雷公藤多苷对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞脂肪分化、炎症及纤维化的影响 被引量：1

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作者 朱劲 朱姝 +2 位作者 钟宇玲 陈宏 林文劼 《眼科新进展》 北大核心 2025年第3期202-210,共9页

目的探究雷公藤多苷(TGs)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OFs)脂肪分化、炎症及纤维化的影响。方法首先培养从12例TAO患者中提取的OFs并进行鉴定。采用CCK-8实验检测不同浓度TGs(0、12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^(-1))对OF... 目的探究雷公藤多苷(TGs)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OFs)脂肪分化、炎症及纤维化的影响。方法首先培养从12例TAO患者中提取的OFs并进行鉴定。采用CCK-8实验检测不同浓度TGs(0、12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^(-1))对OFs活性的影响。其次,诱导OFs脂肪分化表型并分组:对照组(Control组)、脂肪分化组(DM组)、不同浓度TGs组(12.5 mg·L^(-1)TGs组、25.0 mg·L^(-1)TGs组、50.0 mg·L^(-1)TGs组);诱导OFs炎症表型并分组:Control组、白介素-1β(IL-1β)诱导组(IL-1β组)、不同浓度TGs组(分组及浓度均同上);诱导OFs纤维化表型并分组:Control组、TGF-β1诱导组(TGF-β1组)、不同浓度TGs组(分组及浓度均同上)。油红O染色检测脂肪分化表型各组OFs内脂滴;ELISA检测炎症表型各组OFs的IL-6与TNF-α表达水平,以及纤维化表型各组OFs的HA表达水平;Transwell实验观察纤维化表型各组OFs的细胞迁移率;RT-qPCR及Western blot检测脂肪分化表型OFs各组细胞内PPAR-γ、c/EBP-α、FABP-4、perilipin-1、adiponectin的mRNA及蛋白质表达水平、炎症表型OFs各组细胞内IL-6、TNF-α、COX-2、MCP-1、ICAM-1的mRNA及蛋白质表达水平、纤维化表型OFs各组细胞内Vimentin、Fibronectin、COL1A1、COL1A2、ACTA2的mRNA及蛋白质表达水平。结果细胞鉴定为OFs,12.5、25.0、50.0 mg·L^(-1)TGs干预的OFs细胞活性无明显变化,后续选择这些浓度TGs进行后续实验。在脂肪分化表型的OFs中,经TGs处理后,细胞内橙红色脂滴明显减少;与DM组相比,各TGs组细胞内PPAR-γ、c/EBP-α、FABP-4、perilipin-1、adiponectin的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在炎症表型的OFs中,与IL-1β组相比,各TGs组细胞培养上清液中IL-6与TNF-α表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与IL-1β组相比,各TGs组细胞内IL-6、TNF-α、COX-2、MCP-1、ICAM-1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在纤维化表型的OFs中,与TGF-β1组相比,各TGs组细胞迁移率均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与TGF-β1组相比,各TGs组细胞上清液中HA表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与TGF-β1组相比,各TGs组细胞内Vimentin、Fibronectin、COL1A1、COL1A2、ACTA2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论TGs能够抑制TAO-OFs脂肪分化,抑制IL-1β诱导的TAO-OFs炎症反应和TGF-β1诱导的TAO-OFs纤维化。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 雷公藤多苷 眼眶成纤维细胞 脂肪分化 炎症 纤维化

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白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves’眼眶成纤维细胞增殖作用的影响 被引量：4

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作者 吴中耀 刘桂琴 +3 位作者 杨华胜 郑健樑 张平 林征 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第6期561-564,共4页

目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1... 目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1α刺激成纤维细胞 2 4～ 72h ;不同浓度的IL 1ra或 /和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 48h ;75ng/ml的IL 1ra和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 2 4～ 72h。用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率。结果　IL 1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖 ,而IL 1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL 1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性 ,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异。结论　IL 1ra是IL 1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂 。 展开更多

关键词 IL—1 正常人眼 眼眶成纤维细胞 IL-1 受体拮抗剂 白介素1 刺激 增殖作用 抑制率 抑制剂

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SB431542和TGF-β_1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响 被引量：4

