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真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析 被引量：5
1
作者 周峰 刘燕 +1 位作者 马永贵 黄原 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期773-782,共10页
真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的... 真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息. 展开更多
关键词 真核翻译延伸因子1a(eEF1a) 地中海涡虫 进化踪迹分析 功能位点
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真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展 被引量：3
2
作者 何天琦 卢松岩 +3 位作者 朱东韦 裴翊峰 鄢雨晴 董浩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期315-319,共5页
延伸因子(Elongation factors,EF)是在m RNA翻译时促进多肽链延伸的蛋白质因子,在原核生物和真核生物中并不相同。原核延伸因子分为EF-Tu、EF-Ts及EF-G3种,主要在原核细胞翻译时发挥作用。
关键词 翻译延伸因子 研究发现 RNA 细胞骨架 肌动蛋白 细胞凋亡过程 eEF1a 功能研究
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新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究 被引量：2
3
作者 詹媛 仇旭升 +4 位作者 曲昱蓉 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-5,共5页
为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情... 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。 展开更多
关键词 新城疫病毒 EIF4E 4E-BP1 Mnk1 真核翻译起始因子
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新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响 被引量：1
4
作者 王宏宇 田志飘 +8 位作者 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期84-90,共7页
非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成... 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 Nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译
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真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用
5
作者 武乐 柳江枫 +3 位作者 梁万丰 杨晔宏 胡刚 杨俊涛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期867-885,共19页
目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann... 目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。 展开更多
关键词 肺腺癌 真核翻译延伸因子1 免疫 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路
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肝细胞癌中真核延伸因子1A2的表达及意义
6
作者 黄燕 易纯 +5 位作者 李琳子 刘莉莉 陆世旬 周璇 谢国斌 云径平 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期293-298,共6页
【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者... 【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者临床病理特征的关系。【结果】免疫组化结果显示:56.7%肝癌组织中eEF1A2高表达(eEF1A2++,eEF1A2+++),而仅13.5%的癌旁肝组织呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.014)。eEF1A2的表达与乙肝病毒感染(P=0.030)和复发(P=0.012)相关。Kaplan-Meier分析表明:eEF1A2高表达患者的总体生存时间(P=0.024)和无复发生存时间(P=0.023)较eEF1A2低表达患者更长。多因素Cox回归分析提示:eEF1A2表达为影响HCC患者总体生存的独立危险因素(P=0.038)。【结论】HCC中eEF1A2蛋白表达增高,与肝癌患者术后复发和预后相关,eEF1A2可以作为判断肝癌患者预后的潜在分子标志物。 展开更多
关键词 肝细胞癌 真核延伸因子1a2 预后 复发
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拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究 被引量：3
7
作者 陈燕 王伟倩 +6 位作者 张红莉 夏群芳 孙恒吉 李瑞沙 郑帮 周树敏 张卫 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第1期106-109,115,共5页
探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶... 探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据. 展开更多
关键词 拟南芥 翻译延伸因子 EF1a GFP
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植物翻译延伸因子eEF1A的研究进展 被引量：2
8
作者 陈晓荣 陈昶旭 +2 位作者 施力铭 周旭人 查笑君 《农技服务》 2019年第2期64-67,共4页
真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达... 真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达较广泛且稳定,因此在某些条件下可做内参基因用于基因功能分析。简要阐述植物中eEF1A的保守型、与植物抗逆性的关系、与其他蛋白互作的关系,并进行了展望。 展开更多
关键词 翻译延伸因子 eEF1a 保守性 植物抗逆性
