雷公藤红素诱导未折叠蛋白反应信号通路中真核细胞翻译起始因子2α活化抑制多发性骨髓瘤细胞生长 被引量：5

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作者 彭彬 宋瑜婷 +3 位作者 张雪 王莹 曹帆帆 张登海 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期963-969,共7页

目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/... 目的研究雷公藤红素抑制多发性骨髓瘤细胞增殖与未折叠蛋白反应(UPR)的关系和分子机制,为多发性骨髓瘤的治疗提供新的药物靶点。方法 4种多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226、U266、SKO、KMS-11,经不同浓度雷公藤红素(增殖实验0.0~10.0μmol/L、凋亡实验0.0~4.0μmol/L、周期阻滞实验0.0~1.5μmol/L)处理不同时间(增殖实验1~3 d、凋亡实验1 d、周期阻滞实验1 d)后,检测细胞增殖、凋亡、周期阻滞情况;用蛋白质印迹法检测肌醇需求酶1(IRE1)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和活化转录因子6(ATF6)3条UPR信号通路中主要分子的表达,包括葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF6、PERK、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、IRE1、磷酸化IRE1(p-IRE1)。用慢病毒包被的含短发夹RNA(shRNA)载体对eIF2α表达进行干扰,观察雷公藤红素对干扰eIF2α表达后的RPMI 8226细胞UPR信号分子表达、凋亡和细胞周期的影响。结果雷公藤红素以剂量和时间依赖方式抑制4种多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导凋亡、使细胞周期阻滞在G0/G1期,其中RPMI8226细胞对雷公藤红素最敏感。在RPMI8226细胞,雷公藤红素处理浓度在0.5~2.0μmol/L作用30 min^24 h时均能使UPR的PERK通路中p-eIF2α表达水平升高(P<0.05或P<0.01),其下游CHOP表达也相应增加(P<0.05或P<0.01),而对其他2条通路ATF6和IRE1影响不明显。用慢病毒干扰eIF2α表达后,雷公藤红素上调CHOP表达、诱导凋亡和周期阻滞的作用均减弱或消失。结论雷公藤红素能抑制多种多发性骨髓瘤细胞增殖,活化UPR的PERK信号通路中eIF2α分子可能是其作用机制之一。 展开更多

关键词 雷公藤红素 多发性骨髓瘤 未折叠蛋白反应 真核细胞翻译起始因子2α

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肝细胞癌中真核延伸因子1A2的表达及意义

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作者 黄燕 易纯 +5 位作者 李琳子 刘莉莉 陆世旬 周璇 谢国斌 云径平 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期293-298,共6页

【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者... 【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者临床病理特征的关系。【结果】免疫组化结果显示:56.7%肝癌组织中eEF1A2高表达(eEF1A2++,eEF1A2+++),而仅13.5%的癌旁肝组织呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.014)。eEF1A2的表达与乙肝病毒感染(P=0.030)和复发(P=0.012)相关。Kaplan-Meier分析表明:eEF1A2高表达患者的总体生存时间(P=0.024)和无复发生存时间(P=0.023)较eEF1A2低表达患者更长。多因素Cox回归分析提示:eEF1A2表达为影响HCC患者总体生存的独立危险因素(P=0.038)。【结论】HCC中eEF1A2蛋白表达增高,与肝癌患者术后复发和预后相关,eEF1A2可以作为判断肝癌患者预后的潜在分子标志物。 展开更多

关键词 肝细胞癌 真核延伸因子1a2 预后 复发

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拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究 被引量：3

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作者 陈燕 王伟倩 +6 位作者 张红莉 夏群芳 孙恒吉 李瑞沙 郑帮 周树敏 张卫 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第1期106-109,115,共5页

探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶... 探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据. 展开更多

关键词 拟南芥 翻译延伸因子 EF1a GFP

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真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析 被引量：5

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作者 周峰 刘燕 +1 位作者 马永贵 黄原 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期773-782,共10页

真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的... 真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息. 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a(eEF1a) 地中海涡虫 进化踪迹分析 功能位点

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植物翻译延伸因子eEF1A的研究进展 被引量：2

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作者 陈晓荣 陈昶旭 +2 位作者 施力铭 周旭人 查笑君 《农技服务》 2019年第2期64-67,共4页

真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达... 真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达较广泛且稳定,因此在某些条件下可做内参基因用于基因功能分析。简要阐述植物中eEF1A的保守型、与植物抗逆性的关系、与其他蛋白互作的关系,并进行了展望。 展开更多