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作者 陆燕 黄媛媛 +2 位作者 蔡季平 程金伟 魏锐利 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第3期210-213,共4页

目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和SB431542（TGF-β1受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,... 目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和SB431542（TGF-β1受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的影响,为TAO眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法实验分为3组。第1组：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time PCR,RT-PCR）检测不同浓度TGF-β1（0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1）刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后α-SMA及CTGF mRNA的表达情况;第2组：采用RT-PCR检测10μg·L-1 TGF-β1在不同的时间点（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后α-SMA及CTGF mRNA的表达情况;第3组（分为4小组处理）：眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用30μmol·L-1SB431542刺激眼眶成纤维细胞、10μg·L-1 TGF-β1单独刺激眼眶成纤维细胞、30μmol·L-1 SB431542联合10μg·L-1 TGF-β1刺激眼眶成纤维细胞（SB431542预先刺激眼眶成纤维细胞1 h,然后再加入TGF-β1）,采用RT-PCR检测α-SMA及CTGF mRNA的表达。结果TGF-β1在一定的浓度范围内（1~10μg·L-1）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGF mRNA,随着浓度增加mRNA表达增加,各浓度组（1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1）与空白对照组（0μg·L-1）相比,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。TGF-β1在一定的时间范围内（0~24 h）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGF mRNA,随着时间延长mRNA表达增加,各时间组（3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）与0 h相比,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。10μg·L-1的TGF-β1诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA在24 h达到峰值,而CTGF mRNA在12 h即可达到峰值。SB431542对眼眶成纤维细胞α-SMA mRNA及CTGF mRNA的表达均有抑制作用。结论一定范围内,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达,SB431542可抑制其表达。 展开更多

关键词 甲状腺相关性眼病 转化生长因子-β1 眼眶成纤维细胞转分化 结缔组织生长因子 SB431542

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TGF-β1诱导CD90^+和CD90^-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究 被引量：3

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作者 唐莉 罗清礼 +3 位作者 廖咏川 刘东劲 骆洪梅 唐建 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期564-567,共4页

目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90... 目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90+和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90+细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90+与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90+细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。 展开更多

关键词 甲状腺相关性眼病 眼眶成纤维细胞亚群 肌成纤维细胞 转化生长因子Β1 CD90 α平滑肌动蛋白

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植物凝集素诱导甲状腺相关眼病患者外周单核细胞与眼眶成纤维细胞共培养体系分泌IL-6、IL-17A的研究 被引量：3

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作者 潘媛 许雪亮 +2 位作者 谭佳 许蓓 张灵丽 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期692-698,共7页

背景 甲状腺相关眼病（TAO）的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A（IL-17A）在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单... 背景 甲状腺相关眼病（TAO）的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A（IL-17A）在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单个核细胞（PBMCs）与眼眶成纤维细胞（OFs）共培养体系中分泌的IL-17A是否参与TAO的发病过程及其可能的作用机制. 方法 采集2014年4-12月在中南大学湘雅医院确诊的12例TAO患者的外周血及眼眶结缔组织作为TAO组,并采集同期因先天性眼球萎缩行义眼台植入术的8例患者外周血及眼眶结缔组织作为对照组,采用密度梯度离心法提取所有受试者血中PBMCs,采用组织块培养法培养OFs.采用流式细胞仪检测PBMCs中T淋巴细胞纯度,分别用Giemsa染色法和免疫组织化学法鉴定培养的OFs.以1∶20的比例将OFs与PMBCs在U型96孔板中共培养以建立共培养体系,分别在各组共培养体系中加入0、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/ml植物凝集素（PHA）刺激72 h,用ELISA法检测共培养体系上清液中IL-6、IL-17A质量浓度以及共培养体系细胞膜中总IL-17A受体（IL-17RA）的质量浓度.比较不同质量浓度PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度的差异. 结果 TAO组和对照组PBMCs中T淋巴细胞的纯度分别为（81.10±0.21）％和（80.05 ±0.38）％,组间差异无统计学意义（t=0.923,P＞0.05）.体外培养的OFs对Vimentin呈阳性反应,Giemsa染色阳性,证实为成纤维细胞.1.0 μg/ml PHA作用后共培养体系中PBMCs和OFs增生能力最强,PHA质量浓度＞1.0μg/ml时,PBMCs出现凋亡,OFs增生明显减弱,相同质量浓度PHA作用下,TAO组的PBMCs和OFs增生均较对照组快.不同质量浓度PHA作用下TAO组与对照组共培养体系IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度总体比较,差异均有统计学意义（IL-6：F分组=12.561,P=0.000;F质量浓度=23.356,P=0.001.IL-17A：F分组=12.037,P=0.000;F质量浓度=19.206,P=0.000.IL-17RA：F分组=16.216,P=0.000;F质量浓度=4.627,P=0.018）.1.0μg/ml PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均达峰值,随着PHA质量浓度的增加,IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均逐渐下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;相同质量浓度PHA作用下TAO组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 1.0 μg/ml PHA刺激可增强共培养体系中PBMCs和OFs的增生及免疫炎性因子的分泌,IL-17A能够放大细胞免疫反应和炎症反应,从而参与TAO的发病过程. 展开更多

