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高硒通过PI3K/AKT/FoxO1信号通路对绵羊睾丸间质细胞自噬的影响
1
作者 董佳宁 胡樱凡 +3 位作者 窦宇飞 李俊 石磊 任有蛇 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期3837-3848,共12页
旨在探讨微量元素硒通过PI3K/AKT/FoxO1通路对绵羊睾丸间质细胞自噬的影响及其分子机制。本研究采用3只8月龄健康雄性杜湖杂交绵羊的睾丸进行睾丸间质细胞的分离与培养,根据团队前期研究结果,建立不同浓度亚硒酸钠处理组(0、2、4和8μmo... 旨在探讨微量元素硒通过PI3K/AKT/FoxO1通路对绵羊睾丸间质细胞自噬的影响及其分子机制。本研究采用3只8月龄健康雄性杜湖杂交绵羊的睾丸进行睾丸间质细胞的分离与培养,根据团队前期研究结果,建立不同浓度亚硒酸钠处理组(0、2、4和8μmol·L^(-1))处理细胞18 h,每个处理组6个重复,试验重复3次。使用CCK-8检测细胞增殖活性;采用MDC检测细胞自噬水平、qRT-PCR和Western blot检测细胞内自噬相关基因(ATG5、P62和LC3)表达以及PI3K/AKT/FoxO1信号通路关键因子(PI3K、AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1和核内FoxO1)的表达水平;在此基础上,通过添加AKT特异性激活剂SC79或转染siFoxO1,探究PI3K/AKT/FoxO1信号通路在高硒(8μmol·L^(-1))调控绵羊睾丸间质细胞自噬的作用机制。结果表明:2μmol·L^(-1)组细胞活力最高(P<0.05),而8μmol·L^(-1)组细胞活力最低(P<0.05),2μmol·L^(-1)组ROS含量显著低于其他各组(P<0.05),高硒处理导致ROS的积累。使用MDC检测自噬,随着硒浓度升高,在8μmol·L^(-1)时自噬水平最高(P<0.05),显著增加细胞自噬相关因子(ATG5和LC3-II/I)的丰度(P<0.05),显著降低P62表达(P<0.05)。与对照组相比,8μmol·L^(-1)组显著抑制(P<0.05)PI3K和p-AKT活性,显著增加(P<0.05)FoxO1以及核内FoxO1的表达,显著降低p-FoxO1的丰度(P<0.05)。为了进一步探讨PI3K/AKT/FoxO1信号通路在高硒诱导细胞自噬中的作用,使用SC79(15 mg·L^(-1))预处理1 h,或者转染siFoxO1发现在间质细胞中LC3-II/I比值和ATG5丰度显著降低(P<0.05),P62显著上调减轻高硒诱导的自噬(P<0.05)。同时,SC79显著抑制高硒诱导的FoxO1去磷酸化和大量核转位(P<0.05)。综上所述,高硒通过抑制PI3K/AKT通路调控FoxO1磷酸化及其核易位,诱导绵羊间质细胞氧化应激和自噬。研究结果有助于阐明高硒对绵羊睾丸间质细胞产生负面影响的分子机制。 展开更多
关键词 硒 睾丸间质细胞 PI3K/AKT/FoxO1通路 自噬
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不同发育阶段关中奶山羊睾丸间质细胞的生物学特性
2
作者 武永杰 范宁娟 +3 位作者 陈鸿 赵芳娥 马琳 徐永平 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期31-39,共9页
【目的】研究幼龄期、初情期和成年期关中奶山羊睾丸间质细胞(Leydig cells,LCs)的形态、分布特点、超微结构特征及睾酮合成水平,解析不同发育阶段LCs的形态特征与睾酮合成水平之间的相关性。【方法】使用光镜和改良后的透射电镜技术观... 【目的】研究幼龄期、初情期和成年期关中奶山羊睾丸间质细胞(Leydig cells,LCs)的形态、分布特点、超微结构特征及睾酮合成水平,解析不同发育阶段LCs的形态特征与睾酮合成水平之间的相关性。【方法】使用光镜和改良后的透射电镜技术观察不同月龄奶山羊LCs的形态、分布规律及超微结构特征;采用免疫组织化学染色方法检测睾酮合成关键酶3β-羟基类固醇脱氢酶的表达和分布;采用酶联免疫吸附试验检测血清中促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和睾酮含量的变化;采用荧光定量PCR和免疫印迹技术分析LCs成熟和睾酮合成关键基因/蛋白表达的规律。【结果】与幼龄期相比,初情期和成年期的LCs逐渐变大、呈不规则多边形,且逐渐向间质中央移动。初情期和成年期的LCs胞质内含有大量脂滴,且脂滴与线粒体、光面内质网等细胞器密切接触。随着性成熟,血清中的LH和睾酮含量显著或极显著增加,睾丸组织中与睾酮合成相关的基因表达水平显著或极显著上调。【结论】关中奶山羊LCs的睾酮合成能力与其发育成熟过程密切相关,初情期和成年期的LCs胞质内存在大量脂滴且与线粒体直接接触,这为形态学方法研究脂滴参与睾酮的合成提供了科学依据。 展开更多
关键词 奶山羊 形态学方法 睾丸间质细胞 睾酮 脂滴
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红景天多糖对低氧环境下猪睾丸间质细胞增殖及凋亡的影响 被引量：2
3
作者 罗金婷 许发芳 +6 位作者 王磊 罗璇 马玉红 张剑搏 黄伟华 尚月军 吴国芳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2441-2450,共10页
