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真皮多能干细胞移植后向全身照射大鼠骨髓优势分布的机制研究 被引量:3
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作者 宗兆文 程天民 +5 位作者 粟永萍 李楠 董世武 艾国平 冉新泽 徐辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1004-1006,共3页
目的探讨静脉输注的真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)向全身照射(totalbodyirradia tion,TBI)大鼠骨髓优势分布的机制。方法RT PCR和荧光免疫化学检测骨髓中基质细胞源性细胞因子(stromal derived factor1,SDF1)的表... 目的探讨静脉输注的真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)向全身照射(totalbodyirradia tion,TBI)大鼠骨髓优势分布的机制。方法RT PCR和荧光免疫化学检测骨髓中基质细胞源性细胞因子(stromal derived factor1,SDF1)的表达水平,以及dMSCs中SDF1的受体CXCR4的表达水平。Transwell培养体系中,观察SDF1对dM SCs的趋化作用。结果TBI大鼠骨髓SDF1的表达水平明显高于正常大鼠,同时dMSCs表达CXCR4。体外趋化实验发现,SDF1对dMSCs有很强的趋化作用,而使用SDF1的中和性抗体后,TBI大鼠骨髓提取液对dMSCs的趋化作用明显下降(P<0.05)。结论TBI大鼠骨髓局部上调表达的SDF1在移植dMSCs向骨髓的优势分布中有重要作用。 展开更多
关键词 真皮多能干细胞 全身照射 分布 基质细胞源性因子-1 真皮多能干细胞移植 骨髓
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全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究 被引量:7
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作者 宗兆文 程天民 +2 位作者 冉新泽 粟永萍 史春梦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期279-281,共3页
目的 观察 5Gyγ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞 (dermalmultipotentstemcells ,dMSCs)的趋化作用 ,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布。方法 在Transwell培养体系中 ,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用。3H... 目的 观察 5Gyγ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞 (dermalmultipotentstemcells ,dMSCs)的趋化作用 ,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布。方法 在Transwell培养体系中 ,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用。3H TdR标记dMSCs ,经尾静脉输注到大鼠体内后 ,液闪法测量各组织内dMSCs的含量。结果 Transwell培养体系中 ,照射组骨髓提取液组从上层迁移到下层的细胞明显多于不照射的正常对照组和生理盐水组 (P <0 0 1)。照射后 1周始 ,照射组骨髓dMSCs含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;伤后 3周和 4周 ,照射组单位重量骨髓dMSCs含量也明显高于同组的肺脏、肝脏等组织。结论 全身照射大鼠骨髓提取液对dMSCs有很强的趋化作用 ,从而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于损伤的骨髓。 展开更多
关键词 全身照射 真皮多能干细胞 骨髓提取液 趋化
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创伤早期伤口液对体外培养真皮多能干细胞增殖迁移特性的影响 被引量:6
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作者 屈纪富 江德鹏 +3 位作者 郑怀恩 郝利 文亮 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期2393-2395,共3页
目的探讨真皮多能干细胞在创伤修复启动中的作用。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞、真皮成纤维细胞和血管内皮细胞;利用四唑盐比色试验(MTT法)检测不同时间、不同浓度伤口液对上述细胞的影响。在此基础上,观察伤... 目的探讨真皮多能干细胞在创伤修复启动中的作用。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞、真皮成纤维细胞和血管内皮细胞;利用四唑盐比色试验(MTT法)检测不同时间、不同浓度伤口液对上述细胞的影响。在此基础上,观察伤后1d伤口液对真皮多能干细胞贴壁力和迁移力等与创伤修复密切相关的指标变化。结果伤后不同时相不同浓度伤口液对真皮多能干细胞增殖均具有显著刺激作用,但以伤后早期的伤口液作用最为明显。成纤维细胞和血管内皮细胞对伤口液反应均显著弱于真皮多能干细胞。伤口液作用后真皮多能干细胞贴壁力和迁移能力较对照组细胞显著增加。结论真皮多能干细胞是创伤愈合,特别是创伤修复启动过程中的一种重要的间充质干细胞,对其深入研究有望为阐明创伤修复启动分子机制提供依据。 展开更多
