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TRPC3对OIR小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞生物学行为的调控作用
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作者 张越 刘晓静 +10 位作者 甄宇涵 姚瑶 邵斌 徐嫚鸿 王艳辉 刘志强 王伟 毛爱玲 张宝月 张铭连 陈志敏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期331-338,共8页
目的探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只,采用随机数字表法分为对照组和OIR组,每组16只,其... 目的探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只,采用随机数字表法分为对照组和OIR组,每组16只,其中对照组不做特殊处理,OIR组小鼠诱导OIR模型。出生后第17天(PN17)采用视网膜铺片免疫荧光染色验证模型构建是否成功。将体外培养HREC分为正常对照组、转染试剂组和si-TRPC3组,其中正常对照组不做特殊处理,转染试剂组和si-TRPC3组分别采用转染试剂和转染试剂+si-TRPC3转染。采用实时荧光定量PCR法检测TRPC3 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测TRPC3、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)蛋白相对表达量。另将HREC分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)组、si-TRPC3组和Pyr3(TRPC3通道抑制剂)组,分别用完全培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基(si-TRPC3转染72 h)和含有20 ng/ml VEGF重组蛋白+1μmol/L Pyr3的培养基培养48 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HREC增生能力;分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞横向和纵向迁移能力。结果PN17时OIR组小鼠视网膜出现病理性新生血管团簇强荧光染色。OIR组小鼠视网膜TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量分别为2.057±0.244和1.517±0.290,明显高于对照组的0.983±0.033和0.874±0.052,差异均有统计学意义(t=6.165、3.094,均P<0.05)。si-TRPC3组TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和转染试剂组,Nrf2和SOD蛋白相对表达量明显高于正常对照组和转染试剂组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,VEGF组细胞吸光度(A)值明显高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞A值明显低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,VEGF组细胞横向迁移率高于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组细胞横向迁移率低于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Transwell实验结果显示,VEGF组染色细胞数明显多于正常对照组,si-TRPC3组和Pyr3组染色细胞数明显少于VEGF组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论OIR模型小鼠视网膜中TRPC3表达水平升高,下调TRPC3可抑制HREC增生和迁移能力,其机制与Nrf2氧化应激通路激活有关。 展开更多
关键词 视网膜疾病 氧化应激 瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3 人视网膜血管内皮细胞
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TRPC3参与α-突触核蛋白引起的线粒体损伤 被引量:2
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作者 卢勇泉 陈敏 +3 位作者 高歌 段春礼 鲁玲玲 杨慧 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期857-862,共6页
目的探讨经典型瞬时受体电位通道3(transient receptor potential canonical channel 3,TRPC3)是否参与α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)引起的线粒体损伤。方法在α-syn过表达原代培养神经元、α-syn转基因及敲除小鼠模型,利用免疫... 目的探讨经典型瞬时受体电位通道3(transient receptor potential canonical channel 3,TRPC3)是否参与α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)引起的线粒体损伤。方法在α-syn过表达原代培养神经元、α-syn转基因及敲除小鼠模型,利用免疫印迹和免疫荧光技术检测TRPC3和α-syn在线粒体内的定位和表达;在原代培养神经元,运用MTT和乳酸脱氢酶法检测细胞活力和受损情况,JC-1法检测线粒体膜电势,观察敲减TRPC3对α-syn过表达引起的线粒体损伤和细胞损伤的影响。结果 TRPC3和α-syn共同表达于线粒体,过表达α-syn增加TRPC3在线粒体的分布,敲除α-syn则下调TRPC3在线粒体的分布。敲减TRPC3明显减轻过表达α-syn引起的线粒体膜电势下降和细胞毒性。结论 TRPC3可能参与过表达α-syn引起的线粒体损伤。 展开更多