关键词 翻译延伸因子 eEF1a 保守性 植物抗逆性

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真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展 被引量：3

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作者 何天琦 卢松岩 +3 位作者 朱东韦 裴翊峰 鄢雨晴 董浩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期315-319,共5页

延伸因子(Elongation factors,EF)是在m RNA翻译时促进多肽链延伸的蛋白质因子,在原核生物和真核生物中并不相同。原核延伸因子分为EF-Tu、EF-Ts及EF-G3种,主要在原核细胞翻译时发挥作用。

关键词 翻译延伸因子 研究发现 RNA 细胞骨架 肌动蛋白 细胞凋亡过程 eEF1a 功能研究

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YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭 被引量：2

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作者 田祯 庄皓冉 +6 位作者 江楚雯 尹靖 韦晓莹 张枝林 史琳 张育 沈维干 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期8-16,共9页

目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的S... 目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的SMMC-7721和SK-HEP1肝癌细胞模型,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;应用反转录和实时定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平;利用染色质靶向酶切检测(cleavage under targets and release using nuclease,CUT&RUN)-qPCR实验检测YAP能否与EEF1A2基因的启动子序列结合。结果:EEF1A2在肝癌组织中高表达,并与肝癌细胞的迁移能力呈正相关;EEF1A2可以促进低迁移能力的SMMC-7721细胞和高迁移能力的SK-HEP1细胞迁移和侵袭,调控细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Snail和E-cadherin的表达;YAP可以上调EEF1A2的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭;CUT&RUN-qPCR实验结果显示YAP可以与EEF1A2基因的启动子序列结合。结论:YAP可以通过与EEF1A2基因的启动子序列结合,促进EEF1A2的表达,进一步促进肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 真核细胞翻译延伸因子1a2 Yes相关蛋白 细胞迁移 细胞侵袭 肝癌细胞

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真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

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作者 武乐 柳江枫 +3 位作者 梁万丰 杨晔宏 胡刚 杨俊涛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期867-885,共19页

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann... 目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。 展开更多

关键词 肺腺癌 真核翻译延伸因子1 免疫 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路

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eEF1A2在原发性肝细胞癌的表达 被引量：1

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作者 黄毅 邱福南 +4 位作者 陈敦雁 伍严安 李峰 黄肖利 吴文冰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2144-2150,共7页

目的:研究真核翻译延长因子1A2(e EF1A2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1A2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1A2的mRNA... 目的:研究真核翻译延长因子1A2(e EF1A2)在原发性肝细胞癌(HCC)组织的表达,以及e EF1A2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法:应用real-time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织e EF1A2的mRNA和蛋白表达,应用real-time PCR法与Western blot法分别检测几种HCC细胞株e EF1A2的mRNA与蛋白表达。构建GV287-e EF1A2表达慢病毒感染低表达e EF1A2的HCC细胞,应用real-time PCR法和Western blot法分别检测细胞e EF1A2的mRNA和蛋白表达;应用MTT法、DNA倍体法和real-time PCR法分别检测细胞活力、细胞周期和白蛋白mRNA的表达。结果:HCC癌组织e EF1A2的mRNA表达水平和蛋白表达阳性率明显高于配对癌旁组织与正常肝脏组织(P<0.01);e EF1A2的mRNA和蛋白在HCC细胞株SMMC-7721和BEL-7402高表达,在SK-HEP-1低表达。构建的GV287-e EF1A2表达慢病毒可感染SK-HEP-1细胞使e EF1A2过表达;与阴性对照组相比,GV287-e EF1A2组SK-HEP-1细胞的活力升高,白蛋白的mRNA表达水平降低,G0/G1期的细胞比例显著减少,而S期和G2/M期的细胞比例显著升高。结论:e EF1A2在HCC癌组织存在异位高表达;e EF1A2可能是HCC的一种潜在癌蛋白,其过表达可增强HCC细胞的增殖能力,降低HCC细胞的分化程度,并促使细胞周期通过G0/G1期,进入S期和G2/M期。 展开更多

关键词 真核翻译延长因子1a2 肝细胞癌 细胞增殖 细胞周期

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敲低EEF1A2增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞的药效

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作者 梁馨予 刘佳君 刘建文 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期59-69,共11页