关键词 真皮多能干细胞 创伤修复启动 伤口液
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CXCR4腺病毒表达载体的构建及其在真皮多能干细胞中的表达 被引量:4
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作者 宗兆文 程天民 +6 位作者 粟永萍 李楠 董世武 艾国平 冉新泽 王军平 徐辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期481-484,共4页
目的构建大鼠CXCR4的腺病毒表达载体,并观察其转染真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)后的表达情况。方法扩增含有CXCR4的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,再与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组... 目的构建大鼠CXCR4的腺病毒表达载体,并观察其转染真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)后的表达情况。方法扩增含有CXCR4的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,再与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生含有CXCR4的骨架质粒(pAdEasy/CXCR4)。将验证正确的pAdEasy/CXCR4用PacⅠ酶切后转染293细胞,从而包装出CXCR4的腺病毒表达载体(AdvCXCR4)。用AdvCXCR4转染dMSCs,并采用RTPCR、免疫荧光细胞化学和荧光激活细胞分类计数的方法检测其表达情况。结果PCR、酶切和测序结果证明,成功地将CXCR4全长cDNA克隆到骨架质粒中,并包装出腺病毒表达载体。同时,AdvCXCR4转染dMSCs后可有效地增加dMSCs中CXCR4的表达。结论CXCR4的腺病毒表达载体的成功构建和其在dMSCs中的表达,为研究CXCR4在干细胞移植中的应用奠定基础。 展开更多
关键词 CXCR4 腺病毒表达载体 真皮多能干细胞 转染
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hBD_2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究 被引量:4
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作者 李楠 肖桃元 +6 位作者 粟永萍 徐辉 王军平 宗兆文 董世武 冉新泽 刘志君 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期425-427,共3页
目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移... 目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果。结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P<0.05),且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复。 展开更多
关键词 人Β防御素2 真皮多能干细胞 创面修复 感染
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重组人Β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定 被引量:2
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作者 李楠 肖桃元 +6 位作者 粟永萍 徐辉 王军平 宗兆文 冉新泽 董世武 刘志君 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期284-286,共3页
目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTE... 目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTERN BLOTTING检测HBD2的表达情况,ELISA测定培养上清中HBD2的浓度,K-B纸片扩散法检测上清对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等标准菌株的杀灭效果。结果RT-PCR、荧光免疫化学和WESTERNBLOTTING的结果显示转染后HBD2可在DMSCS中有效地表达,上清中HBD2的浓度为743.6NG/ML,K-B纸片法显示HBD2对上述标准菌株有明显的杀灭效应。结论HBD2重组腺病毒表达载体在DMSCS可高效表达,并对大肠埃希菌等标准菌株有杀灭效应。 展开更多
关键词 人Β防御素2 重组 真皮多能干细胞
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CXCR4基因转染促进移植真皮多能干细胞向全身照射大鼠骨髓分布的研究 被引量:1
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作者 宗兆文 程天民 +6 位作者 冉新泽 粟永萍 史春梦 董世武 李楠 艾国平 王军平 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第2期193-195,共3页