本研究探讨了红景天多糖(rhodiola sachalinensis polysaccaride, RSP)对缺氧条件下猪睾丸间质细胞增殖和凋亡的影响及其机制。通过CCK-8法测定细胞活力,筛选出RSP的最适宜浓度和预处理时间;设正常组、低氧组、低氧+RSP组,流式细胞术检... 本研究探讨了红景天多糖(rhodiola sachalinensis polysaccaride, RSP)对缺氧条件下猪睾丸间质细胞增殖和凋亡的影响及其机制。通过CCK-8法测定细胞活力,筛选出RSP的最适宜浓度和预处理时间;设正常组、低氧组、低氧+RSP组,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,RT-qPCR检测细胞增殖和凋亡相关基因(CCND1、CDK4、IL-6、TNF-a、Bcl-2、Bax、Caspase-3) mRNA表达水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、p21、JNK、p-JNK、p53表达水平。低氧条件下,猪睾丸间质细胞活力下降,经0.012 5mg·mL^(-1) RSP预处理18 h后,细胞活力有所提高。流式细胞术结果显示,RSP能缓解猪睾丸间质细胞低氧引起的细胞周期阻滞。RSP显著上调Bcl-2、CCND1、CDK4的表达(P<0.05),下调TNF-α、IL-6、Bax、Caspase-3、p21、p53、pJNK/JNK的表达(P<0.05)。RSP能保证低氧环境下猪睾丸间质细胞由S期进入G2期,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,推测RSP通过p53/p21和JNK通路调控细胞增殖和凋亡。 展开更多
关键词 红景天多糖 睾丸间质细胞 低氧环境 增殖 凋亡
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内质网应激对睾丸间质细胞中睾酮合成影响的研究进展 被引量：2
4
作者 李敬轩 龙城 齐晓龙 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4722-4731,共10页
内质网是具有多种功能的细胞器,参与物质运输,在蛋白质修饰加工、脂质与甾体类激素的合成、细胞应激以及维持钙稳态等生物活动中发挥重要作用。当内质网上错误折叠或未折叠蛋白过度堆积会引起内质网应激反应,无法调节时则会启动细胞凋... 内质网是具有多种功能的细胞器,参与物质运输,在蛋白质修饰加工、脂质与甾体类激素的合成、细胞应激以及维持钙稳态等生物活动中发挥重要作用。当内质网上错误折叠或未折叠蛋白过度堆积会引起内质网应激反应,无法调节时则会启动细胞凋亡程序。睾丸间质细胞是睾酮合成的主要场所,通过一系列合成酶将胆固醇转化为睾酮,对于维持动物繁殖性能至关重要。近年来有研究显示,在雄性动物睾丸间质细胞合成睾酮过程中,常包含内质网应激和未折叠蛋白反应,通过调控不同的信号通路导致细胞凋亡,影响睾酮合成。而目前对于内质网应激对睾酮合成影响的具体机制尚不明确。作者综述了在雄性动物睾丸间质细胞中,内质网应激介导不同细胞凋亡途径、氧化损伤以及钙离子途径对睾酮合成的影响及可能的分子机制,以期为通过调节内质网应激从而提高睾酮合成提供新思路。 展开更多
关键词 内质网应激 睾丸间质细胞 睾酮 细胞凋亡
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基于线粒体损伤探讨双酚A诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的研究
5
作者 杨文哲 刘克祥 +4 位作者 王诗睿 赵彤 潘飞龙 赵树臣 赵立佳 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3739-3751,共13页
【目的】从线粒体损伤角度探究双酚A(BPA)暴露引起小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的作用机制。【方法】利用不同浓度BPA(0、10、30、60、90、120、150μmol/L)处理TM3细胞24 h后,采用CCK-8法筛选出引起细胞凋亡的最低BPA浓度。将TM3细胞随... 【目的】从线粒体损伤角度探究双酚A(BPA)暴露引起小鼠睾丸间质细胞(TM3)凋亡的作用机制。【方法】利用不同浓度BPA(0、10、30、60、90、120、150μmol/L)处理TM3细胞24 h后,采用CCK-8法筛选出引起细胞凋亡的最低BPA浓度。将TM3细胞随机分为对照组(0μmol/L BPA)和BPA组(60μmol/L BPA),每组3个重复,各处理24 h。通过倒置光学显微镜观察细胞状态,TUNEL染色观察细胞凋亡。再将TM3细胞随机分为对照组(0μmol/L BPA)、BPA组(60μmol/L BPA)、BPA和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)共处理组(60μmol/L BPA+5 mmol/L NAC),每组3个重复,各处理24 h。ELISA法检测细胞培养上清中丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1染色观察细胞线粒体膜电位,实时定量PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶1(Gpx1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰剂亚基(Gclm)、过氧化氢酶(Cat)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Gclc)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、NAD依赖性蛋白脱乙酰酶Sirtuin3(Sirt3)、半胱天冬酶3(Casp3)、细胞色素C(Cycs)、B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达水平,Western blotting检测BAX和细胞凋亡调节因子BCL-2蛋白的相对表达量,流式细胞仪检测细胞凋亡率。