新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究 被引量：2

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作者 詹媛 仇旭升 +4 位作者 曲昱蓉 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-5,共5页

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情... 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。 展开更多

关键词 新城疫病毒 eif4E 4E-BP1 Mnk1 真核翻译起始因子

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真核翻译起始因子eIF3A导致的翻译起始异常和相关疾病(英文) 被引量：5

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作者 朱涛 高元峰 +5 位作者 李玲 王蕾云 尹继业 周宏灏 张伟 刘昭前 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1204-1211,共8页

真核生物翻译控制在细胞进程中对基因表达调控具有重要作用,能确保蛋白的迅速调节以维持细胞内稳态。真核翻译是一个多步骤的过程,包括起始、延伸、终止和核糖体循环,其中起始是限速步骤,受真核翻译起始因子(eukaryotic translation ini... 真核生物翻译控制在细胞进程中对基因表达调控具有重要作用,能确保蛋白的迅速调节以维持细胞内稳态。真核翻译是一个多步骤的过程,包括起始、延伸、终止和核糖体循环,其中起始是限速步骤,受真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factors,eIFs)调控。翻译起始缺陷将导致一系列疾病。在所有eIFs中,eIF3是最大的同时知之较少的因子。eIF3A是eIF3因子的最大亚基,其异常一方面会导致肿瘤发生,另一方面将阻止肿瘤向更高级别恶性肿瘤进展。eIF3A表达变化和突变影响肿瘤患者对铂类化疗药物的反应。此外,eIF3A与纤维化病变相关,抑制eIF3A的试剂能延缓病变进展。eIF3A在肿瘤中的双重作用可能是其在肿瘤进展的不同阶段调节不同mRNAs翻译的结果,特定阶段不同mRNAs的编码产物发挥促癌或抑癌作用。 展开更多

关键词 翻译起始 真核翻译起始因子3a 癌症 纤维化 铂类药物化疗

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家蚕真核翻译起始因子3f基因结构与表达研究

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作者 董久鸣 徐和平 徐豫松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期33-40,共8页

在对家蚕5龄丝腺cDNA文库测序的过程中,发现一个编码家蚕翻译起始因子基因(eIF3f)的EST序列。利用电子克隆、3′RACE(3′rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了家蚕eIF3f基因cDNA序列全长,命名为eIF3f(GenBank登录号为DQ868530)... 在对家蚕5龄丝腺cDNA文库测序的过程中,发现一个编码家蚕翻译起始因子基因(eIF3f)的EST序列。利用电子克隆、3′RACE(3′rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了家蚕eIF3f基因cDNA序列全长,命名为eIF3f(GenBank登录号为DQ868530)。家蚕eIF3f基因cDNA全长为1 009 bp,由870 bp的开放阅读框序列(openreading frame,ORF)、55 bp的5′端非翻译区序列(5′-UTR)和65 bp的3′端非编码区序列(3′-UTR)组成,编码289个氨基酸。氨基酸序列比较分析显示,家蚕eIF3f与其他物种的eIF3f都具有翻译起始功能所必需的JAB_MPN结构域。家蚕eIF3f基因组结构分析:该基因由5个外显子和4个内含子组成;5′调控序列存在E74A、DFD、DRI等多个潜在的转录因子结合位点,但没有TATA盒启动子序列。家蚕eIF3f基因的表达在不同组织和不同发育时期存在差异,eIF3f是一种负调控翻译起始因子。研究结果有助于进一步研究真核翻译起始因子的相关基因调控规律。 展开更多

关键词 家蚕 真核翻译起始因子3f 基因结构 基因表达 转录因子

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柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析 被引量：2

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作者 孔春林 韩红玉 +8 位作者 姜连连 王晔 董辉 赵其平 朱顺海 李婷 薛璞 舒凡帆 黄兵 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期47-52,共6页

在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通... 在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 球虫 柔嫩艾美耳球虫 真核起始因子3d 毕赤酵母 真核表达

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人eIF4A3真核表达载体构建及稳定表达细胞株筛选 被引量：2

5

作者 李向云 徐祥 +2 位作者 李秉煦 黄宏 徐云升 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期1897-1899,共3页