关键词 细胞培养 甲状腺相关眼病 外周血单个核细胞 眼眶成纤维细胞 T淋巴细胞 白细胞介素-6 白细胞介素-17A 人

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夏枯草、浙贝提取物对体外培养TAO眼眶成纤维细胞的影响 被引量：17

6

作者 李蓓 郑燕林 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期577-581,共5页

目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病(TAO)的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法... 目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病(TAO)的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法、流式细胞仪检测其对细胞的增生、透明质酸(HA)的分泌以及黏附分子(ICAM-1)表达的影响。结果夏枯草、浙贝提取物具有与地塞米松相似的抑制作用,对于TAO患者HA的分泌,133mg/mL的夏枯草质量浓度组与10μg/mL地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05),但浙贝各质量浓度组较夏枯草和地塞米松弱(P<0.01);对于ICAM-1的表达,夏枯草组的抑制作用较地塞米松组弱(P<0.01),但较浙贝组强(P<0.01)。结论夏枯草、浙贝对TAO的治疗作用可能是通过抑制眼眶成纤维细胞的增生、在IFN-γ刺激下HA的分泌和ICAM-1的表达而实现的,且夏枯草作用强于浙贝。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 夏枯草和浙贝提取物 甲状腺相关眼病

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转化生长因子-β_1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响 被引量：2

7

作者 高自清 刘庆淮 +1 位作者 谢平 刘肖艺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期294-296,300,F005,共5页

目的:观察转化生长因子β1(TGF鄄β1)对人眼眶成纤维细胞(orbitalfibroblasts,OFs)增殖的影响,探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy,PVR)的发病机制。方法:OFs体外培养,用不同浓度TGF鄄β1(0.1、1.0、5.0、10.0... 目的:观察转化生长因子β1(TGF鄄β1)对人眼眶成纤维细胞(orbitalfibroblasts,OFs)增殖的影响,探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy,PVR)的发病机制。方法:OFs体外培养,用不同浓度TGF鄄β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,计算细胞的数量,绘制细胞生长曲线;椎虫蓝染色计算活细胞比例、MTT比色法测定吸光度(A)值;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。结果:0.1、1.0、5.0、10.0滋g/L的TGF鄄β1作用后OFs生长曲线上移,活细胞数增加,A值上升,处于增殖期(S+G2)的细胞比例增多。100.0滋g/L的TGF鄄β1对OFs作用相反。结论:TGF鄄β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF鄄β1的浓度,TGF鄄β1的促成纤维细胞的增殖作用可能诱发PVR。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 转化生长因子Β1 细胞增殖 增殖性玻璃体视网膜病变

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IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响 被引量：1

8

作者 何为民 罗清礼 +1 位作者 曾继红 陈清英 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期119-121,共3页

目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞,在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6,用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TA... 目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞,在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6,用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1,患者的表达量高于正常对照者,具有显著统计学差异(P<0.05)。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平,对患者的上调作用更强;IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 干扰素 白介素-6 细胞间黏附分子

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肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响 被引量：5

