真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展 被引量：3

1

作者 何天琦 卢松岩 +3 位作者 朱东韦 裴翊峰 鄢雨晴 董浩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期315-319,共5页

延伸因子(Elongation factors,EF)是在m RNA翻译时促进多肽链延伸的蛋白质因子,在原核生物和真核生物中并不相同。原核延伸因子分为EF-Tu、EF-Ts及EF-G3种,主要在原核细胞翻译时发挥作用。

关键词 翻译延伸因子 研究发现 RNA 细胞骨架 肌动蛋白 细胞凋亡过程 eef1a 功能研究

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真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析 被引量：5

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作者 周峰 刘燕 +1 位作者 马永贵 黄原 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期773-782,共10页

真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的... 真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息. 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a(eef1a) 地中海涡虫 进化踪迹分析 功能位点

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植物翻译延伸因子eEF1A的研究进展 被引量：2

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作者 陈晓荣 陈昶旭 +2 位作者 施力铭 周旭人 查笑君 《农技服务》 2019年第2期64-67,共4页

真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达... 真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达较广泛且稳定,因此在某些条件下可做内参基因用于基因功能分析。简要阐述植物中eEF1A的保守型、与植物抗逆性的关系、与其他蛋白互作的关系,并进行了展望。 展开更多

关键词 翻译延伸因子 eef1a 保守性 植物抗逆性

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植物延伸因子eEF1A研究进展 被引量：16

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作者 覃迎姿 黄先益 +2 位作者 叶兴枝 王爱勤 李杨瑞 《广西农业科学》 CAS CSCD 2009年第5期472-477,共6页

60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子... 60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子;在快速增殖的细胞中,eEF1A基因的表达调控十分保守,其表达水平同细胞生长及增殖速度有关。eEF1A除了参与同翻译控制有关的信号传导外,还参与细胞生长、应激反应及与运动性有关的信号传导,并且与细胞凋亡等有关。eEF1A在体内和体外均能同肌动蛋白纤维及微管蛋白结合,是细胞骨架运动性的调节蛋白。目前许多植物的eEF1A基因已被分离,植物种间的eEF1A氨基酸序列高度保守;植物eEF1A由多基因编码,它的表达受激素、环境胁迫和生长发育过程等因素诱导。文章通过总结植物延伸因子eEF1A的生理作用以及eEF1A基因的克隆、鉴定、诱导表达等分子生物学研究,以期为今后进一步深入研究eEF1A奠定基础。 展开更多

关键词 延伸因子 eef1a 生理作用 克隆表达 展望

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新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究 被引量：2

5

作者 詹媛 仇旭升 +4 位作者 曲昱蓉 孙英杰 谭磊 宋翠萍 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-5,共5页

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情... 为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。 展开更多

关键词 新城疫病毒 EIF4E 4E-BP1 Mnk1 真核翻译起始因子

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真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

6

作者 武乐 柳江枫 +3 位作者 梁万丰 杨晔宏 胡刚 杨俊涛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期867-885,共19页

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann... 目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。 展开更多

关键词 肺腺癌 真核翻译延伸因子1 免疫 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

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肝细胞癌中真核延伸因子1A2的表达及意义

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作者 黄燕 易纯 +5 位作者 李琳子 刘莉莉 陆世旬 周璇 谢国斌 云径平 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期293-298,共6页

【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者... 【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者临床病理特征的关系。【结果】免疫组化结果显示:56.7%肝癌组织中eEF1A2高表达(eEF1A2++,eEF1A2+++),而仅13.5%的癌旁肝组织呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.014)。eEF1A2的表达与乙肝病毒感染(P=0.030)和复发(P=0.012)相关。Kaplan-Meier分析表明:eEF1A2高表达患者的总体生存时间(P=0.024)和无复发生存时间(P=0.023)较eEF1A2低表达患者更长。多因素Cox回归分析提示:eEF1A2表达为影响HCC患者总体生存的独立危险因素(P=0.038)。【结论】HCC中eEF1A2蛋白表达增高,与肝癌患者术后复发和预后相关,eEF1A2可以作为判断肝癌患者预后的潜在分子标志物。 展开更多

关键词 肝细胞癌 真核延伸因子1a2 预后 复发

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拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究 被引量：3

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作者 陈燕 王伟倩 +6 位作者 张红莉 夏群芳 孙恒吉 李瑞沙 郑帮 周树敏 张卫 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第1期106-109,115,共5页

