过转染特异性siRNA,下调瞬时受体电位M7通道蛋白(TRPM7)在大鼠肝星状细胞系HSC-T6中的表达,研究其对HSC-T6凋亡的影响及内在机制。方法利用Li-pofectamineTM2000将特异性TRPM7-siRNA转染到HSC-T6内,分别运用流式细胞术检测HSCs凋... 目的通过转染特异性siRNA,下调瞬时受体电位M7通道蛋白(TRPM7)在大鼠肝星状细胞系HSC-T6中的表达,研究其对HSC-T6凋亡的影响及内在机制。方法利用Li-pofectamineTM2000将特异性TRPM7-siRNA转染到HSC-T6内,分别运用流式细胞术检测HSCs凋亡变化;Western blot检测TRPM7、Caspase-3蛋白的表达;RT-PCR检测TRPM7,Caspase-3、Bid mRNA的表达。结果 TRPM7-siRNA明显抑制TRPM7 mRNA和蛋白的表达。与正常组或对照组相比,转染组细胞凋亡率、凋亡蛋白Caspase-3及凋亡基因Bid的表达均明显上调。结论特异性TRPM7-siRNA能明显抑制TRPM7表达,诱导HSCs凋亡,其机制可能与其诱导凋亡基因Bid表达上调有关。 展开更多
关键词 瞬时受体电位m7通道 肝星状细胞 细胞凋亡 SIRNA CASPASE-3 BID
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抑制喉癌细胞瞬时受体电位M7表达对细胞生物学行为的影响及其机制 被引量:1
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作者 王慧敏 崔粲 +3 位作者 王银鑫 李艳峰 袁东杰 卢振民 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第5期708-713,共6页
目的探讨干扰瞬时受体电位M7(TRPM7)对喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响及其机制。方法体外培养人喉癌TU212细胞,分别构建3组TRPM7-shRNA(TRPM7-shRNA1、TRPM7-shRNA2、TRPM7-shRNA3组)及阴性对照shRNA-NC(shRNA-NC组)质粒载... 目的探讨干扰瞬时受体电位M7(TRPM7)对喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响及其机制。方法体外培养人喉癌TU212细胞,分别构建3组TRPM7-shRNA(TRPM7-shRNA1、TRPM7-shRNA2、TRPM7-shRNA3组)及阴性对照shRNA-NC(shRNA-NC组)质粒载体,并以脂质体转染法转染TU212细胞,以转染空载体的细胞作为Control组。采用ELISA法检测TU212细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,比色法检测上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;使用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测敲低TRPM7表达对TU212细胞增殖、侵袭的影响;使用Western blot检测TU212细胞侵袭、凋亡相关蛋白表达。结果转染后,与Control组比较,TRPM7-shRNA1组、TRPM7-shRNA2组和TRPM7-shRNA3组的TRPM7 mRNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05),且以TRPM7-shRNA1组下调最多(P<0.05)。功能实验中,与Control组比较,TRPM7-shRNA1组TU212细胞培养上清液中SOD水平降低(P<0.05),MDA、LDH水平升高(P<0.05);细胞增殖倍数减少、克隆形成率降低(P<0.05);细胞侵袭数减少(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<0.05);线粒体膜电位降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、cleaved caspase-3/caspase-3比值增加(P<0.05)。结论敲低TRPM7增加喉癌TU212细胞氧化应激水平,抑制TU212细胞增殖、侵袭,并通过线粒体途径诱导其凋亡。 展开更多
关键词 喉癌 瞬时受体电位m7 氧化应激 增殖 凋亡 侵袭
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瞬时受体电位M7在地塞米松诱导的小梁细胞骨架蛋白重塑中的作用
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作者 刘丽玲 徐建刚 +3 位作者 欧阳智琨 杨扬帆 吴开力 余敏斌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期259-265,共7页
目的探讨瞬时受体电位M7(TRPM7)在地塞米松诱导的小梁细胞骨架重塑中的作用。方法采用人小梁细胞株进行体外培养,第3~6代小梁细胞用于实验。采用免疫荧光检测技术对TRPM7在小梁细胞中的表达进行定位。在细胞培养基中加入0.2mg地塞... 目的探讨瞬时受体电位M7(TRPM7)在地塞米松诱导的小梁细胞骨架重塑中的作用。方法采用人小梁细胞株进行体外培养,第3~6代小梁细胞用于实验。采用免疫荧光检测技术对TRPM7在小梁细胞中的表达进行定位。在细胞培养基中加入0.2mg地塞米松处理小梁细胞4d,终浓度分别为1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol/L,采用Western blot法检测细胞中TRPM7蛋白在细胞中的表达量。将培养的小梁细胞分为正常对照组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA1转染组和TRPM7-siRNA2转染组,采用Western blot法检测细胞中TRPM7和p-cofilin相对蛋白表达量。将培养的细胞分为正常对照组、TRPM7-siRNA转染组、地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染+地塞米松组,采用免疫荧光技术法观察各组细胞中细胞骨架蛋白Phalloidin和黏着斑蛋白Vinculin的表达。将培养的细胞分为正常对照组、地塞米松处理组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA转染组、TRPM7抑制剂2-APB处理组和钙离子螯合剂EGTA处理组,采用免疫荧光技术测定各组细胞内钙离子荧光强度变化。