9

作者 鲁桂兰 吴中耀 +4 位作者 李永平 颜建华 程浩 郑健墚 张文忻 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期294-296,300,共4页

目的:探讨肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。方法:将分离纯化的小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMC)与眼眶成纤维细胞(OFb)共育,共育分为两组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,眼眶成纤维细胞单独培养为对照组;应用光镜、电镜及细胞生长... 目的:探讨肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。方法:将分离纯化的小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMC)与眼眶成纤维细胞(OFb)共育,共育分为两组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,眼眶成纤维细胞单独培养为对照组;应用光镜、电镜及细胞生长计数等方法研究肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。结果:与BMMC接触共育的OFb增殖活跃,呈复层生长,单位面积内细胞计数明显增加;接触共育组中OFb的增殖数分别与非接触共育组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);而非接触共育组的OFb增殖数和对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05);电镜见接触共育组OFb中粗面内质网(RER)增生扩张,BMMC与OFb紧密接触,部分BMMC有脱颗粒现象。结论:肥大细胞对眼眶成纤维细胞的生存和增殖有显著的促进作用,并使其功能活跃,这种作用主要是通过两种细胞间的紧密接触而实现的。 展开更多

关键词 骨髓源性肥大细胞 眼眶成纤维细胞 共育 增殖

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富氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞氧化应激的影响 被引量：3

10

作者 陈欣欣 蔡季平 +4 位作者 程金伟 周晓晴 沈亚 李坚 魏锐利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期547-551,共5页

目的探讨富氢水对甲状腺相关眼病(TAO)的抗氧化应激作用。方法取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H_2O_2浓度。将细胞为4组:... 目的探讨富氢水对甲状腺相关眼病(TAO)的抗氧化应激作用。方法取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H_2O_2浓度。将细胞为4组:空白组(正常培养)、H_2O_2组(H_2O_2处理18 h)、富氢水+H_2O_2组(富氢水处理72 h的同时用H_2O_2处理18 h)、地塞米松+H_2O_2组(1μmol/L地塞米松处理72 h的同时用H_2O_2处理18 h)。用流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)荧光强度,用ELISA检测细胞培养液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果 TAO患者眼眶成纤维细胞体外培养成功。H_2O_2浓度越高对TAO患者眼眶成纤维细胞增殖能力的抑制效果越明显,本实验最终选取的H_2O_2浓度为100μmol/L。培养TAO患者眼眶成纤维细胞72 h后,空白组、H_2O_2组、富氢水+H_2O_2组、地塞米松+H_2O_2组细胞培养液中MDA、SOD、GSH-Px的含量和细胞ROS荧光强度分别为(1.63±0.29)、(5.06±0.24)、(3.94±0.29)、(2.34±0.24)nmol/m L,(10.51±0.32)、(2.41±0.23)、(5.58±0.29)、(7.98±0.15)U/m L,(107.79±1.06)、(21.07±0.92)、(49.19±6.75)、(76.33±4.70)U/m L和18 275.82±521.05、92 524.81±2 097.01、54 460.87±572.64、35 961.37±540.61,统计分析发现富氢水和地塞米松均可抑制H_2O_2处理后眼眶成纤维细胞的氧化应激(P均<0.01),且地塞米松的抑制效果较富氢水更明显(P均<0.01)。结论氢分子可能通过抗氧化应激对TAO发挥治疗作用。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 富氢水 氧化性应激 地塞米松

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可溶性CD40L促进甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞增殖和透明质酸合成酶表达 被引量：3

11

作者 曾程程 魏锐利 +1 位作者 牟旆 王秋红 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1138-1142,共5页