目的构建人eIF4A3重组质粒载体,筛选高表达人eIF4A3的稳定细胞株。方法 RT-PCR克隆eIF4A3基因,将获得的基因片段分别连接到含有HA和c-myc标签的质粒载体上,转染HeLa细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,在体外翻译体系中进行体外翻译,通过... 目的构建人eIF4A3重组质粒载体,筛选高表达人eIF4A3的稳定细胞株。方法 RT-PCR克隆eIF4A3基因,将获得的基因片段分别连接到含有HA和c-myc标签的质粒载体上,转染HeLa细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,在体外翻译体系中进行体外翻译,通过免疫印迹鉴定eIF4A3的表达。结果成功构建人eIF4A3的真核表达载体,可在HeLa细胞中稳定表达,且能在体外翻译体系中翻译eIF4A3蛋白质。功能研究初步证明eIF4A3可以抑制荧光素酶报告基因的表达。结论获得了可稳定高表达人eIF4A3的HeLa细胞株及可用于体外翻译的真核表达载体。 展开更多

关键词 真核起始因子4A3 稳定细胞株 体外翻译

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核桃翻译起始因子JreIF1A的克隆及抗旱功能分析 被引量：1

6

作者 任得元 赵焕元 +3 位作者 刘玉梅 高向倩 孙宇栋 杨桂燕 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期103-108,共6页

真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,Jre... 真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,JreIF1A的开放阅读框为438 bp,编码的多肽含145个氨基酸,分子量为16344.48 u,理论等电点为5.08。JreIF1A与土瓶草(Cephalotus follicularis)、毛果杨(Populus trichocarpa)等的亲缘关系较近。JreIF1A能被干旱胁迫显著诱导,且在根和叶中具有表达特异性。将JreIF1A转入酵母,对转基因酵母INVSC1(pYES2-JreIF1A)及对照酵母INVSC1(pYES2)分别进行干旱(山梨醇,0.2 mol/L)处理,发现INVSC1(pYES2-JreIF1A)在干旱胁迫下的生长活性显著优于INVSC1(pYES2)。表明JreIF1A基因能不同程度地响应干旱胁迫,其表达可有效改善转基因酵母的抗旱响应能力;JreIF1A基因可作为核桃逆境适应机制研究的候选基因。 展开更多

关键词 核桃 真核翻译起始因子 eif1A基因 逆境响应 酵母转化

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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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作者 何嘉文 李友 +1 位作者 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒 稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达的调控作用 被引量：10

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作者 陈淳媛 孙跃女 +2 位作者 杨作成 蔡姿丽 杨敏 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期612-617,共6页

目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的心肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)表达的调控,探讨mTOR/eIF-4E信号传导... 目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的心肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)表达的调控,探讨mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)的作用。方法:CVB3感染原代培养的SD大鼠心肌细胞建立病毒性心肌炎的细胞模型。根据细胞毒力实验筛选10 nmol/L的雷帕霉素干预CVB3感染的心肌细胞,采用RT-PCR和Western免疫印迹方法检测mTOR和eIF-4E mRNA表达及蛋白质水平。结果:CVB3诱导心肌细胞变性,雷帕霉素可减轻其变性;CVB3使大鼠心肌细胞的mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达上调,与对照组比较,有统计学差异(P<0.05),雷帕霉素可使CVB3感染的心肌细胞mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达明显下调,与CVB3组比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能明显抑制CVB3感染的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达,提示mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎中可能起重要作用。 展开更多

关键词 哺乳类雷帕霉素靶蛋白 真核起始因子4E 柯萨奇病毒B3 心肌细胞

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猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析 被引量：1

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作者 龙熙 张廷焕 +5 位作者 赵久刚 蓝静 柴捷 郭宗义 王金勇 张亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2062-2069,共8页

【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列... 【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能。 展开更多

关键词 猪 真核翻译起始因子2(eif2) eif2S3基因 克隆 序列分析 组织表达谱

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eIF3a基因多态性与卵巢癌铂类药物治疗敏感性的关系 被引量：3

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作者 章采奕 张淑芬 +3 位作者 刘英姿 田焱 李新国 张瑜 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期617-622,共6页