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植物延伸因子eEF1A研究进展 被引量：16
9
作者 覃迎姿 黄先益 +2 位作者 叶兴枝 王爱勤 李杨瑞 《广西农业科学》 CAS CSCD 2009年第5期472-477,共6页
60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子... 60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子;在快速增殖的细胞中,eEF1A基因的表达调控十分保守,其表达水平同细胞生长及增殖速度有关。eEF1A除了参与同翻译控制有关的信号传导外,还参与细胞生长、应激反应及与运动性有关的信号传导,并且与细胞凋亡等有关。eEF1A在体内和体外均能同肌动蛋白纤维及微管蛋白结合,是细胞骨架运动性的调节蛋白。目前许多植物的eEF1A基因已被分离,植物种间的eEF1A氨基酸序列高度保守;植物eEF1A由多基因编码,它的表达受激素、环境胁迫和生长发育过程等因素诱导。文章通过总结植物延伸因子eEF1A的生理作用以及eEF1A基因的克隆、鉴定、诱导表达等分子生物学研究,以期为今后进一步深入研究eEF1A奠定基础。 展开更多
关键词 延伸因子 eEF1a 生理作用 克隆表达 展望
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香樟延伸因子EF1a基因片段的克隆及表达分析 被引量：15
10
作者 张力维 李勇鹏 +2 位作者 姚瑶 梁优 杜丽 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期122-128,共7页
通过同源克隆的方法从香樟Cinnamomum camphora中分离到一个编码延伸因子EF1a的c DNA序列片段。根据已经在Gen Bank中登录的其它物种的EF1a基因的保守序列设计一对兼并引物,通过反转录PCR技术获得一个1 297 bp的基因片段。同源比对表明:... 通过同源克隆的方法从香樟Cinnamomum camphora中分离到一个编码延伸因子EF1a的c DNA序列片段。根据已经在Gen Bank中登录的其它物种的EF1a基因的保守序列设计一对兼并引物,通过反转录PCR技术获得一个1 297 bp的基因片段。同源比对表明:Cc EF1a与Gen Bank中注册的其它植物EF1a基因核苷酸序列的相似性均在80%以上,氨基酸序列的相似性高达96%以上。将所获得基因片段命名为Cc EF1a并提交Gen Bank,登录号为KM086740。实时定量PCR结果显示,Cc EF1a在低温胁迫下的叶片中表达量稳定,可以在实时定量PCR分析中作为内参基因。 展开更多
关键词 香樟 延伸因子 EF1a基因片段 克隆 表达分析
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苹果ACO1转录因子MdHB-1基因的克隆及其真核表达载体的构建 被引量：5
11
作者 于巧平 尹明安 +1 位作者 任小林 姜永华 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2012年第10期154-160,共7页
【目的】通过生物信息学分析,将苹果的一段EST序列初步定性为转录因子MdHB-1基因,对该基因进行克隆和真核表达载体构建,为进一步研究其分子生物学功能奠定基础。【方法】根据番茄LeACO1转录因子LeHB-1的基因序列,对苹果EST库进行Blast,... 【目的】通过生物信息学分析,将苹果的一段EST序列初步定性为转录因子MdHB-1基因,对该基因进行克隆和真核表达载体构建,为进一步研究其分子生物学功能奠定基础。【方法】根据番茄LeACO1转录因子LeHB-1的基因序列,对苹果EST库进行Blast,获得一段EST序列,根据该EST序列设计1对特异性引物,以"皇家嘎啦"苹果花器总RNA为材料,经RT-PCR得到1条长约1 000bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定及分析。将基因MdHB-1与真核表达载体pPICZA连接,构建真核表达载体pPICZA-MdHB-1,并导入毕赤酵母菌种GS115,通过PCR鉴定该载体的导入情况。【结果】克隆到苹果MdHB-1基因(GenBank登录号为JQ678788),其开放阅读框为1 011bp,编码336个氨基酸。Blastn和Blastp序列比对分析发现,MdHB-1与已登录的其他物种的HB-1基因相似性达50%～60%。该基因编码的氨基酸中存在保守序列HD-Zip结构域,该保守序列与已经报道的番茄LeHB-1、拟南芥AtHB-1的保守序列的同源性均大于85%。重组表达载体PICZA-MdHB-1构建正确并已成功导入酵母基因组中。【结论】成功克隆了苹果转录因子MdHB-1基因全长,并正确构建了其真核表达载体。 展开更多
关键词 苹果 花器 转录因子MdHB-1 克隆 真核表达载体
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应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达 被引量：4
12
作者 来大志 翁少洁 +4 位作者 于长明 齐连权 付玲 于婷 陈薇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期118-126,共9页
表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增... 表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖 ,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实 .而人延伸因子 1α亚基启动子 (PEF 1α)不受细胞周期限制 ,且启动子强度高于PCMV IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想 .首先构建了基于PEF 1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5 ,在增殖缓慢的CHO细胞中 ,此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV IE启动子表达载体的 4 1倍 .由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平 ,而转录激活因子 (transcriptionactivators)对基因转录的影响更大 ,所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端 ,它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF 1α启动子的TATA框上游约 2 0 0bp的λ噬菌体OR2 OR1序列上 ,而被“征募”到PEF 1α启动子TATA框附近 ,从而促进基因的转录 .把上述元件均整合进一个表达载体中 ,构建了两个新型表达载体pER AH和pER VP2 .pER AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高 ,而pER VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高 展开更多