探究乳腺癌中翻译延伸因子1α2(EEF1A2)与HER2之间的潜在关系。通过TCGA(TheCancerGenomeAtlas)分析EEF1A2mRNA在乳腺癌中的表达情况;利用MTT(噻唑蓝)、克隆形成和Transwell实验方法检测了HER2+乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-453在EEF1A2蛋... 探究乳腺癌中翻译延伸因子1α2(EEF1A2)与HER2之间的潜在关系。通过TCGA(TheCancerGenomeAtlas)分析EEF1A2mRNA在乳腺癌中的表达情况;利用MTT(噻唑蓝)、克隆形成和Transwell实验方法检测了HER2+乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-453在EEF1A2蛋白表达敲低及拉帕替尼处理后的增殖、迁移和凋亡情况。结果表明EEF1A2 mRNA在HER2+乳腺癌组织中高表达,并降低了HER2+乳腺癌患者的总生存率;同时,SKBR3和MDA-MB-453细胞中EEF1A2敲低会增强拉帕替尼对细胞体外增殖、迁移和侵袭的抑制,以及对凋亡的促进。Western blot实验结果表明,下调EEF1A2会增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞中HER2/AKT通路的抑制。EEF1A2蛋白可成为改善拉帕替尼治疗HER2+乳腺癌效果的潜在靶标。 展开更多

关键词 乳腺癌 翻译延伸因子1α2 HER2 AKT 拉帕替尼

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核因子E2相关因子1诸多亚型的产生机制及其在疾病中的作用

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作者 贾蔓 吕金晶 向远彩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期595-602,共8页

核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多... 核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多种疾病。近年研究发现,Nrf1存在多种具有不同程度活化活性甚至相反活性的亚型,这些亚型的分布可能在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。为了更好地了解Nrf1在组织细胞中所发挥的功能,本文简要介绍Nrf1的发现历程,并从选择性剪切加工、内部选择性翻译起始、翻译后剪切加工等方面阐述Nrf1亚型的产生机制,同时详细阐明“跨膜动态加工”、“位点特异性剪切加工”、“泛素依赖性剪切加工”3种翻译后加工模型的差异。最后,介绍Nrf1各亚型的生物学功能及其产生过程出现异常时在疾病中的作用。本文着重对Nrf1各亚型产生机制及其在疾病中的作用进行综述,力求为寻找肿瘤治疗的新策略提供新的方向。 展开更多

关键词 核因子E2相关因子1 RNA剪切 翻译后修饰加工 肿瘤治疗

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eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究 被引量：8

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作者 黄毅 胡建达 +4 位作者 伍严安 郑静 齐元麟 陈英玉 黄肖利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期279-284,共6页

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细... 本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a1 JURKAT细胞 细胞增殖 细胞凋亡 PI3K AKT信号通路

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Mnk2和eIF4E在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：4

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作者 曾博 冯沿芬 +9 位作者 黄启涛 陈景福 张昕 韩向前 张水深 邹健勇 苏春华 陈振光 罗红鹤 雷艺炎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期349-352,共4页

目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本9... 目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本98例及正常食管黏膜上皮组织20例,应用免疫组化SP法检测癌组织及正常食管黏膜组织中Mnk2和eIF4E的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果:Mnk2在食管癌组织中的阳性率68.4%(67/98),eIF4E的阳性率为61.2%(60/98),Mnk2与eIF4E表达呈正相关(P<0.05),且Mnk2蛋白过表达与食管鳞癌的浸润深度、病理分期密切相关(P<0.05)。结论:Mnk2在食管癌组织中的过表达与浸润深度、TNM分期有关,同时与eIF4E在食管癌的表达相关,两者在食管癌的发展中有协同作用。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 MAPK相互作用激酶-2 真核细胞翻译起始因子4E

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EEF1A2基因慢病毒表达载体的构建及慢病毒表达系统的建立 被引量：2

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作者 许朝 胡端敏 诸琦 《生物学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期18-22,共5页

利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包... 利用PCR方法合成EEF1A2的基因全长,经NotⅠ和NsiⅠ酶切后克隆到慢病毒载体pGLV5-EF1a-EGFP/Puro上。构建的重组质粒pGLV5/EEF1A2经PCR、酶切及测序鉴定正确后,利用慢病毒表达系统(pGLV5 Lentiviral Expression Systems),将重组质粒与包装系统质粒(pVSV-G,pGag/Pol,pRev)4质粒共转染293T细胞,收集培养上清并感染人胰腺癌SW1990细胞,经嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞株EEF1A2/SW1990。Real-time PCR和West-ern blot检测结果显示EEF1A2在EEF1A2/SW1990细胞中表达较原代细胞明显增高(P<0.05),MTT结果显示EEF1A2/SW1990细胞的增殖能力亦较原代细胞显著增强(P<0.05)。成功构建了EEF1A2基因的慢病毒载体质粒pGLV5-EEF1A2及其慢病毒表达系统,并筛选出稳定过表达EEF1A2的人胰腺癌细胞株EEF1A2/SW1990。 展开更多