目的:研究真核起始因子3a(eukaryotic initiation factor 3a,e IF3a)基因rs3824830,rs77382849,rs10787899,rs3740556位点多态性与卵巢癌铂类药物治疗敏感性的关系。方法:选取57例初次术后完成以铂类为基础的联合化疗6周期的卵巢癌患者... 目的:研究真核起始因子3a(eukaryotic initiation factor 3a,e IF3a)基因rs3824830,rs77382849,rs10787899,rs3740556位点多态性与卵巢癌铂类药物治疗敏感性的关系。方法:选取57例初次术后完成以铂类为基础的联合化疗6周期的卵巢癌患者,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-fl ight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术检测其外周血中e IF3a多态性位点基因型,分析每个位点不同基因型与卵巢癌铂类药物治疗敏感性的关系。结果:e IF3a rs3824830检测出3个基因型,即AA,GA,GG,基因型分布频率分别为43.86%,36.84%和15.79%(2例未测出,3.51%);e IF3a rs77382849检测出2个基因型,即CC和TC,基因型分布频率分别为85.96%和12.28%(1例未测出,1.76%);e IF3a rs10787899检测出3个基因型,即GG,GA,AA,基因型分布频率分别为26.32%,47.36%和26.32%。卵巢癌铂类耐药组和敏感组的平均年龄和FIGO分期间差异有统计学意义(P<0.05)。e IF3a rs10787899GA基因型比GG基因型携带者更容易对铂类化疗药物产生耐药性,比值比上升2.676倍(95%CI:0.544~13.159),e IF3a rs10787899 AA基因型携带者比GG基因型携带者更容易对铂类化疗药物产生耐药性,比值比上升5.419倍(95%CI:0.964~30.471),但平衡年龄和分期后,差异均没有统计学意义(P>0.05)。所有血液样本中,e IF3a rs3740556位点的基因型均为GG。结论:e IF3a rs3740556位点未检测出突变基因型,e IF3a rs3824830,rs77382849,rs10787899位点的基因多态性与卵巢癌铂类药物治疗的敏感性无相关性。 展开更多

关键词 卵巢癌 真核细胞翻译起始因子3a 单核苷酸多态性 铂类药物 化疗敏感性

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eIF3亚家族与恶性肿瘤发生的关系 被引量：4

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作者 韩丽芳 刘昭前 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第10期1195-1200,共6页

eIF3是相对分子质量最大和最复杂的一个真核细胞翻译起始因子,它在真核细胞翻译调控中发挥非常重要的作用。最近研究发现,eIF3的许多亚基在人类肿瘤中表达量发生改变,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。本文主要对eIF3亚家族与肿瘤发生... eIF3是相对分子质量最大和最复杂的一个真核细胞翻译起始因子,它在真核细胞翻译调控中发挥非常重要的作用。最近研究发现,eIF3的许多亚基在人类肿瘤中表达量发生改变,从而影响肿瘤的发生、发展和预后。本文主要对eIF3亚家族与肿瘤发生的关系进行综述。 展开更多

关键词 eif3 翻译起始因子 肿瘤

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RIP3/MLKL通过激活4EBP1-eIF4E通路诱导程序性坏死 被引量：1

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作者 王树超 徐玫丽 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期979-985,共7页

目的:程序性坏死是一种由受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导的细胞死亡形式,有研究指出哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路可能参与程序性... 目的:程序性坏死是一种由受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导的细胞死亡形式,有研究指出哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路可能参与程序性坏死的调控,真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4Ebinding protein 1,4EBP1)-真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)通路是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白最重要的下游分子通路之一,然而此通路是否参与程序性坏死的发生,目前尚无相关研究。本研究旨在探索4EBP1-eIF4E通路在程序性坏死中是否发生改变。方法:首先向小鼠上皮样成纤维细胞系L929细胞中加入程序性坏死诱导剂TSZ(TNF-α/SM-164/Z-VAD-FMK),在光学显微镜下观察细胞坏死情况;进一步向敲除RIP3和MLKL基因的L929细胞中加入TSZ,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色观察细胞坏死情况,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测4EBP1和eIF4E的mRNA和蛋白质表达水平。结果:野生型L929细胞用TSZ处理后,坏死细胞增加,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显下调且磷酸化的4EBP1(phosphorylated 4EBP1,p-4EBP1)/4EBP1值增加(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显上调且磷酸化的eIF4E(phosphorylated eIF4E,p-eIF4E)/eIF4E值增加(均P<0.01);在敲除L929细胞中的RIP3和MLKL基因后,PI阳性坏死细胞明显减少,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显上调且p-4EBP1/4EBP1值下降(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显下调且p-eIF4E/eIF4E值下降(均P<0.01)。结论:4EBP1-eIF4E通路在RIP3/MLKL介导的程序性坏死中发生活化。 展开更多

关键词 程序性坏死 受体相互作用蛋白3 混合谱系激酶域样蛋白 真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1 真核起始因子4E

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eIF3a在低氧诱导的右心重构中的作用及机制

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作者 李文群 李晓晖 李元建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期159-159,共1页