关键词 人工转录激活因子 人延伸因子1α亚基启动子 基因表达 cI蛋白 CHO细胞
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转化生长因子-β1 shRNA真核表达载体的构建 被引量：4
13
作者 王静 吴军正 +2 位作者 郭富平 朱秀丽 温德升 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期113-116,共4页
目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)的短发夹状RNA(shRNA)表达系统,为人涎腺粘液表皮样癌的治疗提供新的方法。方法根据Genebank提供的TGF-β1 mRNA序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链 DNA片段,克隆到pWH1载体中,用酶切方... 目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)的短发夹状RNA(shRNA)表达系统,为人涎腺粘液表皮样癌的治疗提供新的方法。方法根据Genebank提供的TGF-β1 mRNA序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链 DNA片段,克隆到pWH1载体中,用酶切方法对重组体进行鉴定:最后将构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体转染涎腺粘液表皮样癌细胞,通过RT-PCR、免疫组化观察其对细胞TGF-β1 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果经酶切、连接后构建的质粒称之为pWH1-TGF-β1。酶切证实成功构建了TGF-β1 shRNA表达载体,RT-PCR和免疫组化结果显示其能够在mRNA和蛋白水平抑制细胞内TGF-β1的表达。结论成功构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体具有阻断TGF-β1表达的功能,可能为涎腺粘液表皮样癌治疗提供有效的方法和手段。 展开更多
关键词 短发夹状RNA 真核表达载体 转化生长因子Β1
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突变低氧诱导因子1_α基因真核表达载体的构建和表达 被引量：6
14
作者 傅锐斌 吴平生 +4 位作者 宋云峰 邱建 戴铁英 李建华 修建成 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第11期1348-1351,共4页
目的构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达。方法用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HI... 目的构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达。方法用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala。在第一次突变的基础上,仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺(Asn)密码子ATT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCT,构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala。将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs,以RT-PCR、免疫荧光法和Westernblotting法分别对转染细胞进行表达分析。结果测序证实,定点突变成功,构建成重组真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala;3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA,但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加。结论成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 定点突变 真核表达载体 血管新生
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亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学分析 被引量：3
15
作者 申萍香 吴璇 +4 位作者 黄江 胡旭初 余新炳 包怀恩 廖兴江 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期379-382,共4页
目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过... 目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用蛋白印迹法(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-EF-1构建成功。重组蛋白可被感染了亚洲牛带绦虫患者血清和猪血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫EF-1基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲牛带绦虫 延伸因子-1 基因克隆 原核表达
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核桃翻译起始因子JreIF1A的克隆及抗旱功能分析 被引量：1
16
作者 任得元 赵焕元 +3 位作者 刘玉梅 高向倩 孙宇栋 杨桂燕 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期103-108,共6页
真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,Jre... 真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,JreIF1A的开放阅读框为438 bp,编码的多肽含145个氨基酸,分子量为16344.48 u,理论等电点为5.08。JreIF1A与土瓶草(Cephalotus follicularis)、毛果杨(Populus trichocarpa)等的亲缘关系较近。JreIF1A能被干旱胁迫显著诱导,且在根和叶中具有表达特异性。将JreIF1A转入酵母,对转基因酵母INVSC1(pYES2-JreIF1A)及对照酵母INVSC1(pYES2)分别进行干旱(山梨醇,0.2 mol/L)处理,发现INVSC1(pYES2-JreIF1A)在干旱胁迫下的生长活性显著优于INVSC1(pYES2)。表明JreIF1A基因能不同程度地响应干旱胁迫,其表达可有效改善转基因酵母的抗旱响应能力;JreIF1A基因可作为核桃逆境适应机制研究的候选基因。 展开更多
关键词 核桃 真核翻译起始因子 eIF1a基因 逆境响应 酵母转化