【结果】TM3细胞在60μmol/L BPA处理24 h后,细胞相对存活率开始出现极显著下降(P<0.01),细胞凋亡率极显著增高(P<0.01),细胞数量明显减少。与对照组相比,60μmol/L BPA处理24 h后,TM3细胞中MDA含量极显著增加(P<0.01),T-SOD活性极显著下降(P<0.01),抗氧化相关基因(Gpx 1、Cat、Gclm、Gclc基因)mRNA表达水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),ROS生成极显著增加(P<0.01);细胞中红/绿荧光强度比值极显著下降(P<0.01),线粒体功能相关基因(Mfn 2、Sirt 3基因)mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),线粒体凋亡通路相关基因(Casp 3、Cycs、Bax基因)mRNA表达水平极显著升高(P<0.01),BAX蛋白表达量极显著升高(P<0.01),BCL-2蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。与BPA处理组相比,BPA+NAC处理组TM3细胞中MDA含量显著降低(P<0.05),T-SOD活性显著升高(P<0.05),抗氧化相关基因(Gpx 1、Cat、Gclm、Gclc基因)mRNA表达水平显著升高(P<0.05),ROS生成极显著减少(P<0.01),细胞中绿色荧光极显著减弱,红色荧光极显著增强,红/绿荧光强度比值显著升高(P<0.05),线粒体功能相关基因(Mfn 2、Sirt 3基因)mRNA表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),线粒体凋亡通路相关基因(Casp 3、Cycs、Bax基因)mRNA表达水平极显著降低(P<0.01),BAX蛋白表达量极显著降低(P<0.01),BCL-2蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01),细胞凋亡率极显著下降(P<0.01)。【结论】BPA暴露可导致TM3细胞发生氧化应激,引起线粒体功能受损,从而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 双酚A 氧化应激 线粒体损伤 凋亡 小鼠睾丸间质细胞
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苦参总黄酮对醋酸铅诱导小鼠睾丸间质细胞氧化应激的改善作用及对Keap1/Nrf2信号通路的影响 被引量：2
6
作者 刘玥欣 来永巍 +5 位作者 王艳春 徐博 路倩 安英 任旷 范红艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期320-325,共6页
目的:观察苦参总黄酮(SF)对醋酸铅(LA)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激的改善作用及其对KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,探讨SF改善由LA诱导的TM3细胞氧化应激的相关作用机制。方法:利用... 目的:观察苦参总黄酮(SF)对醋酸铅(LA)诱导的小鼠睾丸间质细胞TM3氧化应激的改善作用及其对KELCH状ECH相关蛋白1(Keap1)/细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,探讨SF改善由LA诱导的TM3细胞氧化应激的相关作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、50和80µmol·L^(-1))LA和不同浓度(0、12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1))SF分别干预24 h后的TM3细胞存活率;将TM3细胞随机分为空白对照组、LA组、LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组。除空白对照组外,其他各组均采用50µmol·L^(-1)LA诱导TM3细胞24 h建立TM3细胞氧化应激模型,其中LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞再分别给予12.5、25.0和50.0 mg·L^(-1)SF。