关键词 帕金森病 神经元 Α-突触核蛋白 瞬时受体电位通道3 线粒体
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阿尔茨海默病小鼠模型中TRPC3通过上调ZO-1和LRP-1蛋白表达清除β淀粉样蛋白沉积 被引量:5
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作者 张舒蕾 张丽艳 +2 位作者 李珍慧 安一鸣 高翔宇 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1116-1120,共5页
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠模型中经典瞬时受体电位通道3 (TRPC3)和血脑屏障(BBB)在β淀粉样蛋白(Aβ)沉积清除中的关系。方法 将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、二酰基甘油类似物(OAG)组和吡啶化合物(Pyr3)组,每组15只。侧脑... 目的 探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠模型中经典瞬时受体电位通道3 (TRPC3)和血脑屏障(BBB)在β淀粉样蛋白(Aβ)沉积清除中的关系。方法 将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、二酰基甘油类似物(OAG)组和吡啶化合物(Pyr3)组,每组15只。侧脑室注射Aβ1-42建立AD小鼠模型。OAG组和Pyr3组小鼠分别连续21 d腹腔注射TRPC3激动剂OAG和抑制剂Pyr3。应用Morris水迷宫实验检测小鼠行为学,伊文思蓝(EB)染色检测小鼠BBB通透性,Western blotting检测小鼠紧密连接蛋白(ZO-1)、Aβ转运受体低密度脂蛋白受体相关蛋白1 (LRP-1)表达水平,ELISA测定小鼠海马和血清Aβ1-42浓度。结果 与假手术组比较,模型组小鼠学习记忆能力下降(P <0.001),EB含量增加(P <0.05),ZO-1、LRP-1蛋白表达下降(均P <0.01),脑组织和血清Aβ浓度均升高(P <0.01,P <0.05);与模型组比较,OAG组小鼠的学习记忆能力明显改善(P <0.05),EB含量下降(P <0.05),ZO-1、LRP-1蛋白表达增加(均P <0.05),脑组织Aβ浓度下降(P <0.05),血清Aβ浓度升高(P <0.05)。结论 AD小鼠中,TRPC3可能通过恢复BBB通透性和功能,上调ZO-1和LRP-1蛋白表达,加快脑组织对Aβ沉积的清除,从而改善AD行为学症状。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 经典瞬时受体电位通道3 低密度脂蛋白受体相关蛋白1 Β淀粉样蛋白
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β-淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病大鼠模型中BDNF与TRPC3的关系 被引量:3
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作者 张利华 张丽艳 +2 位作者 张小康 徐超龙 周义 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期217-221,共5页
目的探讨经典瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)与脑源性神经营养因子(BDNF)在阿尔茨海默病(AD)大鼠模型海马组织中的表达及其相互关系。方法将SD大鼠随机分为PBS组、AD组和AD+BDNF组。采用β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)侧脑室注射,制备AD模型。B... 目的探讨经典瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)与脑源性神经营养因子(BDNF)在阿尔茨海默病(AD)大鼠模型海马组织中的表达及其相互关系。方法将SD大鼠随机分为PBS组、AD组和AD+BDNF组。采用β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)侧脑室注射,制备AD模型。BDNF在造模14 d后经侧脑室导管注入。Morris水迷宫实验测定大鼠的空间学习记忆能力。实时PCR和Western blotting分别检测海马组织中TRPC3和BDNF m RNA和蛋白的表达情况。结果 Morris水迷宫实验表明,AD组大鼠第5天逃避潜伏期较PBS组延长(P<0.05);AD+BDNF组大鼠的逃避潜伏期较AD组缩短(P<0.05)。实时PCR及Western blotting结果表明,与PBS组相比,TRPC3和BDNF m RNA和蛋白在AD组表达均降低(P<0.05);与AD组相比,TRPC3 m RNA和蛋白在AD+BDNF组表达均增高(P<0.05)。结论 BDNF和TRPC3在AD大鼠海马组织表达降低;外源性BDNF可能通过上调TRPC3表达,从而改善Aβ1-42导致的AD大鼠空间学习记忆障碍,起到保护神经元的作用。 展开更多