探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶... 探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据. 展开更多

关键词 拟南芥 翻译延伸因子 EF1a GFP

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核桃翻译起始因子JreIF1A的克隆及抗旱功能分析 被引量：1

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作者 任得元 赵焕元 +3 位作者 刘玉梅 高向倩 孙宇栋 杨桂燕 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期103-108,共6页

真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,Jre... 真核生物翻译起始因子(eIF1)在逆境响应中具有一定的调节功能。本研究克隆获得核桃(Juglans regia)的1条eIF1A基因(命名为JreIF1A),通过生物信息学、基因表达及酵母转化等不同技术,分析JreIF1A在干旱胁迫下的基本生物功能。结果表明,JreIF1A的开放阅读框为438 bp,编码的多肽含145个氨基酸,分子量为16344.48 u,理论等电点为5.08。JreIF1A与土瓶草(Cephalotus follicularis)、毛果杨(Populus trichocarpa)等的亲缘关系较近。JreIF1A能被干旱胁迫显著诱导,且在根和叶中具有表达特异性。将JreIF1A转入酵母,对转基因酵母INVSC1(pYES2-JreIF1A)及对照酵母INVSC1(pYES2)分别进行干旱(山梨醇,0.2 mol/L)处理,发现INVSC1(pYES2-JreIF1A)在干旱胁迫下的生长活性显著优于INVSC1(pYES2)。表明JreIF1A基因能不同程度地响应干旱胁迫,其表达可有效改善转基因酵母的抗旱响应能力;JreIF1A基因可作为核桃逆境适应机制研究的候选基因。 展开更多

关键词 核桃 真核翻译起始因子 eIF1a基因 逆境响应 酵母转化

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eEF1A1调控水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒复制的初步研究

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作者 陈美桦 徐含翠 +4 位作者 王林旭 罗洪 齐琦 王勃 段小涛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期170-176,共7页

目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧... 目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a1 水疱性口炎病毒 单纯疱疹病毒 病毒复制

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eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究 被引量：8

11

作者 黄毅 胡建达 +4 位作者 伍严安 郑静 齐元麟 陈英玉 黄肖利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期279-284,共6页

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细... 本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a1 JURKAT细胞 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K AKT信号通路

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eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨 被引量：7

12

作者 黄毅 胡建达 +4 位作者 齐元麟 伍严安 郑静 陈英玉 黄肖利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期835-841,共7页

本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRN... 本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用实时PCR法和Western blot法分别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达。构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、AnnexinⅤ-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P<0.01,P<0.05);构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达。与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多

关键词 真核翻译延长因子1a1 JURKAT细胞 基因沉默 细胞增殖 细胞凋亡 P13K/AKT信号通路

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酵母双杂交技术鉴定FAT10新的结合蛋白:eEF1A1 被引量：2

13

作者 余新 刘天德 +3 位作者 袁荣发 王庆诺 李国惠 邵江华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期870-877,共8页

目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文... 目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文库,以获得与FAT10相互作用的蛋白分子;通过回交实验、免疫共沉淀和激光共聚焦细胞内共定位实验验证两者之间的相互作用;通过RNA干扰降低FAT10表达观察真核翻译延伸因子1α1(eEF1A1)的表达情况。结果:酵母双杂交筛选得到相互作用蛋白eEF1A1,激光共聚焦细胞内共定位确定FAT10和eEF1A1均位于细胞质内,存在共定位;回交实验和免疫共沉淀实验再次确认eEF1A1能够与FAT10相互作用;FAT10表达降低伴随着eEF1A1的表达下调。结论:FAT10能够与eEF1A1相互作用;FAT10可能通过eEF1A1来实现其部分功能。 展开更多

关键词 FAT10蛋白质 真核翻译延伸因子1α1 RNA干扰

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EEF1A2基因慢病毒表达载体的构建及慢病毒表达系统的建立 被引量：2

14

作者 许朝 胡端敏 诸琦 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期18-22,共5页

利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包... 利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pVSV-G,pGag/Pol,pRev)4质粒共转染293T细胞,收集培养上清并感染人胰腺癌SW1990细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株EEF1A2/SW1990。Real-time PCR和West-ern blot检测结果显示EEF1A2在EEF1A2/SW1990细胞中表达较原代细胞明显增高(P<0.05),MTT结果显示EEF1A2/SW1990细胞的增殖能力亦较原代细胞显著增强(P<0.05)。成功构建了EEF1A2基因的慢病毒载体质粒pGLV5-EEF1A2及其慢病毒表达系统,并筛选出稳定过表达EEF1A2的人胰腺癌细胞株EEF1A2/SW1990。 展开更多