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真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响
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作者 陈奎生 王志永 +3 位作者 周强 柴雅玫 高冬玲 张红 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第5期935-937,959,共4页
目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养2... 目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。 展开更多
关键词 真核起始因子4E 反义寡核苷酸 人食管癌EC-1细胞 转染
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当归延伸因子AsEF-1β基因的克隆及胁迫应答分析 被引量：4
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作者 杨彩霞 雒军 +4 位作者 王引权 杨雪 夏琦 王振恒 张亚丽 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1371-1378,共8页
延伸因子1β(EF-1β)是蛋白质生物合成过程中肽链延长必需的调节因子之一。该研究采用同源克隆和RACE扩增技术克隆当归EF-1β基因序列,分析该基因序列特征、蛋白结构特点及UV-B辐射胁迫下的组织响应表达,以揭示当归栽培生境变迁过程中对... 延伸因子1β(EF-1β)是蛋白质生物合成过程中肽链延长必需的调节因子之一。该研究采用同源克隆和RACE扩增技术克隆当归EF-1β基因序列,分析该基因序列特征、蛋白结构特点及UV-B辐射胁迫下的组织响应表达,以揭示当归栽培生境变迁过程中对UV-B胁迫适应的分子机制。结果显示:(1)成功克隆获得当归EF-1β基因全长序列(950 bp),编码225个氨基酸,命名为AsEF-1β(GenBank登录号:MG736314);AsEF-1β蛋白的分子量为24.5 kD,理论等电点为4.48,属亲水性氨基酸,在其C末端具有一个EF-1B超蛋白家族的典型结构域和保守区,鸟嘌呤核苷酸交换结构域;其氨基酸序列与同为伞形科的胡萝卜氨基酸序列相似性最高,达93%。(2)qRT-PCR分析结果显示,AsEF-1β基因在当归根部的表达量显著高于茎和叶(P<0.05);UV-B辐射胁迫下,茎及叶中的表达量均上调,分别是自然光照处理的2.43和3.76倍。研究表明,AsEF-1β基因可能参与当归对UV-B辐射胁迫的适应过程,为深入研究其在药用植物生长发育、逆境抗性形成及药效物质的生物合成代谢过程的生态调控奠定了基础。 展开更多
关键词 当归 延伸因子EF-1β 基因克隆 UV-B辐射胁迫 表达分析
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柔嫩艾美耳球虫延伸因子1α特性与功能初步分析 被引量：2
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作者 梁珊珊 朱顺海 +7 位作者 赵其平 黄兵 董辉 于钰 王青杰 余水兰 王海霞 韩红玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3111-3121,共11页
鸡球虫病在世界范围内对家禽业具有重大的经济影响,导致高死亡率、低增长、低生产力和高防治成本。由于球虫耐药性问题严峻,球虫病的防治重点倾向于研究方便安全,并且与活疫苗相比更容易生产的亚单位疫苗。因此,迫切需要新的方法来有效... 鸡球虫病在世界范围内对家禽业具有重大的经济影响,导致高死亡率、低增长、低生产力和高防治成本。由于球虫耐药性问题严峻,球虫病的防治重点倾向于研究方便安全,并且与活疫苗相比更容易生产的亚单位疫苗。因此,迫切需要新的方法来有效地控制球虫病,包括寻找特定的分子靶标。本文以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA第一链为模板,扩增了延伸因子1α(Et EF1α)的ORF序列,生物信息学分析显示,该基因编码450个氨基酸,预测相对分子质量为49.1 ku,等电点为4.7;编码的蛋白无信号肽和跨膜结构域,但都含有N-肉豆蔻酰化位点。qRT-PCR和Western blot分析Et EF1α在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平和蛋白翻译水平,结果显示,Et EF1α在子孢子(Spz)和裂殖子(Mrz)的mRNA转录水平高于未孢子化卵囊(UO)和孢子化卵囊(SO),翻译水平在UO和Mrz高表达;间接免疫定位发现,Et EF1α主要定位于Spz一端和整个Mrz,随着虫体在细胞内发育,荧光强度逐渐增强。分泌试验显示该蛋白为分泌蛋白,但不是由微线体分泌的。入侵抑制试验结果表明,兔抗r Et EF1α多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞,抑制率约为22%。综上表明,该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育和子孢子入侵宿主细胞的过程。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 延伸因子1α 特性分析 入侵
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人von Willebrand因子A1A2A3三联体结构域的真核表达及功能鉴定研究
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作者 张婷婷 赵益明 +1 位作者 江淼 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期1224-1228,共5页
本研究构建人血管性血友病因子A1A2A3区(vWF-A1A2A3)编码序列基因真核表达载体并在CHO细胞表达,为探讨vWF-A1A2A3的生物学功能奠定基础。根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从vWF cDNA中扩增出人vWF-A1A2A3编码序列基因片段(vWF-A1A2A... 本研究构建人血管性血友病因子A1A2A3区(vWF-A1A2A3)编码序列基因真核表达载体并在CHO细胞表达,为探讨vWF-A1A2A3的生物学功能奠定基础。根据已公布的序列设计引物,用PCR方法从vWF cDNA中扩增出人vWF-A1A2A3编码序列基因片段(vWF-A1A2A3),测序正确后用限制性内切酶将目的片段插入pSectag2b载体中。酶切后通过脂质体介导转染至CHO细胞中进行表达。结果表明:重组质粒pSectag2b-vWF-A1A2A3能在CHO细胞中表达,表达产物(rvWF-A1A2A3)能够与人Ⅲ型胶原结合和在瑞斯托霉素诱导下与血小板结合。结论:成功构建了rvWF-A1A2A3并表达于CHO细胞。本研究为vWF相关的生物学结构、功能研究和临床应用提供了基础。 展开更多
关键词 von WILLEBRAND因子 vWF-A1a2A3区 CHO 真核表达
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