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禽流感病毒(H9亚型)重组CHO细胞258株的构建及鉴定
1
作者
宋扬
于镭
+1 位作者
梁宛楠
李倩
《饲料博览》
CAS
2021年第10期20-24,共5页
为构建禽流感病毒(AIV)重组CHO细胞株,本研究以AIV(H9亚型)258株为模板,以AIV的HA基因胞外域及3个重复串联的M2蛋白胞外域为靶基因,根据CHO细胞密码子偏爱性对其密码子进行优化,将HAM2e基因插入真核表达载体pCI-GS中,构建了含有HA-M2e...
为构建禽流感病毒(AIV)重组CHO细胞株,本研究以AIV(H9亚型)258株为模板,以AIV的HA基因胞外域及3个重复串联的M2蛋白胞外域为靶基因,根据CHO细胞密码子偏爱性对其密码子进行优化,将HAM2e基因插入真核表达载体pCI-GS中,构建了含有HA-M2e基因的重组质粒,并将该重组质粒转染CHO细胞,经加压筛选获得了高效表达HA-M2e蛋白的重组CHO细胞株。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)法对重组CHO细胞株进行鉴定,并用琼扩试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)对表达蛋白进行效价及蛋白含量测定。结果显示,经SDS-PAGE、Western Blot检测,表达蛋白大小约66 ku,与预期大小相符;琼扩效价为1512,蛋白质含量为1.13 mg·mL^(-1)。表明通过基因工程技术构建的含AIV HA-Mze基因的重组CHO细胞258株可作为疫苗研制用毒株。
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关键词
禽流感病毒(H9亚型)258株
HA-M2e基因
真核表
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题名
禽流感病毒(H9亚型)重组CHO细胞258株的构建及鉴定
1
作者
宋扬
于镭
梁宛楠
李倩
机构
哈药集团生物疫苗有限公司
出处
《饲料博览》
CAS
2021年第10期20-24,共5页
文摘
为构建禽流感病毒(AIV)重组CHO细胞株,本研究以AIV(H9亚型)258株为模板,以AIV的HA基因胞外域及3个重复串联的M2蛋白胞外域为靶基因,根据CHO细胞密码子偏爱性对其密码子进行优化,将HAM2e基因插入真核表达载体pCI-GS中,构建了含有HA-M2e基因的重组质粒,并将该重组质粒转染CHO细胞,经加压筛选获得了高效表达HA-M2e蛋白的重组CHO细胞株。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)法对重组CHO细胞株进行鉴定,并用琼扩试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)对表达蛋白进行效价及蛋白含量测定。结果显示,经SDS-PAGE、Western Blot检测,表达蛋白大小约66 ku,与预期大小相符;琼扩效价为1512,蛋白质含量为1.13 mg·mL^(-1)。表明通过基因工程技术构建的含AIV HA-Mze基因的重组CHO细胞258株可作为疫苗研制用毒株。
关键词
禽流感病毒(H9亚型)258株
HA-M2e基因
真核表
Keywords
avian influenza virus(H9 subtype)258 strains
HA-M2e gene
eukaryotic expression
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
禽流感病毒(H9亚型)重组CHO细胞258株的构建及鉴定
宋扬
于镭
梁宛楠
李倩
《饲料博览》
CAS
2021
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