利用MTT法检测TM3细胞存活率;WST-1法和硫代巴比妥酸(TBA)法检测TM3细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;Western blotting法检测Nrf2、Keap1和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与0µmol·L^(-1)LA组比较,10、20、50和80µmol·L^(-1)LA组TM3细胞存活率明显降低(P<0.01);与0 mg·L^(-1)SF组比较,12.5、25.0、50.0和80.0 mg·L^(-1)SF组TM3细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01);与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞存活率明显升高(P<0.01);WST-1法和TBA法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01);Western blotting法检测,与LA组比较,LA+低剂量SF组、LA+中剂量SF组和LA+高剂量SF组TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Keap1和Caspase-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:SF对LA诱导TM3细胞氧化应激具有一定改善作用,并可降低TM3细胞中Keap1蛋白表达水平,升高TM3细胞中Nrf2蛋白表达水平。 展开更多
关键词 苦参总黄酮 醋酸铅 睾丸间质细胞 氧化应激 KELCH状ECH相关蛋白1 核因子E2相关因子2
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青春期糖尿病对鼠睾丸间质细胞功能和细胞核雄激素受体的影响 被引量：13
7
作者 王忠山 王成忠 +3 位作者 左文静 许宗革 王弘珺 张家颖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期575-578,共4页
４０日龄雄性Ｗｊｓｔａｒ大鼠４０只，分为对照（Ｃ）组：腹腔注射赋形剂；糖尿病（Ｄ）组：腹腔注射ＳＴＺ，５５ｍｇ／ｋｇ体重；胰岛素及时治疗糖尿病（ＤＣＩＲ）组：给ＳＴＺ３天后进行胰岛素治疗；胰岛素延迟治疗糖尿病（ＤＤＩ... ４０日龄雄性Ｗｊｓｔａｒ大鼠４０只，分为对照（Ｃ）组：腹腔注射赋形剂；糖尿病（Ｄ）组：腹腔注射ＳＴＺ，５５ｍｇ／ｋｇ体重；胰岛素及时治疗糖尿病（ＤＣＩＲ）组：给ＳＴＺ３天后进行胰岛素治疗；胰岛素延迟治疗糖尿病（ＤＤＩＲ）组：注８ＴＺ３０天后进行胰岛素治疗，结果是：Ｃ、ＤＣＩＲ、ＤＤＩＲ和Ｄ组的血清睾酮水平分别为６３９±２．９７，５．６２±２．７７，５０７±３．７６和，Ｄ组显著低于其它３组（Ｐ＜０．０１，０．００１）；离体培养间质细胞的睾酮生成量分别是６．０４±５．０２，１．５８±０．５１．０．６３±０．１７和０．５０±０．２３ｐｍｏｌ／１０６，Ｃ组显著高于其它３组（Ｐ＜００５，０．００１），ＤＣＩＲ组显著高于ＤＤＩＲ和Ｄ组（Ｐ＜０．００１）；经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析获得Ｋｄ值各组分别是２．７４±０．５９，３．３１±０．９１，２．６３±０．９４和４．３１±１．２９ｎｍｏｌ／Ｌ，组间比较无显著差异（Ｐ＞０．０５）；Ｂｍａｘ分别是１３．１２±３．０７、１４．７１±２．９６、６．３９±１．８２和７．２３±２４６ｆｍｏｌ／ｍｇ，ＤＤＩＲ组和Ｄ组显著低于Ｃ组和ＤＣＩＲ组（Ｐ＜０．０５）。 展开更多
关键词 青春期 糖尿病 雄激素 睾丸间质细胞 细胞核
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牛磺酸对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响及作用机理初探 被引量：8
8
作者 冯颖 杨建成 +3 位作者 石娇 杨群辉 蒋燕 胡建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1293-1296,共4页
将雄性Wistar大鼠（220～250g）的睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度（5％、30％、58％、70％）Percoll分离液分离，在细胞培养液中分别加入牛磺酸及促性腺激素（HCG）、雄烯二酮、孕酮、cAMP进行培养，用放射免疫分析方法测定作用24h后... 将雄性Wistar大鼠（220～250g）的睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度（5％、30％、58％、70％）Percoll分离液分离，在细胞培养液中分别加入牛磺酸及促性腺激素（HCG）、雄烯二酮、孕酮、cAMP进行培养，用放射免疫分析方法测定作用24h后培养液中睾酮含量。结果表明，牛磺酸可使睾丸间质细胞分泌睾酮的能力显著增加；能增加HCG和cAMP诱导的睾酮分泌；能促进雄烯二酮和孕酮向睾酮的转化。牛磺酸能增加睾丸间质细胞睾酮的分泌，并可能在类固醇合成的多个环节中都起到了一定的促进作用。 展开更多
关键词 牛磺酸 睾丸间质细胞 睾酮 大鼠
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老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化 被引量：9
9
作者 李维仁 韩勃萱 +7 位作者 刘涛 李广永 周峰 巩艳青 高喆珠 崔万寿 白光一 辛钟成 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期505-508,共4页