关键词 经典瞬时受体电位通道蛋白3 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 脑源性神经营养因子
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去窦弓神经对自发性高血压大鼠主动脉TRPC3及TRPC6表达的影响 被引量:4
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作者 何杰 陈明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1037-1040,共4页
目的:研究去窦弓神经(Sinoaortic denervated,SAD)对自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rat,SHR)主动脉瞬时受体电位通道C3(Transient receptor potential canonical 3,TRPC3)及TRPC6亚型表达的影响,探讨TRPC3及TRPC6与血压变... 目的:研究去窦弓神经(Sinoaortic denervated,SAD)对自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rat,SHR)主动脉瞬时受体电位通道C3(Transient receptor potential canonical 3,TRPC3)及TRPC6亚型表达的影响,探讨TRPC3及TRPC6与血压变异(Blood pressure variability,BPV)的关系。方法:14只10周龄雄性SHR随机分为SAD组和假手术组,各7只。术后8周在清醒、自由活动状态下测定两组大鼠24 h动脉血压及BPV,采用逆转录多聚酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测主动脉组织TRPC3及TRPC6信使核糖核苷酸(Messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)与免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测其蛋白的表达。结果:术后8周,两组大鼠24 h平均收缩压(Systolic blood pressure,SBP)和舒张压(Diastolic blood pressure,DBP)比较无显著性差异;SAD组24 h收缩压变异(Systolic blood pressure variability,SBPV)显著高于假手术组大鼠(P<0.05),SAD组24 h舒张压变异(Diastolic blood pressure variability,DBPV)亦显著高于假手术组大鼠(P<0.01),主动脉组织TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达均显著高于假手术组大鼠(P<0.01),差异均有统计学意义。结论:SAD组大鼠SBPV和DBPV升高,同时TRPC3及TRPC6的mRNA和蛋白表达升高,提示TRPC3及TRPC6的升高与其BPV升高密切相关,TRPC3及TRPC6可能参与BPV的调控。 展开更多
关键词 去窦弓神经 瞬时受体电位通道C3、C6 血压变异
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吡唑化合物pyr3干预对压力负荷诱导的大鼠左心室肥厚的影响 被引量:3
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作者 田小芍 陈明 刘春霞 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期226-229,共4页
目的:探讨瞬时受体电位通道C亚族3亚型(TRPC3)的选择性阻滞剂吡唑化合物Ethyl-1-(4-f2,3,3一trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H—pyrazole-4-carboxylate(pyr3)的体内干预对压力负荷大鼠左心室肥厚(LvH... 目的:探讨瞬时受体电位通道C亚族3亚型(TRPC3)的选择性阻滞剂吡唑化合物Ethyl-1-(4-f2,3,3一trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H—pyrazole-4-carboxylate(pyr3)的体内干预对压力负荷大鼠左心室肥厚(LvH)程度的影响。方法:采用腹主动脉缩窄手术建立左心压力负荷模型。30只200—240g雄性SD大鼠随机分为五组(n=6):假手术对照组、手术对照组、假手术后全程给药组、手术后后期给药组,手术后全程给药组。6周后,计算各组大鼠左心室质量指数、左心室心肌细胞横径,逆转录多聚酶连反应(RT—PCR)、免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测TRPC3和钙调神经磷酸酶A13信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达水平。结果:与假手术对照组相比,手术对照组左心室肥厚相关指标(左心室质量指数和左心室心肌细胞横径)及TRPC3、钙调神经磷酸酶AB蛋白和mRNA的表达显著升高;假手术后全程给药组左心室肥厚相关指标无显著变化,而TRPC3和钙调神经磷酸酶AB蛋白及mRNA的表达量显著升高,差异均有统计学意义(P均〈0.05)。与手术对照组比较,手术后全程给药组左心室肥厚相关指标、TRPC3及钙调神经磷酸酶A13蛋白和mRNA表达均明显降低(P均〈0.05);手术后后期给药组左心室肥厚相关指标及钙调神经磷酸酶AB蛋白和mRNA的表达下降,差异均有统计学意义(P均〈0.05),而TRPC3的蛋白和mRNA表达未见显著降低。结论:pyr3体内干预能够一定程度上阻止压力负荷导致的大鼠左心室肥厚,降低压力负荷大鼠左心室TRPC3和钙调神经磷酸酶AB表达的上调。 展开更多
