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利用血清冷冻保存犊牛睾丸原代细胞试验
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作者 马志宏 《甘肃畜牧兽医》 2012年第4期28-30,共3页
在不利用冷冻保护剂的条件下,用犊牛血清对经胰酶消化分散的犊牛睾丸原代细胞进行超低温冷冻保存试验。结果表明,解冻后细胞成活率达75.73%以上,培养时可有效形成单层细胞,满足常规试验要求。复苏后的犊牛睾丸原代细胞于体外培养时存在... 在不利用冷冻保护剂的条件下,用犊牛血清对经胰酶消化分散的犊牛睾丸原代细胞进行超低温冷冻保存试验。结果表明,解冻后细胞成活率达75.73%以上,培养时可有效形成单层细胞,满足常规试验要求。复苏后的犊牛睾丸原代细胞于体外培养时存在贴壁迟缓,前期生长速度较慢等现象,且要求pH值低于7.0。 展开更多
关键词 犊牛 睾丸原代细胞 冷冻保存 犊牛血清
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稳转hTERT绵羊睾丸细胞系的建立 被引量:1
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作者 杨雪 任善会 +5 位作者 王相伟 龚真莉 殷相平 孙跃峰 陈豪泰 万学瑞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期43-48,共6页
羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料,实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达,延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞... 羊睾丸原代细胞的体外培养是探究牛羊病毒致病机理的重要材料,实际科研工作中常受困于此类细胞传代性差、性质不稳定等缺点。外源性导入人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)可以促使端粒酶活性的表达,延长细胞体外培养寿命是一种有效建立细胞永生化的方法。本试验中,通过RT-PCR获得hTERT。利用同源重组的技术,成功的构建了hTERT的真核表达质粒和慢病毒质粒。利用慢病毒表达系统,建立了稳转hTERT绵羊的睾丸细胞系。间接免疫荧光和蛋白免疫印迹试验研究结果均显示,hTERT基因已成功整合进入绵羊睾丸基因组中并稳定表达。第30代次的羊睾丸细胞生长较快,性状较稳定,表明已成功构建了具有永生化特性的绵羊睾丸细胞系,为草食动物病毒的相关研究提供重要的细胞模型。 展开更多
关键词 绵羊 睾丸原代细胞 人端粒酶逆转录酶基因 HTERT 永生化细胞
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玉米赤霉烯酮对原代大鼠睾丸支持细胞增殖相关基因表达以及氧化应激的影响 被引量:2
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作者 徐明龙 郭保平 +3 位作者 胡进 牛亚茹 肖成 徐银学 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第4期298-302,共5页
研究玉米赤霉烯酮(ZEA)体外对原代大鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖相关基因波形蛋白(vimentin)和细胞周期蛋白D1(CCND1)表达及对氧化应激中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的影响。体外分离培养原代大鼠睾丸... 研究玉米赤霉烯酮(ZEA)体外对原代大鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖相关基因波形蛋白(vimentin)和细胞周期蛋白D1(CCND1)表达及对氧化应激中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的影响。体外分离培养原代大鼠睾丸支持细胞,不同浓度的ZEA作用细胞20 h,采用MTT法检测细胞活力,荧光定量PCR检测Vimentin、CCND1基因mRNA的表达,Westblot检测其蛋白的表达,并且检测细胞培养液中SOD、GSH-PX活力。结果表明:与对照组相比,Vimentin、CCND1 mRNA表达量都随着ZEA浓度的升高而降低,但是Vimentin蛋白表达量却没有明显变化,CCND1蛋白表达量和mRNA表达量一致。SOD活性、GSH-PX活性均随着ZEA浓度的升高呈现增高趋势。结果表明,ZEA对体外培养大鼠支持细胞具有生殖毒性作用,影响Vimentin、CCND1的表达调控,导致细胞产生氧化应激效应从而使SOD与GSH-PX活性产生变化。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 原代睾丸支持细胞 波形蛋白 周期蛋白D1 氧化应激酶
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山羊痘病毒在不同日龄山羊睾丸细胞中的生长特性研究 被引量:1
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作者 牟豪 余远迪 +1 位作者 许国洋 杨柳 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期799-803,共5页
【目的】明确山羊痘病毒(GTPV)AV41弱毒疫苗株在不同日龄山羊原代睾丸细胞中的增殖效率,为选择病毒或疫苗株的培养细胞提供数据支撑。【方法】通过传统方式对7日龄和60日龄山羊睾丸细胞分离培养,利用长时间动态细胞成像及数据分析系统比... 【目的】明确山羊痘病毒(GTPV)AV41弱毒疫苗株在不同日龄山羊原代睾丸细胞中的增殖效率,为选择病毒或疫苗株的培养细胞提供数据支撑。【方法】通过传统方式对7日龄和60日龄山羊睾丸细胞分离培养,利用长时间动态细胞成像及数据分析系统比较2个日龄细胞的生长效率;接种GTPV,观察2个日龄细胞在感染病毒后的形态特征;通过间接免疫荧光和荧光定量PCR比较GTPV的增殖效率。【结果】7日龄和60日龄山羊睾丸细胞的形态特征和生长速率无明显差异;接种GTPV后,2个日龄的原代山羊睾丸细胞均能产生细胞病变,但是出现细胞病变的时间以及病变特征存在差别。间接免疫荧光和荧光定量PCR结果表明:GPTV在60日龄山羊睾丸细胞中的增殖效率高于7日龄。【结论】GTPV在7日龄和60日龄山羊原代睾丸细胞中均能发生病毒增殖,且2种细胞均能发生明显的细胞病变,但60日龄细胞的增殖效率高于7日龄细胞。研究结果对采用山羊睾丸细胞培养GTPV弱毒株有一定的指导作用。 展开更多
关键词 山羊原代睾丸细胞 山羊痘病毒 细胞病变 增殖效率
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杨凌某羊场羊口疮病毒的分离鉴定 被引量:6
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作者 张瑜 高晶晖 +3 位作者 张立强 高洋 贾云晓 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期61-65,共5页
为获得杨凌地区羊口疮病毒野毒株,在某羊场采集具有典型羊口疮症状的病羊口唇部结痂并研磨,无菌过滤后取500μL接种于犊牛睾丸原代细胞。盲传4代,测定细胞病变的第5代病毒的滴度,用羊口疮病毒B2L和F1L基因的特异性引物进行PCR检测。结... 为获得杨凌地区羊口疮病毒野毒株,在某羊场采集具有典型羊口疮症状的病羊口唇部结痂并研磨,无菌过滤后取500μL接种于犊牛睾丸原代细胞。盲传4代,测定细胞病变的第5代病毒的滴度,用羊口疮病毒B2L和F1L基因的特异性引物进行PCR检测。结果显示,第5代病毒能够致犊牛睾丸原代细胞出现细胞病变(CPE),病毒滴度为107.66 TCID50/mL;扩增出了羊口疮病毒B2L和F1L基因的片段,其大小分别为540bp和437bp,与用于设计引物的参考毒株序列的相似度分别为96.57%和96.43%,可确定为羊口疮病毒的相应基因片段,获得了羊口疮病毒分离株。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 PCR检测 犊牛睾丸原代细胞 分离 鉴定
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