目的:观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatoryprotein,StAR)和胆固醇侧链裂解酶(cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc)蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机... 目的:观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatoryprotein,StAR)和胆固醇侧链裂解酶(cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc)蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机制。方法:青年人(20～30岁)及老年人(70～90岁)睾丸标本各10例,对患者进行AMS(Aging Male’s Symptoms)评分。应用HE染色观察睾丸组织形态学变化,电子显微镜观察睾丸间质细胞的超微结构改变,Western blot法比较青年组和老年组睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平的差异,并用ELISA法检测其血清总睾酮水平的差异。结果:老年组AMS评分显著高于青年组(61.25±7.08 vs.20.75±3.73,P<0.001),且血清总睾酮水平显著低于青年组(3.12±0.58μg/L vs.6.29±1.17μg/L,P<0.05)。HE染色显示,老年人睾丸呈老年退行性改变,电子显微镜下观察到老年睾丸间质细胞线粒体肿胀,线粒体嵴消失。睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平显著低于青年组(P<0.05)。结论:老年人睾丸间质细胞结构、线粒体的损伤,以及StAR和P450scc蛋白表达水平的下降等病理变化均与老年人迟发性性腺功能减退症症状和血清总睾酮水平变化密切相关,其确切机制有待深入研究。 展开更多
关键词 衰老 性腺功能减退症 胆固醇侧链裂解酶 类固醇合成快速调节蛋白 睾丸间质细胞
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培养的睾丸间质细胞对hCG刺激的反应性 被引量：9
10
作者 王鲜忠 吴建云 +2 位作者 孙燕 潘红梅 张家骅 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期297-300,共4页
本文介绍了用酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞,并研究其对促性腺激素的反应性。结果表明在0～50IUml内,睾酮的分泌量随着hCG剂量的增加而增加,在50IUml～100IUml内,加大hCG剂量并不能增强间质细胞的分泌功能。研究还发现随着培... 本文介绍了用酶解法结合差速离心分离仔猪睾丸间质细胞,并研究其对促性腺激素的反应性。结果表明在0～50IUml内,睾酮的分泌量随着hCG剂量的增加而增加,在50IUml～100IUml内,加大hCG剂量并不能增强间质细胞的分泌功能。研究还发现随着培养时间的延长,间质细胞分泌睾酮的功能逐渐减低,培养1d和2d时对hCG(人绒毛膜促性腺激素)刺激的反应能力最强;随着培养时间的进一步延长,间质细胞的反应性下降,4d时与对照无明显差异(P>0.05)。间质细胞对首次刺激的反应敏感,当连续给予刺激时,睾酮的分泌受到抑制,在24h的分泌峰后不再出现分泌高峰。而首次刺激后间隔2d再刺激,间质细胞虽有反应,但反应较弱。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 睾酮 人绒毛膜促性腺激素 反应性 HCG 培养时间 分泌量 离心分离 分泌功能 细胞分泌
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促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响 被引量：15
11
作者 戈一峰 王大勇 +7 位作者 蒋超 张艳梅 韩雪峰 卢坤刚 崔英霞 黄宇烽 黄祝 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1138-1142,共5页
目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH... 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。 展开更多
关键词 GNRH类似物 荧光定量PCR 大鼠睾丸间质细胞 膜联蛋白5 3β-羟类固醇脱氢酶
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促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达 被引量：10
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作者 柳海燕 时姗姗 +6 位作者 陶晓倩 卢坤刚 韩雪峰 张艳梅 崔英霞 李晓军 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2009年第8期789-793,共5页