关键词 真核延伸因子1a2 慢病毒载体 真核表达

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eEF1A2在原发性肝细胞癌的表达 被引量：1

15

作者 黄毅 邱福南 +4 位作者 陈敦雁 伍严安 李峰 黄肖利 吴文冰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2144-2150,共7页

目的:研究真核翻译延长因子1A2(e EF1A2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1A2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1A2的mRNA... 目的:研究真核翻译延长因子1A2(e EF1A2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1A2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1A2的mRNA和蛋白表达,应用real-time PCR法与Western blot法分别检测几种HCC细胞株e EF1A2的mRNA与蛋白表达。构建GV287-e EF1A2表达慢病毒感染低表达e EF1A2的HCC细胞,应用real-time PCR法和Western blot法分别检测细胞e EF1A2的mRNA和蛋白表达;应用MTT法、DNA倍体法和real-time PCR法分别检测细胞活力、细胞周期和白蛋白mRNA的表达。结果:HCC癌组织e EF1A2的mRNA表达水平和蛋白表达阳性率明显高于配对癌旁组织与正常肝脏组织(P<0.01);e EF1A2的mRNA和蛋白在HCC细胞株SMMC-7721和BEL-7402高表达,在SK-HEP-1低表达。构建的GV287-e EF1A2表达慢病毒可感染SK-HEP-1细胞使e EF1A2过表达;与阴性对照组相比,GV287-e EF1A2组SK-HEP-1细胞的活力升高,白蛋白的mRNA表达水平降低,G0/G1期的细胞比例显著减少,而S期和G2/M期的细胞比例显著升高。结论:e EF1A2在HCC癌组织存在异位高表达;e EF1A2可能是HCC的一种潜在癌蛋白,其过表达可增强HCC细胞的增殖能力,降低HCC细胞的分化程度,并促使细胞周期通过G0/G1期,进入S期和G2/M期。 展开更多

关键词 真核翻译延长因子1a2 肝细胞癌 细胞增殖 细胞周期

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eEF1A1在T_1N_0M_0期肾癌中的表达及与预后的关系

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作者 鲍一 王志向 +6 位作者 李鹏 陈俊明 刘冰 杨庆 高莉 吴震杰 王林辉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期734-740,共7页

目的探讨真核延伸因子1A1（eEF1A1）在T1N0M0期肾癌组织中的表达及其与预后的关系。方法收集第二军医大学长海医院泌尿外科在2007年行手术治疗的患者标本共70例。入选标准：术前未进行其他治疗,TNM分期为T1N0M0,行肾癌根治术,病理为透... 目的探讨真核延伸因子1A1（eEF1A1）在T1N0M0期肾癌组织中的表达及其与预后的关系。方法收集第二军医大学长海医院泌尿外科在2007年行手术治疗的患者标本共70例。入选标准：术前未进行其他治疗,TNM分期为T1N0M0,行肾癌根治术,病理为透明细胞癌,患者及随访资料完整。通过免疫组化技术检测手术标本中癌组织eEF1A1的表达量,建立eEF1A1表达量与Fuhrman病理分级和预后之间的对应关系,绘制交叉表,通过χ2检验、Fisher精确概率法研究eEF1A1和肾癌Fuhrman病理分级的关系。通过绘制Kaplan-Meier生存曲线并进行log-rank检验研究eEF1A1和T1N0M0期肾癌预后的关系。结果随访时间为4~95个月,平均（77.9±18.3）个月,随访期内总生存率为88.6%,无进展生存率为80.0%。免疫组化显示eEF1A1在61.4%的肾癌组织中高表达,并且在高Fuhrman分级的肾癌组织中高表达（P=0.004）。生存分析提示肾癌组织低表达eEF1A1的患者生存期较长（P=0.019）,并且癌组织中低表达eEF1A1的患者均存活。结论 T1N0M0期肾癌组织中eEF1A1表达与肿瘤Fuhrman病理分级及患者预后有关,表达量低的患者预后较好。 展开更多

关键词 肾肿瘤 肿瘤分期 真核延伸因子1a1 预后

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鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定 被引量：3