目的 探讨可溶性CD40L（sCD40L）对甲状腺相关性眼病（TAO）患者眼眶成纤维细胞（OFs）增殖和3种透明质酸合成酶（HAS）mRNA表达水平的影响,初步探讨sCD40L在TAO发病中的作用。方法 取5例TAO患者和3例正常对照标本原代培养OFs,采用MTS... 目的 探讨可溶性CD40L（sCD40L）对甲状腺相关性眼病（TAO）患者眼眶成纤维细胞（OFs）增殖和3种透明质酸合成酶（HAS）mRNA表达水平的影响,初步探讨sCD40L在TAO发病中的作用。方法 取5例TAO患者和3例正常对照标本原代培养OFs,采用MTS比色法检测终质量浓度6.25、12.5、25、50、100、200ng/mL的sCD40L作用48h后对不同来源OFs增殖的影响;实时荧光定量PCR技术检测终质量浓度12.5、25、50、100ng/mL及作用3、6、12、24h后的sCD40L对不同来源OFs的3种HAS基因（HAS1~3）表达水平的影响。结果 25ng/mL及以上浓度的sCD40L作用48h后对TAO患者OFs有促增殖作用（P〈0.05）;而50ng/mL及以上浓度的sCD40L作用48h后才能对正常对照OFs有促增殖作用（P〈0.05）,且作用较弱。TAO患者OFs中HAS3mRNA的合成在sCD40L的刺激下增加,并且呈现出浓度和时间依赖的趋势。结论 sCD40L能够促进TAO患者OFs的生长以及HAS3基因的表达,提示sCD40L在TAO的病理过程中起一定作用。 展开更多

关键词 可溶性CD40配体 GRAVES眼病 眼眶成纤维细胞 透明质酸合成酶

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胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用 被引量：9

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作者 代佳灵 何为民 罗梦绮 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期805-810,共6页

背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重... 背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重要作用。目的探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞（OFs）增生及IGF-1R、TSHR表达的影响，探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用。方法收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份，采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM／F12培养液培养OFs。分别于培养液中加入不同质量浓度（O、50、100、125μg／L）的IGF-1，采用MTS比色法绘制OFs生长曲线，评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响；采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响。结果TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好，呈梭形，细胞质丰富，TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致。培养的OFs波形蛋白呈阳性反应，结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应。不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势，总体比较差异有统计学意义（F分组=219．639，P〈0．001；F质量浓度=17．752，P〈0．001），以100μg／LIGF-1的促进作用最强。0、50、100、125μg／LIGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0091±0．0087）％、（0．0953±0．0233）％、（0．0837±0．0227）％和（0．0709±0．0241）％，正常组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0023±0．0006）％、（0．0093±0．0012）％、（0．0073±0．0015）％和（0．0083±0．0012）％，其中50、100和125μg／LIGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者，TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；0、50、100和125μg／LIGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义（F分组=0．133，P〉0．05；F质量浓度=0．004，P〉0．05）。结论IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达，但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞/代谢 胰岛素样生长因子-1/代谢 胰岛素样生长因子-1受体/代谢 促甲状腺激素受体/代谢 细胞增生/药物作用 细胞培养

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穿透素3对转化生长因子β1诱导的眼眶成纤维细胞纤维化的影响 被引量：1

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作者 刁嘉乐 魏锐利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期424-428,共5页

目的探索穿透素3(PTX3)对TGF-β诱导的眼眶成纤维细胞(OF)纤维化的作用。方法以体外培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者来源及健康来源OF为研究对象,在培养液中加入人重组PTX3(rhPTX3)蛋白(1μg/mL)及重组TGF-β1(10 ng/mL)进行刺激,刺激完... 目的探索穿透素3(PTX3)对TGF-β诱导的眼眶成纤维细胞(OF)纤维化的作用。方法以体外培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者来源及健康来源OF为研究对象,在培养液中加入人重组PTX3(rhPTX3)蛋白(1μg/mL)及重组TGF-β1(10 ng/mL)进行刺激,刺激完成后选择特异性抗体标记细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),通过免疫荧光显微镜观察OF的纤维化程度变化。给予细胞相同的刺激,刺激后通过qRT-PCR检测细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白α1(Col Iα1)、IL-6 mRNA表达量的变化。结果TGF-β1可诱导两组OF中α-SMA蛋白表达量增加,细胞呈现纤维化改变,而rhPTX3对该效应未见明显抑制作用。TAO患者来源OF的纤维化效应较健康来源OF无明显差异。TGF-β1可诱导OF纤维化相关蛋白(α-SMA、Col Iα1、IL-6)mRNA表达上调。rhPTX3对OF中α-SMA mRNA的表达无明显诱导作用,但共刺激时可增强TGF-β1对α-SMA mRNA的上调效应。rhPTX3可上调Col Iα1和IL-6 mRNA的表达,共刺激时可增强TGF-β1对IL-6 mRNA的诱导上调,但对Col Iα1 mRNA的上调未见明显影响。结论rhPTX3对TGF-β1诱导的OF纤维化过程具有潜在的促进作用,说明PTX3可能参与了TAO患者后期视物重影的发病过程,并发挥了正向作用。 展开更多

