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我国牛源睡眠嗜组织菌的分离鉴定及生物学特性分析
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作者 李富祥 赵文华 +1 位作者 高华峰 宋建领 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期341-347,共7页
为鉴定云南某奶牛场犊牛呼吸道疾病的病原,本研究采用含5%牛血清的哥伦比亚琼脂培养板从2头牛的肺脏样品中分别分离到嗜CO_(2)革兰氏阴性小球杆菌YN24101和YN24102,通过生化试验初步鉴定分离菌;采用PCR扩增分离菌16S rDNA基因并测序,经B... 为鉴定云南某奶牛场犊牛呼吸道疾病的病原,本研究采用含5%牛血清的哥伦比亚琼脂培养板从2头牛的肺脏样品中分别分离到嗜CO_(2)革兰氏阴性小球杆菌YN24101和YN24102,通过生化试验初步鉴定分离菌;采用PCR扩增分离菌16S rDNA基因并测序,经BLAST比对后下载与分离菌同源性较高的巴氏杆菌科参考株的16S rDNA基因序列,采用MegAlign软件分析分离菌16S rDNA基因序列的同源性;利用MEGA 6.0软件中的N-J法构建分离菌16S rDNA基因的遗传进化树,分析分离菌的遗传进化关系。结果显示,2株分离菌大部分生化特征与睡眠嗜组织菌(Histophilus somni)ATCC 43625T株和其他H.somni参考株相同;2株分离菌与H.somni ATCC 43625T株16S rDNA基因序列的同源性均达99.9%,与其他H.somni参考株16S rDNA基因序列的同源性为99.2%~99.9%;2株分离菌与全部H.somni参考株处于16S rDNA基因进化树的同一进化分支,2株分离菌均鉴定为H.somni。采用K-B纸片扩散法检测分离菌对7类12种抗菌药物的敏感性,结果显示,2株H.somni分离菌均对青霉素类的氨苄西林、头孢菌素类的头孢唑林和头孢曲松以及氨基糖苷类的庆大霉素敏感,但对氨基糖苷类的链霉素、酰胺醇类的氯霉素和氟苯尼考、喹诺酮类的氧氟沙星和诺氟沙星以及磺胺类的磺胺甲恶唑耐药,表明2株分离菌的耐药性均较强,且均呈多重耐药性。将分离菌以不同剂量感染小鼠,通过改良寇氏法计算分离菌对小鼠的半数致死量(LD50),分析分离菌对小鼠的致病性。结果显示,2株H.somni分离菌均能导致小鼠的呼吸道症状,且死亡小鼠仅出现肺脏出血的剖检病变;2株分离菌YN24101和YN24102对小鼠的LD50分别为7.0×10~5cfu和3.3×10~5cfu;表明2株分离菌的致病性均较强。本研究于国内首次报道了牛源H.somni的分离鉴定及其生物学特性,丰富了我国H.somni菌株库,并为牛H.somni的分离培养提供参考方法,为其感染的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 分离 鉴定 致病性
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睡眠嗜组织菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 李富祥 高华峰 +1 位作者 赵文华 宋建领 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期706-712,共7页
睡眠嗜组织菌(H.somni)是牛、绵羊和山羊的重要致病菌。目前,国内尚无H.somni荧光定量PCR(qPCR)检测方法,为建立H.somni TaqMan qPCR检测方法,本研究根据H.somni 16S rRNA基因序列设计1对引物和1条TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的... 睡眠嗜组织菌(H.somni)是牛、绵羊和山羊的重要致病菌。目前,国内尚无H.somni荧光定量PCR(qPCR)检测方法,为建立H.somni TaqMan qPCR检测方法,本研究根据H.somni 16S rRNA基因序列设计1对引物和1条TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,初步建立了H.somni TaqMan qPCR方法。利用建立的方法检测39种牛、绵羊和山羊源的不同细菌,结果显示该方法仅能检测到H.somni,而与溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和海藻百伯史坦菌等38种细菌均无交叉反应,特异性较强。利用建立的方法检测6.3×10^(5)拷贝/μL~6.3×10^(-1)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD-16S,结果显示该方法对其的检测限为6.3拷贝/μL,敏感性较高。以6.3×10^(5)拷贝/μL~6.3×10^(3)拷贝/μL的重组质粒标准品pMD-16S为模板,利用建立的方法进行批内和批间重复性试验,结果显示批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%,重复性较好。利用建立的TaqMan qPCR和文献报道的普通PCR方法同时检测124份患呼吸道疾病牛、山羊和绵羊的肺脏样品和鼻拭子样品,结果显示二者对H.somni的检出率分别为11.29%(14/124)和10.48%(13/124),TaqMan qPCR方法与普通PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为99.19%(123/124)、100%(13/13)和99.10%(110/111),表明该TaqMan qPCR方法的准确性较高。本研究首次在国内建立检测H.somni的qPCR方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性和准确性好,为牛、绵羊和山羊H.somni高通量的快速检测提供新的技术支撑。 展开更多
关键词 睡眠嗜组织菌 TaqMan荧光定量PCR 绵羊 山羊
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牛呼吸系统疾病病原菌生物膜探析
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作者 张蕾 陈亮 +10 位作者 黄宣凯 冯万宇 兰世捷 苗艳 沈思思 李丹 金振华 张淑芬 马姗姗 刘秋瑾 姚美玲 《山东畜牧兽医》 2025年第6期72-74,共3页
牛呼吸道疾病(Bovinerespiratorydisease,BRD)是养牛生产中的一项重大挑战,牛呼吸道疾病受环境、宿主和微生物等多种因素的影响,疾病的诊断和治疗比较复杂。过度拥挤、运输和通风不良等环境应激因素会增加牛的易感性,而溶血性曼氏杆菌... 牛呼吸道疾病(Bovinerespiratorydisease,BRD)是养牛生产中的一项重大挑战,牛呼吸道疾病受环境、宿主和微生物等多种因素的影响,疾病的诊断和治疗比较复杂。过度拥挤、运输和通风不良等环境应激因素会增加牛的易感性,而溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌和牛支原体等微生物则均是导致该病发生的病原体。BRD抗菌治疗失败的原因多样,生物膜形成可能是关键因素之一,它不仅影响着疾病的感染发病,还关系到病原抗生素耐药性的增加。溶血性曼氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、睡眠嗜组织菌能在体外形成生物膜,尽管生物膜已被证明在人类慢性感染中扮演着重要角色,但有关家畜细菌生物膜的研究却很少。因此生物膜在牛呼吸道疾病细菌复合体致病性及耐药性中发挥的作用有待深入探究。本文综述了牛呼吸道疾病各病原体生物膜生物学及多细菌生物膜,更好地了解牛呼吸道疾病细菌生物膜的形成及其在临床疾病和抗生素耐药性中所起到的作用,将为养殖场BRD防控提供新策略。 展开更多
关键词 牛呼吸道疾病 生物膜 溶血性曼氏杆 多杀性巴氏杆 睡眠嗜组织菌
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