目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD... 目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成。GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用。文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h。GnRHa(10-7mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达。结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90 min后,p-ERK水平在5 min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10 min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90 min时恢复到正常水平。加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5 min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平。用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24 h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05)。结论:GnRH激动剂可能通过ERKMAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌。 展开更多
关键词 促性腺激素释放激素 ERK MAPK 睾丸间质细胞 3Β-HSD
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甲醛急性染毒对性成熟期雄性大鼠精子质量、血清性激素及睾丸间质细胞结构及功能的影响 被引量：6
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作者 王海旭 周党侠 +1 位作者 李砚 郑烈瑞 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期413-415,425,共4页
目的探讨不同剂量甲醛急性染毒后对雄性大鼠精子质量、血清性激素及睾丸间质细胞结构和功能的影响。方法 48只雄性SD大鼠随机分为甲醛染毒高[10mg/(kg.d)]、中[1mg/(kg.d)]、低[0.1mg/(kg.d)]剂量组和对照组(注射生理盐水)4组,每组12只... 目的探讨不同剂量甲醛急性染毒后对雄性大鼠精子质量、血清性激素及睾丸间质细胞结构和功能的影响。方法 48只雄性SD大鼠随机分为甲醛染毒高[10mg/(kg.d)]、中[1mg/(kg.d)]、低[0.1mg/(kg.d)]剂量组和对照组(注射生理盐水)4组,每组12只。腹腔注射染毒7d后,进行精子质量检测,放免法测血清激素,制备睾丸组织标本,光镜下观察睾丸组织形态,并进行统计学分析。结果与对照组相比,各剂量甲醛染毒组的精子数量、活动率显著下降(P<0.05,P<0.001),而精子畸形率显著升高(P<0.001);甲醛染毒剂量与血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平呈显著正相关(r=0.709,P<0.05;r=0.622,P<0.05),与血清睾酮(T)水平则呈显著负相关(r=-0.762,P<0.05);光镜下中、高剂量甲醛染毒组大鼠睾丸组织部分间质萎缩,间质细胞水肿,数量减少,并且间质细胞呈退化趋势。结论一定剂量的甲醛急性染毒对雄性大鼠精子质量、血清性激素水平、间质细胞的结构及功能都造成了明显的损伤,这也是甲醛具有生殖毒性的重要原因之一。 展开更多
关键词 甲醛 生殖毒性 睾丸间质细胞 精子质量 性激素 大鼠
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1,3-二氯-2-丙醇对睾丸间质细胞R2C活性及孕酮合成的影响 被引量：6
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作者 白顺 孙建霞 +3 位作者 白卫滨 邹飞雁 张齐好 黄亚东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期292-295,共4页
目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用... 目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用细胞4h或24h,通过单细胞电泳法(SCGE)检测其作用4h时对DNA损伤的程度;通过放射免疫法(RIA)检测4h或24h处理时对孕酮合成的影响。结果:与对照组相比,1,3-DCP能抑制R2C细胞的增殖,其IC25、IC50、IC75分别为(1.161±0.046)、(1.897±0.018)、(3.100±0.040)mmol/L;作用4h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用4h或24h后与对照组相比均能降低孕酮的合成。结论:1,3-DCP能抑制R2C的活性,影响细胞孕酮的合成。 展开更多
关键词 1 3-二氯-2-丙醇 睾丸间质细胞 孕酮 细胞活性 机制
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睾丸间质细胞移植治疗中老年男性雄激素部分缺乏症动物模型的实验研究 被引量：11
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作者 孙祥宙 邓春华 +1 位作者 郭海彬 刘建中 《实用医学杂志》 CAS 2004年第9期1008-1009,共2页