关键词 Ethyl-1-(4-(2 3 3-trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H—pyrazole-4-carboxylate 压力负荷 左心室肥厚 瞬时受体电位通道C亚族3亚型 钙调神经磷酸酶Aβ
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NLRP3在TRPC3介导癫痫的过程中表达升高 被引量:1
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作者 卢敏 杨虹 贺细菊 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期650-654,共5页
目的研究经典型瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential canonical 3,TRPC3)在促发癫痫过程中对焦亡相关因子NLRP3表达的影响,探讨TRPC3在癫痫发病过程中的作用机制。方法 HEK293细胞系转染TRPC3,采用钙影像技术检测TRPC3... 目的研究经典型瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential canonical 3,TRPC3)在促发癫痫过程中对焦亡相关因子NLRP3表达的影响,探讨TRPC3在癫痫发病过程中的作用机制。方法 HEK293细胞系转染TRPC3,采用钙影像技术检测TRPC3介导钙离子内流的作用;采用免疫组织化学法检测癫痫患者手术切除海马标本中NLRP3的表达情况;制作海人酸(KA)癫痫大鼠模型,利用TRPC3特异性抑制剂Pyr3阻断TRPC3,观察动物行为学改变,以免疫组织化学法和Western blot技术检测动物海马组织中NLRP3的表达水平。结果 TRPC3可通过ROCE和SOCE途径介导钙离子内流进入细胞;癫痫患者和癫痫模型大鼠海马组织内NLRP3水平显著升高;阻断TRPC3后模型大鼠癫痫发作减轻,且NLRP3表达水平降低。结论 TRPC3促进癫痫发病的过程与激活炎性体NLRP3有关。 展开更多
关键词 经典型瞬时受体电位通道蛋白3 癫痫 焦亡 炎性体 NLRP3
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β淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病小鼠模型中BDNF通过上调TRPC3发挥神经保护作用 被引量:5
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作者 李爽 张丽艳 +2 位作者 李雪建 周义 金戈 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1086-1090,共5页
目的通过给予脑源性神经营养因子(BDNF)特异性受体酪氨酸激酶受体B(TrkB)激动剂7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)、经典瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)激动剂二酰基甘油类似物(OAG)和抑制剂吡唑化合物(Pyr3),研究BDNF对阿尔茨海默病(AD)小鼠的神... 目的通过给予脑源性神经营养因子(BDNF)特异性受体酪氨酸激酶受体B(TrkB)激动剂7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)、经典瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)激动剂二酰基甘油类似物(OAG)和抑制剂吡唑化合物(Pyr3),研究BDNF对阿尔茨海默病(AD)小鼠的神经保护作用以及BDNF与TRPC3的相互关系。方法将费城癌症研究所小鼠随机分为对照组、AD组、AD+7,8-DHF组、AD+OAG组和AD+7,8-DHF+Pyr3组,每组16只。小鼠侧脑室注射β淀粉样蛋白(Aβ)1-42制备AD小鼠模型;Morris水迷宫实验评估小鼠的空间学习记忆能力;Western blotting检测海马突触相关蛋白(synapsin-Ⅰ、CaMKⅡ-α)和TRPC3蛋白的表达;ELISA检测海马Aβ1-42的沉积程度。结果与AD组相比,AD+7,8-DHF组和AD+OAG组小鼠学习记忆能力增强,Aβ沉积减轻,synapsin-Ⅰ、CaMKⅡ-α和TRPC3蛋白的表达增加;与AD+7,8-DHF组相比,AD+7,8-DHF+Pyr3组上述指标变化趋势相反。结论BDNF通过上调TRPC3蛋白表达减轻Aβ异常沉积,进而改善AD小鼠的神经突触和认知功能。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 经典瞬时受体电位通道蛋白3 脑源性神经营养因子 Β淀粉样蛋白
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