结果TRPM7主要分布于小梁细胞的细胞膜,TRPM7蛋白相对表达量随着地塞米松剂量的增加而逐渐下降,组间总体比较差异有统计学意义(F=4.210,P〈0.05),1×10^-4mol/L地塞米松组细胞中TRPM7蛋白表达量明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.011)。与正常对照组和siRNA转染组比较,TRPM7-siRNAl组和TRPM7-siRNA2组细胞中TRPM7蛋白相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。倒置显微镜下可见地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞突起减少,细胞体稍变大。免疫荧光法显示地塞米松处理组小梁细胞骨架张力纤维和黏着斑蛋白增多,TRPM7-siRNA转染组细胞中张力纤维变少、变细。与正常对照组和siRNA转染组比较,地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞内钙离子荧光强度变弱。Westernblot检测显示,TRPM7-siRNA转染组细胞中p-confilin蛋白相对表达量明显低于siRNA转染组(0.317±0.031vs.0.092±0.071),差异有统计学意义(t=5.030,P=0.007)。结论高剂量地塞米松作用后可导致小梁细胞中TRPM7蛋白表达量下调,TRPM7蛋白下调可能通过使小梁细胞骨架微丝蛋白解聚和细胞内钙离子浓度的降低而参与地塞米松诱导的小梁细胞中细胞骨架的重塑。 展开更多
关键词 小梁细胞 瞬时受体电位 地塞米松 小干扰RNA 瞬时受体电位m7
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低强度聚焦超声通过瞬时受体电位M7促进骨髓间充质干细胞成骨分化
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作者 姚欢 郑妍 +2 位作者 李娅莎 赵丽 杨珂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第16期1469-1475,共7页
目的探讨瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在低强度聚焦超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化中的作用及其机制。方法分离培... 目的探讨瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在低强度聚焦超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化中的作用及其机制。方法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞检测其特异性表面标志,茜素红和油红O染色检测其分化能力。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性读数筛选LIPUS作用时间。ALP和茜素红染色观察LIPUS处理后促进成骨分化的能力,q PCR检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA水平表达的变化,并检测LIPUS处理后24、48、72 h Trpm7 mRNA水平表达的差异。进一步分为对照组(LIPUS未处理组)、LIPUS处理组、LIPUS+二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+Trpm7抑制剂2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)组,ALP活性读数、ALP染色和茜素红染色评价成骨分化能力,Western blot检测Trpm7和OPN、Runx2的蛋白表达。结果体外培养获得BMSCs,与未处理组比较,LIPUS作用2 min组细胞ALP活性读数升高最为明显,LIPUS处理后细胞的ALP染色和茜素红染色明显增强,成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2 mRNA表达明显增加(P<0.05),LIPUS处理1、2、3 d后Trpm7 mRNA表达显著增加(P<0.05)。LIPUS+2-APB组的ALP活性较LIPUS组和LIPUS+DMSO组明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LIPUS组和LIPUS+DMSO组的ALP染色和茜素红染色显示成骨分化明显增加,Trpm7、OPN和Runx2的蛋白表达也明显增强。与LIPUS+DMSO组比较,LIPUS+2-APB组的ALP染色和茜素红染色显示成骨分化明显下降,Trpm7、OPN和Runx2的蛋白表达也明显降低。结论 LIPUS促进BMSCs的成骨分化,并部分通过Trpm7发挥作用。 展开更多
关键词 低强度聚焦超声 骨髓间充质干细胞 瞬时受体电位m7 成骨分化
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镁离子与心肌重构的相关机制研究进展 被引量:4
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作者 马杰(综述) 马丽红(审校) 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2022年第5期538-542,共5页
心肌重构是慢性心力衰竭发生发展过程中的基本病理生理机制,包括心肌结构重构、心肌电重构和心肌纤维化等。越来越多的研究表明,镁离子的代谢平衡在心力衰竭心肌重构中的地位不容忽视。然而镁离子在心肌重构中的作用机制复杂且未见有明... 心肌重构是慢性心力衰竭发生发展过程中的基本病理生理机制,包括心肌结构重构、心肌电重构和心肌纤维化等。越来越多的研究表明,镁离子的代谢平衡在心力衰竭心肌重构中的地位不容忽视。然而镁离子在心肌重构中的作用机制复杂且未见有明确统一的描述。本文主要通过介绍镁离子在肾素-血管紧张素-醛固酮系统、钙稳态、瞬时受体电位通道M型(TRPM)7通道以及氧化代谢等方面的研究进展,以期探索镁离子如何参与心肌重构。但限于镁代谢研究的复杂性以及技术层面的局限性,未来有待更多的基础研究支撑和临床研究加以验证。 展开更多
关键词 镁离子 心肌重构 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 钙离子通道 瞬时受体电位通道m7通道 氧化应激
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