目的 :探讨对PADAM模型的老年SD大鼠进行同种异体睾丸间质细胞 (Leydig细胞 )移植的可行性和疗效。方法 :选取 10只符合标准的老年SD大鼠作为受体 ,应用成年SD大鼠的睾丸进行体外分离和培养 ,将获得的高纯度和高活力的Leydig细胞同种异... 目的 :探讨对PADAM模型的老年SD大鼠进行同种异体睾丸间质细胞 (Leydig细胞 )移植的可行性和疗效。方法 :选取 10只符合标准的老年SD大鼠作为受体 ,应用成年SD大鼠的睾丸进行体外分离和培养 ,将获得的高纯度和高活力的Leydig细胞同种异体移植到老年SD大鼠的大腿内侧肌群内 ,定期检查其移植前后血睾酮和游离睾酮的水平变化情况。结果 :移植后的Leydig细胞的分泌功能良好 ,老年SD大鼠的血睾酮和游离睾酮水平均显著升高 ,并大约于移植后的 7～ 12d开始稳定在一定的水平 ,可持续 2 7d以上。结论 :睾丸间质细胞移植能有效治疗PADAM。 展开更多
关键词 SD大鼠 老年 睾丸间质细胞 移植治疗 PADAM 移植后 雄激素部分缺乏 血睾酮 水平 结论
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仔猪睾丸间质细胞培养方法的比较 被引量：7
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作者 卿利娟 魏泓 +6 位作者 李婧 肖榕 吴群 葛亮 商海涛 郑小波 刘宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期29-31,35,共4页
为了对比仔猪睾丸间质细胞不同培养方法的培养效果。运用过筛培养法、不过筛培养法,组织块培养法3种方法对仔猪睾丸间质细胞进行体外分离和培养,并对其进行细胞各项指标的比较。结果显示,不过筛培养法培养的细胞活力、纯度、细胞功能都... 为了对比仔猪睾丸间质细胞不同培养方法的培养效果。运用过筛培养法、不过筛培养法,组织块培养法3种方法对仔猪睾丸间质细胞进行体外分离和培养,并对其进行细胞各项指标的比较。结果显示,不过筛培养法培养的细胞活力、纯度、细胞功能都较好,培养时间也短;过筛培养法培养的细胞活力较低;组织块培养法培养的细胞纯度较低。但在其他细胞指标上,后两种方法又各自有优点。结果3种培养方法都能简单有效的培养出状态良好的仔猪睾丸间质细胞,但其在纯度,活力,培养时间等方面有所差别。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 猪 纯度 活力 功能
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淫羊藿苷对大鼠睾丸间质细胞射线损伤的保护作用 被引量：5
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作者 张卫星 贾东辉 +2 位作者 王瑞 李周 迟凯凯 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1229-1232,共4页
目的研究中药单体淫羊藿苷对于大鼠睾丸间质细胞60Co-γ照射后的保护作用。方法 50只成年雄性SD大鼠,完全随机分为A(正常对照组)、B(照射对照组)、C(3 d灌胃组)、D(7 d灌胃组)、E(15 d灌胃组)等5组(n=10)。A、B 2组以生理盐水灌胃15 d,C... 目的研究中药单体淫羊藿苷对于大鼠睾丸间质细胞60Co-γ照射后的保护作用。方法 50只成年雄性SD大鼠,完全随机分为A(正常对照组)、B(照射对照组)、C(3 d灌胃组)、D(7 d灌胃组)、E(15 d灌胃组)等5组(n=10)。A、B 2组以生理盐水灌胃15 d,C、D、E组于照射前以淫羊藿苷[80 mg/(kg.d)]分别灌胃3、7、15 d后,B、C、D、E 4组行60Co-γ射线8 Gy下腹部均匀照射1次。照射后空腹12 h处死大鼠,光镜下观察大鼠睾丸组织形态学变化,反转录PCR法检测睾酮合成限速酶胆固醇侧链裂解酶(P450scc)基因的表达量。ELISA法测定睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。结果B组睾酮较A组降低(P<0.05),黄体生成素升高(P<0.05)。C、D、E组较B组睾酮升高,其中D、E组与B组比较有统计学意义(P<0.05),黄体生成素水平较B组降低,其中E组与B组比较有统计学意义(P<0.05),P450scc表达量B组较A组降低,具有统计学意义(P<0.05),C、D、E组较B组升高,其中E组与B组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论淫羊藿苷对大鼠睾丸间质细胞射线照射具有保护作用,且以15 d灌胃组效果最佳。 展开更多
关键词 射线 淫羊藿苷 睾丸间质细胞
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黄芪多糖对大剂量(60)~Coγ射线损伤大鼠睾丸间质细胞的影响 被引量：6
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作者 王瑞 张杰 +2 位作者 张卫星 秦俊昌 王磊 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第6期791-793,共3页