目的探讨翻译起始因子3a（eIF3a）在低氧诱导的右心重构中的作用及机制.方法低氧（10%O2）21天诱导右心重构模型,HE、Masson和TUNEL染色观察右心室组织病理变化.TGF-β1（5μg·L^-1）诱导原代心肌成纤维细胞增殖和分化,MTS和EdU检... 目的探讨翻译起始因子3a（eIF3a）在低氧诱导的右心重构中的作用及机制.方法低氧（10%O2）21天诱导右心重构模型,HE、Masson和TUNEL染色观察右心室组织病理变化.TGF-β1（5μg·L^-1）诱导原代心肌成纤维细胞增殖和分化,MTS和EdU检测细胞增殖.ELISA、Real-timePCR和Westernblot检测TGF-β1、eIF3a、p27、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ、ANP和BNP的表达.结果低氧诱导心脏右心室组织中心肌细胞肥大和凋亡增多、肌纤维排列紊乱、胞外胶原沉积增多,并伴有TGF-β1、eIF3a、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ、ANP、BNP表达的上调和p27表达的下调.TGF-β1促进心肌成纤维细胞增殖,明显上调eIF3a、α-SMA、collagen-Ⅰ、collagen-Ⅲ的表达和下调p27的表达,TGF-β1的作用又被siRNA下调eIF3a表达所逆转.结论eIF3a在低氧诱导的右心重构中起重要作用,机制涉及eIF3a/p27. 展开更多

关键词 翻译起始因子3a(eif3a) 右心室重构 心肌成纤维细胞

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IL-33通过激活NF-κB信号通路上调eIF3a的表达介导小鼠肺肌纤维母细胞增殖分化促进肺纤维化 被引量：1

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作者 高云星 付裕 +3 位作者 陈晓 李泽朋 何晓伟 李先伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期693-700,共8页

目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立... 目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立肺纤维化小鼠模型。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原纤维沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。分离培养小鼠原代成纤维细胞,分为对照组、 IL-33组、 IL-33联合二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Transwell^(TM)实验观察细胞迁移能力。实时定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、 Col3和α-SMA mRNA的表达。Western blot法检测IL-33、 Col1、 Col3、 α-SMA、磷酸化核因子κB抑制物α(p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、真核翻译起始因子3a(eIF3a)及核内NF-κB p65的蛋白水平。结果 与对照组相比,BLM组IL-33、 p-IκBα、 p-NF-κB p65、 eIF3a的表达及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高,同时α-SMA、 Col1和Col3的表达明显上调。与BLM组相比,IL-33组p-IκBα、 p-NF-κB p65和eIF3a的表达及NF-κB p65核转移水平进一步增加,肺组织α-SMA、 Col1和Col3的表达进一步上调;而抗IL-33抗体的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验表明IL-33能够明显提高成纤维细胞增殖和迁移的能力、显著上调IκBα、 NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB p65核转移水平及eIF3a的表达,明显促进α-SMA、 Col1和Col3的表达。而IL-33的这些作用能够被PDTC所逆转。结论 IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而上调eIF3a的表达,进而诱导肺MFb增殖分化而促进PF的发生发展。 展开更多

关键词 白细胞介素33(IL-33) 核因子κB(NF-κB) 真核翻译起始因子3a(eif3a) 肌纤维母细胞 肺纤维化

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eIF3b和METTL3通过m 6A介导促进宫颈癌进展的作用机制及研究进展

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作者 范香 王逸斐 +1 位作者 杨霓(综述) 朱鹏峰(审校) 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2023年第9期1000-1004,共5页

真核翻译起始因子3(eIF3)是由13个亚基组成的复合物,是目前已发现的eIFs中最大的真核翻译起始因子。eIF3b作为其关键亚基,在翻译起始的调控中具有举足轻重的作用。甲基转移酶样3(METTL3)是一种已知的具有催化活性的甲基转移酶,是甲基转... 真核翻译起始因子3(eIF3)是由13个亚基组成的复合物,是目前已发现的eIFs中最大的真核翻译起始因子。eIF3b作为其关键亚基,在翻译起始的调控中具有举足轻重的作用。甲基转移酶样3(METTL3)是一种已知的具有催化活性的甲基转移酶,是甲基转移酶复合体的关键成分,其负责对N6-甲基腺苷(m^(6)A)进行甲基化修饰。近年来越来越多的研究表明,eIF3b、METTL3在多种人类恶性肿瘤中高表达,可通过m^(6)A介导产生联系。且研究发现eIF3b、METTL3均在宫颈癌中高表达,可促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移,抑制细胞凋亡。文章主要就eIF3b、METTL3通过m^(6)A介导在宫颈癌发展中的具体作用机制以及研究进展进行综述。 展开更多

关键词 真核翻译起始因子3b 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷 宫颈癌

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真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