关键词 穿透素3 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 转化生长因子Β 纤维化

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秋水仙碱对甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞增生的影响

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作者 刘燕 许蓓 许雪亮 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期630-635,共6页

背景甲状腺相关眼病（TAO）患者的眼眶成纤维细胞（OFs）在眼部的增生性和炎症性反应中发挥重要作用，寻求抑制OFs增生的药物对TAO的防治具有重要意义。已有研究表明，秋水仙碱具有抗组织纤维化的作用，但其对TAO患者OFs的作用及其机制... 背景甲状腺相关眼病（TAO）患者的眼眶成纤维细胞（OFs）在眼部的增生性和炎症性反应中发挥重要作用，寻求抑制OFs增生的药物对TAO的防治具有重要意义。已有研究表明，秋水仙碱具有抗组织纤维化的作用，但其对TAO患者OFs的作用及其机制研究较少。目的研究秋水仙碱对体外培养的OFs增生的影响。方法将3例TAO患者行开眶减压术中获取的球后结缔组织用组织块培养法进行培养和鉴定，取3-8代的传代细胞进行体外实验。分别将1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol／L秋水仙碱加入含质量分数10％小牛血清的RPMI1640培养基中孵育OFs24、48和72h，用无秋水仙碱的RPMI1640培养基孵育细胞作为对照，采用细胞计数试剂盒．8（CCK-8）检测各组细胞450nm处的吸光度（A450）值，评估OFs的生长情况和各浓度组秋水仙碱对OFs的抑制率。此外，分别在培养基中加入1×10-6、1×10-6、1×10-4mol／L秋水仙碱作用48h，采用流式细胞术及应用MCYCLE软件进行分析，用百分率记录亚二倍体细胞数据及细胞周期各时期数据，检测各浓度药物组及无药物培养基组OFs的凋亡率和细胞周期的分布；采用免疫组织化学染色法测定转化生长因子-β（TGF-β）在OFs中的表达，以评价不同浓度秋水仙碱对OFs分泌TGF-β功能的影响。结果培养和传代的OFs呈梭形，波形蛋白免疫化学染色为阳性反应。1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol／L秋水仙碱作用24、48和72h，随着秋水仙碱浓度的增加，OFs的增生值（A450）逐渐下降，差异有统计学意义（F浓度=62．004，P〈0．05）；此外，随着秋水仙碱作用时间的增加，A450值逐渐下降，差异有统计学意义（F时间=459．582，P〈0．05）；随着秋水仙碱浓度的增加，其对OFs生长的抑制率逐渐升高。对照组、1×10-6、1×10-5、1×10-4mol／L秋水仙碱组OFs凋亡率分别为（1．73±0．15）％、（21．04±4．56）％、（31．84±6．21）％和（35．32±5．56）％，4个组间差异有统计学意义（F=83．905，P〈0．05），各组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；随着秋水仙碱浓度的增加，G2＋M期细胞百分数逐渐下降，差异有统计学意义（F=20．443，P〈O．05）。免疫组织化学法检测发现，在融合状态前的OFs可以分泌TGF-β，阳性率为（97．60±2．09）％，而1×10-4mol／L秋水仙碱作用后OFs密度明显减低，部分OFs阳性率为（44．43±3．96）％，差异有统计学意义（t=65．330，P〈0．05）。结论秋水仙碱可能通过减少OFs分泌TGF-β抑制TAO患者OFs的增生并诱导OFs的凋亡，其作用呈时间和剂量依赖性。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 甲状腺相关眼病 秋水仙碱 增生 凋亡 转化生长因子-Β

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根皮素对白细胞介素-1β诱导Graves眼病眼眶成纤维细胞中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制