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作者 李梦茹 张文 +6 位作者 段辰星 马良 栗朵朵 彭璟 梁晶晶 罗廷荣 李晓宁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3073-3082,共10页

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1... 【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1基因编码区(CDS)序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋白eIF4A1-Flag,且主要以包涵体形式存在。将鼠源eIF4A1基因克隆至pcDNA3.0载体成功构建获得真核表达载体pcDNA3.0-eIF4A1-Flag,以其转染HEK-293T细胞后,eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,且主要分布在细胞质中。生物信息学分析结果表明,eIF4A1蛋白相对分子量为46.15408 kD,理论等电点(pI)为5.267,含有407个氨基酸残基;属于不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构,也没有信号肽,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。鼠源eIF4A1蛋白的主要互作蛋白有10个,除eIFs家族蛋白外,还包括Paip1和Pdcd4互作蛋白。【结论】eIF4A1主要是分布在细胞质,为不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构和信号肽,通过构建原核/真核表达载体表达获得的融合蛋白eIF4A1-Flag可用于筛选和鉴定eIF4A1互作蛋白,为深入探究eIFs的结构及生物学功能提供技术支持。 展开更多

关键词 鼠源 真核生物翻译起始因子(eIFs) eIF4A1基因 原核表达 真核表达 生物信息学分析

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YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭 被引量：2

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作者 田祯 庄皓冉 +6 位作者 江楚雯 尹靖 韦晓莹 张枝林 史琳 张育 沈维干 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期8-16,共9页

目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的S... 目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的SMMC-7721和SK-HEP1肝癌细胞模型,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;应用反转录和实时定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平;利用染色质靶向酶切检测(cleavage under targets and release using nuclease,CUT&RUN)-qPCR实验检测YAP能否与EEF1A2基因的启动子序列结合。结果:EEF1A2在肝癌组织中高表达,并与肝癌细胞的迁移能力呈正相关;EEF1A2可以促进低迁移能力的SMMC-7721细胞和高迁移能力的SK-HEP1细胞迁移和侵袭,调控细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Snail和E-cadherin的表达;YAP可以上调EEF1A2的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭;CUT&RUN-qPCR实验结果显示YAP可以与EEF1A2基因的启动子序列结合。结论:YAP可以通过与EEF1A2基因的启动子序列结合,促进EEF1A2的表达,进一步促进肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 真核细胞翻译延伸因子1a2 Yes相关蛋白 细胞迁移 细胞侵袭 肝癌细胞

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42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异

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作者 武小雯 张新亭 +3 位作者 常宇阳 汪丝雨 陈良标 关桂君 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期49-53,81,共6页

青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(e... 青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。 展开更多

关键词 性腺体细胞衍生因子 真核翻译延伸因子1 42Sp50基因 卵巢发育 青鳉

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敲低EEF1A2增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞的药效

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作者 梁馨予 刘佳君 刘建文 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期59-69,共11页

探究乳腺癌中翻译延伸因子1α2(EEF1A2)与HER2之间的潜在关系。通过TCGA(TheCancerGenomeAtlas)分析EEF1A2mRNA在乳腺癌中的表达情况;利用MTT(噻唑蓝)、克隆形成和Transwell实验方法检测了HER2+乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-453在EEF1A2蛋... 探究乳腺癌中翻译延伸因子1α2(EEF1A2)与HER2之间的潜在关系。通过TCGA(TheCancerGenomeAtlas)分析EEF1A2mRNA在乳腺癌中的表达情况;利用MTT(噻唑蓝)、克隆形成和Transwell实验方法检测了HER2+乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-453在EEF1A2蛋白表达敲低及拉帕替尼处理后的增殖、迁移和凋亡情况。结果表明EEF1A2 mRNA在HER2+乳腺癌组织中高表达,并降低了HER2+乳腺癌患者的总生存率;同时,SKBR3和MDA-MB-453细胞中EEF1A2敲低会增强拉帕替尼对细胞体外增殖、迁移和侵袭的抑制,以及对凋亡的促进。Western blot实验结果表明,下调EEF1A2会增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞中HER2/AKT通路的抑制。EEF1A2蛋白可成为改善拉帕替尼治疗HER2+乳腺癌效果的潜在靶标。 展开更多

关键词 乳腺癌 翻译延伸因子1α2 HER2 AKT 拉帕替尼

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