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敲除热敏瞬时受体电位锚蛋白1(BmTRPA1)基因后家蚕蛹脑-咽下神经节复合体的转录组学分析
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作者 白新宇 冯嘉伟 +3 位作者 张明蔚 包玫 邢东旭 杨婉莹 《昆虫学报》 北大核心 2025年第5期585-595,共11页
【目的】二化性家蚕Bombyx mori卵在25℃下催青时,热敏瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)被激活,随后可能激活一条与滞育激素(diapause hormone, DH)释放相关的未知信号通路。本研究旨在研究家蚕BmTRPA1调控DH分泌的分子机制,以及BmTRPA1与GAB... 【目的】二化性家蚕Bombyx mori卵在25℃下催青时,热敏瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)被激活,随后可能激活一条与滞育激素(diapause hormone, DH)释放相关的未知信号通路。本研究旨在研究家蚕BmTRPA1调控DH分泌的分子机制,以及BmTRPA1与GABAergic信号通路的关系。【方法】利用CRISPR/Cas9敲除25℃下催青的家蚕BmTRPA1基因,通过转录组测序筛选野生型(WT)和BmTRPA1^(-/-)突变型家蚕在蛹期第3天脑-咽下神经节(brain-suboesophagealganglion, Br-SG)复合体中的差异表达基因;对差异表达基因和特异表达基因分别进行GO分类和KEGG功能富集分析;qRT-PCR检测6个差异表达基因、调控GABAergic信号通路10个关键基因和神经肽基因K5的相对表达量。【结果】WT的Br-SG复合体中有13 039个基因表达,BmTRPA1^(-/-)Br-SG复合体中有12 937个基因表达,其中12 484个基因在WT和BmTRPA1^(-/-)Br-SG复合体中共表达,有555个基因在WT中Br-SG复合体特异表达,453个基因在BmTRPA1^(-/-)Br-SG复合体中特异表达;相比于WT Br-SG复合体,BmTRPA1^(-/-)Br-SG复合体有32个基因表达上调,13个基因表达下调。这些差异表达基因主要富集在正反馈调节过程、代谢、应激和细胞调控等关键生命活动过程,其中富集于蛋白质转运过程与内分泌的差异表达蛋白GAT属于质膜GABA转运蛋白,是调控家蚕DH释放的关键蛋白。qRT-PCR检测结果显示,GAT和K5在BmTRPA1^(-/-)Br-SG复合体中的相对表达量与WT Br-SG复合体中的相比显著下调。【结论】本研究在组学水平上证明,敲除TRPA1将降低GAT的表达,从而调控GABAergic信号通路,减少DH释放。研究结果为后续探索家蚕响应环境温度诱导滞育发生的分子调控机制提供了靶标蛋白和数据参考。 展开更多
关键词 家蚕 滞育 瞬时受体电位锚蛋白 转录组 脑-咽下神经节复合体
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瞬时受体电位锚蛋白-1对应激诱导的大鼠回肠黏膜损伤的影响
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作者 徐岩 郄文斌 +1 位作者 吴友平 屠伟峰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第18期2878-2881,共4页
目的探讨瞬时受体电位锚蛋白-1(transient receptor potential ankyrin-1,TRPA1)对浸水束缚应激(water immersion restraint stress,WIRS)诱导的大鼠回肠黏膜损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(NC组)、WIRS回肠黏... 目的探讨瞬时受体电位锚蛋白-1(transient receptor potential ankyrin-1,TRPA1)对浸水束缚应激(water immersion restraint stress,WIRS)诱导的大鼠回肠黏膜损伤的影响。方法雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(NC组)、WIRS回肠黏膜损伤模型组(WC组)、HC1组和HC2组。后3组大鼠放入鼠笼内,置(19±1)℃水中,水面平剑突。HC1组和HC2组WIRS前1 h腹腔注射TRPA1特异性拮抗剂HC-030031,剂量分别为100和200 mg/kg,WIRS 6 h后取背根神经节(DRG)和回肠组织。HE染色观察回肠黏膜病理损伤情况。RT-PCR、蛋白印迹法、免疫组织化学法检测NC组和WC组大鼠DRG和回肠组织中TRPA1的表达。结果与NC组比较,WC组回肠黏膜损伤严重,评分明显增高,DRG和回肠组织中TRPA1表达明显上调(P <0.001);与WC组比较,HC1组和HC2组回肠黏膜损伤情况明显好转,评分明显降低(P <0.01),且HC2组比HC1组损伤评分更低(P <0.01)。结论应激诱导大鼠回肠黏膜损伤与TRPA1表达上调密切相关。HC-030031有效减轻应激诱导的回肠黏膜损伤,并具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 应激 回肠黏膜损伤 瞬时受体电位锚蛋白-1 HC-030031 剂量依赖
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柚皮苷抑制致敏肥大细胞脱颗粒及相关炎症因子表达的效应机制研究 被引量：1
3
作者 耿蒙利 东淳 +4 位作者 孙丹 卢亮 卞旭 史亮 赵一丁 《辽宁中医杂志》 CAS 2023年第9期229-232,I0008,共5页
目的探讨柚皮苷(naringin,NG)对小鼠肥大细胞瘤细胞系(P815)脱颗粒及相关炎症因子的影响及对瘙痒相关受体的调控作用。方法采用Compound 48/80刺激P815细胞方法建立细胞模型,细胞增殖与活性检测(CCK8)法筛选柚皮苷药物安全浓度,设空白... 目的探讨柚皮苷(naringin,NG)对小鼠肥大细胞瘤细胞系(P815)脱颗粒及相关炎症因子的影响及对瘙痒相关受体的调控作用。方法采用Compound 48/80刺激P815细胞方法建立细胞模型,细胞增殖与活性检测(CCK8)法筛选柚皮苷药物安全浓度,设空白组、模型组、柚皮苷高、中、低剂量组(31.2μg/mL、15.6μg/mL、7.8μg/mL)。采用甲苯胺蓝染色进行肥大细胞计数;联酶免疫吸附法(ELISA法)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及组胺含量;采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测细胞沉淀中的瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)、瞬时受体电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)、组胺能第四受体(histamine-4 receptor,H4R)及mRNA的表达。结果(1)与空白组比较,模型组、柚皮苷高、中、低剂量组(NG-H、NG-M、NG-L)组胺及TNF-α含量显著升高(P<0.05),TRPA1、TRPV1及H4R表达均明显上调(P<0.01),模型组、NG-M、NG-L组细胞脱颗粒数目明显增多(P<0.01);(2)与模型组比较,NG-H、NG-M、NG-L组组胺及TNF-α含量降低(P<0.05),NG-H组、NG-M组TRPA1、TRPV1及H4R表达显著下降(P<0.01),NG-L组TRPA1、TRPV1及H4R表达降低(P<0.05);(3)NG-H组抑制组胺及TNF-α释放的作用优于NG-M、NG-L组(P<0.01,P<0.05),抑制TRPV1及H4R表达的作用优于NG-M组、NG-L组(P<0.05)。结论柚皮苷能够抑制体外Compound 48/80诱导的P815细胞脱颗粒及促炎介质释放,对瘙痒相关受体的表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 柚皮苷 肥大细胞 组胺 瘙痒 瞬时受体电位锚蛋白1 瞬时受体电位香草酸受体1
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