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作者 靳玮 张黎 +2 位作者 李谦 倪瑶 柴昌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期233-240,共8页

目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪... 目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪及结缔组织。采用组织块培养法分离原代OFs并传代,细胞免疫荧光法鉴定OFs。将细胞分为对照组、IL-1β诱导组以及不同浓度根皮素处理组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测25、50、75、100和200μmol/L根皮素处理24和48 h后OFs的活性。采用IL-1β诱导OFs模拟GO体外炎症环境。采用荧光探针H2DCF-DA法检测正常对照组、IL-1β诱导组、50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内活性氧簇(ROS)水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、IL-1β诱导组以及25、50、75、100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1质量浓度。采用Western blot法检测正常对照组、IL-1β诱导组及100μmol/L根皮素组细胞内血红素加氧酶1(HO-1)、核因子NF-E2相关因子Nrf2和MAPK信号通路蛋白P38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白表达。结果原代分离培养的OFs表达vimentin,证明为间充质来源,desimin、S-100、cytokeratin-18表达阴性,鉴定为成纤维细胞。CCK-8结果显示,25、50、75和100μmol/L根皮素组细胞处理后24和48 h吸光度(A)值与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内ROS水平分别为21.95±1.71和10.01±1.03,明显低于IL-1β诱导组的39.27±4.01,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA结果显示,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-6质量浓度分别为(4544.25±572.98)、(1000.25±133.96)、(724.25±98.63)和(519.50±118.02)pg/ml,均显著低于IL-1β诱导组的(7581.75±565.93)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-8质量浓度分别为(3679.50±676.76)、(2143.75±616.20)和(1174.75±284.18)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(8411.00±939.67)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中MCP-1质量浓度分别为(3783.25±610.24)、(1565.75±457.89)和(745.75±227.01)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(5533.00±602.87)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01)。100μmol/L根皮素组HO-1、Nrf2蛋白相对表达量明显高于IL-1β诱导组,p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白相对表达量明显低于IL-1β诱导组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论根皮素可降低IL-1β诱导的GO患者OFs细胞内氧化应激水平,抑制促炎细胞因子产生,其作用机制与Nrf2/HO-1的激活及MAPK信号通路的抑制相关。 展开更多

关键词 根皮素 GRAVES眼病 眼眶成纤维细胞 氧化应激 炎症

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肿瘤坏死因子α对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的去分化作用及调控机制

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作者 井雅朋 黄晓明 +5 位作者 吴桐 简天明 史双双 赵亮 孙丰源 唐东润 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1076-1083,共8页

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法... 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法分离培养OF并进行波形蛋白免疫荧光鉴定。诱导OF成脂分化并油红O染色鉴定。分别采用含0、0.1、1.0、10.0μg/L TNF-α的完全培养液诱导眼眶成熟脂肪细胞去分化。分别收集原代、分化14 d和去分化20 d细胞,通过实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2及脂肪包被蛋白1(perilipin1)mRNA相对表达量;采用Western blot法检测PPARγ、P-ERK1/2、perilipin1蛋白相对表达量。结果体外成功培养人TAO来源OF,细胞呈梭形或多角形,呈旋涡状紧密排列,波形蛋白免疫荧光染色呈阳性。OF成脂分化诱导后,部分细胞的细胞质中可出现脂滴样结构,油红O染色可见细胞质内被着染的脂滴结构,证实分化后所得到细胞为脂肪细胞。0.1μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L TNF-α诱导脂肪细胞发生去分化,且随诱导时间的延长,细胞质中的脂滴体积缩小,含脂滴细胞数量也逐渐减少,并在去分化20 d胞质内脂滴基本消失,细胞变为长梭形,紧密排列,去分化为成纤维样细胞。实时荧光定量PCR检测结果显示,分化14 d组细胞PPARγ、ERK1、ERK2、perilipin1 mRNA相对表达量分别为4.26±0.09、2.01±0.09、3.23±0.10和8.69±0.33,明显高于原代组的1.00±0.09、1.05±0.19、1.00±0.10和1.05±0.07以及去分化20 d组的1.06±0.03、1.15±0.11和6.27±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,分化14 d组PPARγ、ERK1/2、perilipin1蛋白表达量分别为1.07±0.03、1.00±0.03和1.13±0.02,明显高于原代组的0.37±0.02、0.29±0.02和0.00±0.00以及去分化20 d组的0.20±0.02、0.38±0.06和0.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论TNF-α对TAO眼眶脂肪细胞有去分化作用,其机制可能与下调ERK1/2-PPARγ-perilipin1信号通路有关。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 肿瘤坏死因子Α 去分化 过氧化物酶体增生物激活受体Γ