目的:观察CXCR4腺病毒表达载体(adenovirus vector of CXCR4,Adv-CXCR4)转染的真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)移植后可否更多地向全身照射大鼠骨髓分布,并加速骨髓造血功能恢复。方法:3H-TdR标记Adv-CXCR4转染的d... 目的:观察CXCR4腺病毒表达载体(adenovirus vector of CXCR4,Adv-CXCR4)转染的真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)移植后可否更多地向全身照射大鼠骨髓分布,并加速骨髓造血功能恢复。方法:3H-TdR标记Adv-CXCR4转染的dMSCs(A组)、绿色荧光蛋白腺病毒表达载体转染的dMSCs(B组)、未转染病毒载体的dMSCs(C组)后移植到全身照射大鼠体内,液闪法测量骨髓中dMSCs的含量,监测血中红细胞等的恢复情况。结果:伤后5d起,A组骨髓中dMSCs的含量明显高于B组和C组(P<0.05)。伤后14d和21d,A组红细胞、白细胞和血小板的数量明显高于B组和C组(P<0.05)。结论:Adv-CXCR4转染的dMSCs在移植后可更多地分布到全身照射大鼠的骨髓,且能更快地促进骨髓造血功能的恢复。 展开更多
关键词 基因 转染 CXCR4 真皮多能干细胞 全身照射
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大鼠SLPI基因siRNA重组表达载体构建及其在调控真皮多能干细胞增殖中的作用 被引量:1
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作者 蔡俊 屈纪富 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期356-360,共5页
目的观察分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)对真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,DMSCs)的促增殖作用。方法酶消化法分离、纯化、扩增新生大鼠DMSCs。在前期成功构建SLPI基因过表... 目的观察分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)对真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,DMSCs)的促增殖作用。方法酶消化法分离、纯化、扩增新生大鼠DMSCs。在前期成功构建SLPI基因过表达载体基础上,根据SLPI基因si RNA的设计挑选出最佳抑制SLPI基因表达的干扰载体,RT-PCR、Western blot鉴定。重组表达载体转染DMSCs,观察其表达,运用CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期,观察SPLI基因促进DMSCs的增殖作用。结果成功分离获得真皮来源、具有细胞干性的DMSCs;并成功构建SLPI基因过表达真核载体及SLPI基因si RNA表达载体,转染DMSCs(分为过表达组和干扰组,并以转染空载体者为对照组)。CCK-8检测显示,48、72、96 h,过表达组增殖较快,干扰组增殖较慢,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);72、96 h,过表达组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),说明过表达组增殖较快,即SLPI基因有促进增殖作用。流式细胞检测表明,过表达组G1期与干扰组比较差异有统计学意义(P<0.05),S期、G2期与对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SLPI基因具有明确的促DMSCs增殖作用,促进细胞从G1向S和G2期转变,即通过调控细胞周期发挥促增殖作用。 展开更多
关键词 分泌型白细胞蛋白酶抑制因子 重组表达载体 真皮多能干细胞 增殖
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RNA解旋酶p68在真皮多能干细胞增殖调控中的作用
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作者 王少军 粟永萍 +1 位作者 刘知人 史春梦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期735-738,共4页
目的研究RNA解旋酶p68在真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,DMSCs)增殖过程中的表达特点,并探讨其在创伤愈合中的意义。方法通过免疫细胞化学和Western blot方法检测p68在DMSCs不同生长状态的表达特点,早期伤口液刺激对DMSC... 目的研究RNA解旋酶p68在真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,DMSCs)增殖过程中的表达特点,并探讨其在创伤愈合中的意义。方法通过免疫细胞化学和Western blot方法检测p68在DMSCs不同生长状态的表达特点,早期伤口液刺激对DMSCs中p68表达的影响并通过MTT法检测DMSCs增殖的变化,进一步通过RNAi抑制p68表达之后检测细胞增殖的变化特点。结果增殖活跃的DMSCs中p68表达较强,饥饿以后,p68表达降低;伤后1 d伤口液可明显促进DMSCs中p68的表达及细胞增殖(P<0.01);RNAi抑制p68表达之后DMSCs增殖明显受抑(P<0.01)。结论RNA解旋酶p68参与DMSCs的增殖调控,创伤微环境在修复细胞的启动中可能发挥作用。 展开更多
关键词 RNA解旋酶p68 真皮多能干细胞 创伤愈合 伤口液
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