目的:探讨黄芪多糖(APS)对60Coγ射线损伤大鼠睾丸间质细胞的防治作用。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组、60Coγ照射组、APS+60Coγ照射组。观察各组大鼠睾丸间质细胞的形态学改变;ELISA法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)的含... 目的:探讨黄芪多糖(APS)对60Coγ射线损伤大鼠睾丸间质细胞的防治作用。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组、60Coγ照射组、APS+60Coγ照射组。观察各组大鼠睾丸间质细胞的形态学改变;ELISA法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)的含量;RT-PCR法检测睾丸间质细胞黄体生成素受体(LHR)mRNA水平。结果:与空白对照组相比,60Coγ照射组大鼠睾丸间质细胞形态发生改变,细胞体积缩小,胞质减少,细胞核皱缩,数目减少;APS+60Coγ照射组睾丸组织病理改变较60Coγ照射组减轻。3组大鼠血清T及LH水平差异无统计学意义(F=2.446和1.142,P>0.05),睾丸组织中LHR的mRNA的表达差异有统计学意义(F=24.032,P<0.001)。结论:APS可防治60Coγ射线对睾丸间质细胞损伤,其机制可能与促进睾丸间质细胞LHRmRNA的高表达有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 睾丸间质细胞 60Coγ射线 大鼠
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成年小鼠睾丸间质细胞的分离、鉴定及功能检测 被引量：6
19
作者 张柳平 邵根宝 潘耀谦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第9期40-43,共4页
为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行I型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞。细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-s... 为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行I型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞。细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-steroid-dehydrogenase,3β-HSD)染色鉴定。将分离纯化的睾丸间质细胞进行体外培养,在基础睾酮和人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激培养条件下,用放射免疫分析法对培养上清中的睾酮含量进行检测。结果显示,通过该方法能获得高纯度成年小鼠睾丸间质细胞(>95%),培养的睾丸间质细胞具有分泌基础睾酮以及对hCG刺激反应的能力。提示采用该方法对成年小鼠睾丸间质细胞进行分离纯化具有高效性、可用性,通过该方法获得的睾丸间质细胞是体外研究药物对睾酮分泌功能影响的良好模型。 展开更多
关键词 睾丸间质细胞 分离 鉴定 功能检测 成年小鼠
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二苯乙烯苷调控胰岛素/IGF-1信号通路延缓大鼠睾丸间质细胞衰老的作用机制 被引量：6
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作者 李少华 姜丽萍 +3 位作者 牛佳瑶 王乐 牛嗣云 齐峰 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第3期297-303,共7页
采用自由基损伤的方法建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型,用流式细胞术检测各组细胞周期的变化;应用RT-qPCR、免疫荧光和Western blot技术检测睾丸间质细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平.结果显示:与正常组相比,衰老组β-半... 采用自由基损伤的方法建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型,用流式细胞术检测各组细胞周期的变化;应用RT-qPCR、免疫荧光和Western blot技术检测睾丸间质细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平.结果显示:与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%以上(P<0.05),G1期所占比重明显增加,S期所占比重明显减少(P<0.05).胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化:IRS1、IGF-1、IRS2、INSR在衰老组的表达水平明显低于正常组(P<0.05),IGFBP3在衰老组的mRNA表达水平明显高于正常组(P<0.05),二苯乙烯苷可逆转上述现象,上调IGF-1、INSR、IRS1、IRS2表达,下调IGFBP3的mRNA表达.结果表明二苯乙烯苷通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓睾丸间质细胞衰老. 展开更多
关键词 二苯乙烯苷 睾丸间质细胞 延缓衰老 胰岛素/IGF-1信号传导通路 大鼠
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