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干扰素对眶成纤维细胞GAG生成的刺激作用 被引量：4

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作者 孙丰源 赵红 +3 位作者 宋国祥 潘叶 张淑敏 畅继武 《眼科研究》 CSCD 1998年第1期21-23,共3页

目的观察干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）对眼眶成纤维细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，Ｆｂ）生成糖胺聚糖（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓＧＡＧ）的作用。方法取５例甲状腺相关眼病（ｔｈｙｒｏｉｄａｓｓｏｃｉａｔｅ... 目的观察干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）对眼眶成纤维细胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，Ｆｂ）生成糖胺聚糖（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎｓＧＡＧ）的作用。方法取５例甲状腺相关眼病（ｔｈｙｒｏｉｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄｏｐｈｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ，ＴＡＯ）患者的眶组织标本进行眶成纤维细胞的培养，另取５例非甲状腺相关眼病患者的标本做对照。在培养的成纤维细胞中加入不同浓度的干扰素－α和干扰素－γ。使用３Ｈ标记物和液体闪烁分析器检测干扰素对眶成纤维细胞产生ＧＡＧ的作用。结果干扰素－γ可明显地刺激成纤维细胞生成ＧＡＧ且对甲状腺相关眼病患者的作用强于对正常人的作用，干扰素－α无此作用。结论干扰素－γ是眶成纤维细胞产生ＧＡＧ较强的刺激因子。 展开更多

关键词 干扰素 眼眶成纤维细胞 糖胺聚糖 刺激因子 甲状腺相关眼病 TAO

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甲状腺相关眼病免疫学发病机理的研究进展 被引量：5

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作者 盛海斌 程瑜 蔡昌枰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第10期991-994,共4页

甲状腺相关眼病目前被认为是一种与Graves病关系密切的器官特异性自身免疫性疾病,其具体发病机制至今仍未明确。已有研究发现:自身抗原、眶内成纤维细胞、免疫细胞、细胞因子及免疫介质等都是该病发病过程中的重要因素。

关键词 甲状腺相关眼病 发病机理 自身抗原 免疫细胞 眼眶成纤维细胞

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透明质酸与甲状腺相关眼病研究进展 被引量：3

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作者 陈小玲 何为民 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1047-1050,共4页

甲状腺相关眼病（TAO）是成人常见的眼眶疾病,眶周脂肪结缔组织中糖胺聚糖沉积是其主要的病理特征之一.透明质酸是糖胺聚糖的主要成分,具有高亲水性和黏弹性的特性,可大量吸水膨胀,其在眼眶组织聚集导致眶周结缔组织及眼外肌水肿和纤维... 甲状腺相关眼病（TAO）是成人常见的眼眶疾病,眶周脂肪结缔组织中糖胺聚糖沉积是其主要的病理特征之一.透明质酸是糖胺聚糖的主要成分,具有高亲水性和黏弹性的特性,可大量吸水膨胀,其在眼眶组织聚集导致眶周结缔组织及眼外肌水肿和纤维化,进而出现TAO特征性的临床表现.眼眶成纤维细胞是透明质酸的主要来源,患者体内自身抗体和多种细胞因子可与成纤维细胞上促甲状腺激素受体（TSHR）及胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）等结合,在透明质酸合成酶的作用下促进眼眶成纤维细胞合成透明质酸,导致眶周组织、外周血及体液中透明质酸含量增加,并在一定程度上为疾病诊断、病情判断及疗效和预后评估提供参考. 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 透明质酸 眼眶成纤维细胞 胰岛素样生长因子-1受体 促甲状腺激素受体

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