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作者 武乐 柳江枫 +3 位作者 梁万丰 杨晔宏 胡刚 杨俊涛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期867-885,共19页

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann... 目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。 展开更多

关键词 肺腺癌 真核翻译延伸因子1 免疫 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

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病毒“劫持”真核细胞翻译系统的研究进展 被引量：2

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作者 詹媛 仇旭升 +3 位作者 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国家禽》 北大核心 2014年第23期49-54,共6页

病毒依赖于宿主细胞进行复制的同时又受到宿主体内各种条件的制约,为了在宿主细胞内生存并实现快速复制和增殖,病毒通过激活宿主体内各种信号通路来抢夺宿主翻译系统以及逃避先天性免疫。如果病毒无法进行自身m RNA的翻译将对病毒的增... 病毒依赖于宿主细胞进行复制的同时又受到宿主体内各种条件的制约,为了在宿主细胞内生存并实现快速复制和增殖,病毒通过激活宿主体内各种信号通路来抢夺宿主翻译系统以及逃避先天性免疫。如果病毒无法进行自身m RNA的翻译将对病毒的增殖、扩增和进化产生致命性的打击。因此,许多病毒在感染后能够征用或者控制宿主的翻译系统来进行病毒m RNA的翻译。病毒对宿主翻译系统的控制可以发生在翻译起始、延伸和终止3个阶段中的任何一个步骤,可能是对真核翻译因子以及相关信号通路的调控,也可能是通过自身编码的具有类似真核翻译因子活性的病毒蛋白来实现对核糖体的募集,文章就一些特定病毒对宿主翻译系统的抢夺机制进行综述,为病毒特异性治疗的研究提供重要的理论基础。 展开更多

关键词 病毒蛋白合成 真核翻译起始因子 eif4F IRES eif20α

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鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定 被引量：3

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作者 李梦茹 张文 +6 位作者 段辰星 马良 栗朵朵 彭璟 梁晶晶 罗廷荣 李晓宁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3073-3082,共10页

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1... 【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1基因编码区(CDS)序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋白eIF4A1-Flag,且主要以包涵体形式存在。将鼠源eIF4A1基因克隆至pcDNA3.0载体成功构建获得真核表达载体pcDNA3.0-eIF4A1-Flag,以其转染HEK-293T细胞后,eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,且主要分布在细胞质中。生物信息学分析结果表明,eIF4A1蛋白相对分子量为46.15408 kD,理论等电点(pI)为5.267,含有407个氨基酸残基;属于不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构,也没有信号肽,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。鼠源eIF4A1蛋白的主要互作蛋白有10个,除eIFs家族蛋白外,还包括Paip1和Pdcd4互作蛋白。【结论】eIF4A1主要是分布在细胞质,为不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构和信号肽,通过构建原核/真核表达载体表达获得的融合蛋白eIF4A1-Flag可用于筛选和鉴定eIF4A1互作蛋白,为深入探究eIFs的结构及生物学功能提供技术支持。 展开更多

关键词 鼠源 真核生物翻译起始因子(eifs) eif4A1基因 原核表达 真核表达 生物信息学分析

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核桃JreIF1A基因启动子的鉴定及表达活性分析

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作者 张英杰 闫鹏宇 +3 位作者 李文凯 崔茂凯 张彤 杨桂燕 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2019年第5期15-21,共7页

真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结... 真核生物翻译起始因子(eIF1)对逆境响应具有一定正响应;启动子能有效预测基因功能。以本研究鉴定获得核桃eIF1A基因(即JreIF1A)为其上游启动子,通过生物信息学、瞬时转化及GUS活性测定等不同技术,分析JreIF1A启动子的基本生物功能。结果显示,JreIF1A上游1200bp启动子序列中包含众多与逆境响应相关的元件,病害响应相关的BIHD1OS、热胁迫响应相关的CCAATBOX1、Dof转录因子识别的DOFCOREZM、WRKY识别的WRKY71OS等。将JreIF1A启动子瞬时转入烟草测定GUS酶活性,发现JreIF1A启动子具有表达活性,且受干旱、盐、寒、热等胁迫诱导。表明JreIF1A启动子具有逆境响应表达活性,可能调控JreIF1A基因参与多重逆境响应。 展开更多

关键词 核桃 真核翻译起始因子 eif1A基因 启动子 表达活性

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eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究 被引量：8

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作者 黄毅 胡建达 +4 位作者 伍严安 郑静 齐元麟 陈英玉 黄肖利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期279-284,共6页

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细... 本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1A1 JURKAT细胞 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K AKT信号通路

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