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p75NTR受体过表达对人RPE细胞氧化应激损伤的促进作用
被引量：
2
1
作者
齐赟
白玉婧
+1 位作者
黎晓新
石璇
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期17-23,共7页
背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病致盲的病理基础，视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激损伤在CNV生成中具有重要作用。RPE氧化应激损伤能激活肿瘤坏死因子超家族的p75NTR受体，引起血管内皮细胞增生，但其调控机制尚未明确。 ...
背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病致盲的病理基础，视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激损伤在CNV生成中具有重要作用。RPE氧化应激损伤能激活肿瘤坏死因子超家族的p75NTR受体，引起血管内皮细胞增生，但其调控机制尚未明确。 目的探讨RPE细胞中p75NTR受体在CNV形成过程中的作用，并对其作用机制进行分析。 方法体外培养人RPE细胞（ARPE19细胞系），用p75NTR受体过表达质粒转染RPE细胞，分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法进行转染细胞中p75NTR受体基因和蛋白水平检测，以未转染p75NTR受体过表达质粒的RPE细胞作为对照组。采用BrdU法检测各组细胞的增生活性；采用Annexin V-FITC/PI双染法及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；用H2DCFDA荧光法和流式细胞计数检测细胞内活性氧簇（ROS）阳性百分数；采用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞线粒体标志物的表达（膜电位）及细胞色素C的表达；采用Western blot法检测和比较各组细胞中裂解caspase-3、Fas及血管内皮生长因子165（VEGF165）蛋白的相对表达水平。 结果p75NTR受体质粒转染组细胞中p75NTR受体的mRNA及蛋白表达量分别是对照组的（6.11±0.77）倍和（7.42±0.48）倍，差异均有统计学意义（t＝11.49、23.17，均P〈0.01）。BrdU法检测结果显示，p75NTR受体质粒转染12、24、36和48 h组细胞的增生活性（A值）率分别为（93.12±0.56）%、（86.30±0.66）%、（72.53±0.86）%和（60.77±2.81）%，对照组为100%，随着p75NTR受体质粒转染时间的延长，RPE细胞活性值逐渐减低，细胞凋亡百分数明显增加，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。p75NTR受体质粒转染组转染后48 h，RPE细胞内ROS相对荧光强度为对照组的2.4倍，差异有统计学意义（t＝16.45，P〈0.01）；对照组RPE细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为100%，而p75NTR受体质粒转染组细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为（37.30±2.06）%，2个组比较差异有统计学意义（t＝57.71，P〈0.01）。p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中细胞色素C的荧光强度明显高于对照组，与对照组比较，p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中裂解caspase-3、Fas及VEGF165蛋白表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。 结论p75NTR受体过表达引起RPE细胞线粒体损伤及细胞凋亡，同时刺激RPE细胞分泌血管生成因子，促进CNV的形成。p75NTR受体可能是调控RPE损伤的另一个重要通路。
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关键词
神经生长因子受体/代谢
氧化应激
眼色素上皮/病理
脉络膜新生血管
人
信号转导/生理
p75NTR受体
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职称材料
题名
p75NTR受体过表达对人RPE细胞氧化应激损伤的促进作用
被引量：
2
1
作者
齐赟
白玉婧
黎晓新
石璇
机构
北京大学人民医院眼科视觉损伤与修复教育部重点实验室视网膜脉络膜疾病诊治研究北京市重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期17-23,共7页
基金
National Natural Science Foundation of China，Peking University People's Hospital Research & Development Foundation，国家自然科学基金项目，北京大学人民医院研究与发展基金项目
文摘
背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病致盲的病理基础，视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化应激损伤在CNV生成中具有重要作用。RPE氧化应激损伤能激活肿瘤坏死因子超家族的p75NTR受体，引起血管内皮细胞增生，但其调控机制尚未明确。 目的探讨RPE细胞中p75NTR受体在CNV形成过程中的作用，并对其作用机制进行分析。 方法体外培养人RPE细胞（ARPE19细胞系），用p75NTR受体过表达质粒转染RPE细胞，分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot法进行转染细胞中p75NTR受体基因和蛋白水平检测，以未转染p75NTR受体过表达质粒的RPE细胞作为对照组。采用BrdU法检测各组细胞的增生活性；采用Annexin V-FITC/PI双染法及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；用H2DCFDA荧光法和流式细胞计数检测细胞内活性氧簇（ROS）阳性百分数；采用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞线粒体标志物的表达（膜电位）及细胞色素C的表达；采用Western blot法检测和比较各组细胞中裂解caspase-3、Fas及血管内皮生长因子165（VEGF165）蛋白的相对表达水平。 结果p75NTR受体质粒转染组细胞中p75NTR受体的mRNA及蛋白表达量分别是对照组的（6.11±0.77）倍和（7.42±0.48）倍，差异均有统计学意义（t＝11.49、23.17，均P〈0.01）。BrdU法检测结果显示，p75NTR受体质粒转染12、24、36和48 h组细胞的增生活性（A值）率分别为（93.12±0.56）%、（86.30±0.66）%、（72.53±0.86）%和（60.77±2.81）%，对照组为100%，随着p75NTR受体质粒转染时间的延长，RPE细胞活性值逐渐减低，细胞凋亡百分数明显增加，与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。p75NTR受体质粒转染组转染后48 h，RPE细胞内ROS相对荧光强度为对照组的2.4倍，差异有统计学意义（t＝16.45，P〈0.01）；对照组RPE细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为100%，而p75NTR受体质粒转染组细胞中线粒体标志物阳性细胞比例为（37.30±2.06）%，2个组比较差异有统计学意义（t＝57.71，P〈0.01）。p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中细胞色素C的荧光强度明显高于对照组，与对照组比较，p75NTR受体质粒转染组RPE细胞中裂解caspase-3、Fas及VEGF165蛋白表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。 结论p75NTR受体过表达引起RPE细胞线粒体损伤及细胞凋亡，同时刺激RPE细胞分泌血管生成因子，促进CNV的形成。p75NTR受体可能是调控RPE损伤的另一个重要通路。
关键词
神经生长因子受体/代谢
氧化应激
眼色素上皮/病理
脉络膜新生血管
人
信号转导/生理
p75NTR受体
Keywords
Receptor, Nnerve growth factor/metabolism
Oxidative stress
Pigment epithelium of eye/pathology
Choroidal neovascularization
Humans
Signal transduction/physiology
p75NTR receptor
分类号
R773.4 [医药卫生—眼科]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
p75NTR受体过表达对人RPE细胞氧化应激损伤的促进作用
齐赟
白玉婧
黎晓新
石璇
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
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