关键词 真核延伸因子1a2 慢病毒载体 真核表达

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siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制 被引量：1

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作者 王贺彬 汪雅芳 +3 位作者 沈妙言 李娜 赵丽晶 滕博 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期39-43,I0001,共6页

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E... 目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。 展开更多

关键词 小干扰RNA 真核细胞翻译起始因子4E 喉肿瘤 HEP-2细胞 细胞凋亡

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白质消融性白质脑病患儿12例临床与遗传学研究 被引量：1

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作者 冷雪荣 吴晔 +4 位作者 潘艳霞 杜丽 金洪 王静敏 姜玉武 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2010年第2期94-99,共6页

目的对临床诊断为白质消融性白质脑病(VWM)的中国患儿进行真核细胞翻译启动因子2Bα-ε(eIF2Bα-ε)的相应编码基因(EIF2B1～5)突变分析,以期提高儿科医生对该病的认识。方法选择临床诊断为VWM的患儿为研究对象,分析其临床特征;进行EIF... 目的对临床诊断为白质消融性白质脑病(VWM)的中国患儿进行真核细胞翻译启动因子2Bα-ε(eIF2Bα-ε)的相应编码基因(EIF2B1～5)突变分析,以期提高儿科医生对该病的认识。方法选择临床诊断为VWM的患儿为研究对象,分析其临床特征;进行EIF2B1～5基因突变筛查;对新发现的EIF2B5基因突变,在HEK293细胞中进行突变蛋白表达水平分析。结果2006至2008年在北京大学第一医院儿科临床诊断VWM患儿12例,其中男8例,女4例。发病前智力、运动发育正常或轻度落后;起病年龄为1岁6个月至6岁8个月,均亚急性起病,起病症状多为运动功能障碍。随访至2009年6月,病程为9个月至7年。均为病情进展性加重病程,其中7例伴发作性病情加重。头颅MRI检查均提示对称性大脑白质液化特征。共发现EIF2B5,EIF2B3和EIF2B2的16种突变,其中包括9种新突变:7种错义突变为EIF2B5:c.185A>T(p.D62V),c.1004G>C(p.C335S),c.1126A>G(p.N376D);EIF2B3:c.140G>A(p.G47E),c.1037T>C(p.I346T);EIF2B2:c.254T>A(p.V85E),c.922G>A(p.V308M);1种无义突变为EIF2B5:c.805C>T(R269X);1种缺失突变为EIF2B5:c.1827-1838del(p.S610-D613del)。其中EIF2B3突变占所有突变的18.8%(3/16)。蛋白表达水平分析发现EIF2B5基因的p.R296X和p.S610-D613del突变导致eIF2Bε的蛋白表达水平显著降低。结论12例患儿均符合VWM早期儿童型诊断,发现了9种EIF2B1～5的新突变,提示中国VWM患儿具有独特突变谱。新发现的EIF2B5p.R296X和p.S610-D613del突变可导致蛋白功能严重受损。 展开更多

关键词 白质消融性白质脑病 真核细胞翻译启动因子2B EIF2B突变 儿童

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CML细胞eIF4E和Trib2基因mRNA表达分析

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作者 黄莲芬 冯文莉 +1 位作者 万根平 罗红伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1358-1360,共3页

目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠... 目的:为了探索慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)急变机理,寻求新的治疗靶标,我们对获得的9例CML病人骨髓标本以及CML急性红系变细胞株中K562细胞株中eIF4E基因和Trib2基因的表达水平进行初步检测,为进一步的研究奠定基础。方法:分离骨髓单个核细胞,用Trizol裂解提取RNA,RT-PCR检测eIF4E基因和trib2基因mRNA的表达水平。结果:初步分析显示部分CML病人eIF4E基因mRNA表达水平很高,为CML疾病进展机制进一步研究奠定了基础。结论:部分CML病人骨髓标本中eIF4E和TRIB2基因mRNA表达水平较高,eIF4E和trib2有可能成为CML病人新的治疗靶点。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 真核细胞翻译起始因子4E Trib2

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42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异

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作者 武小雯 张新亭 +3 位作者 常宇阳 汪丝雨 陈良标 关桂君 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期49-53,81,共6页

青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(e... 青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。 展开更多

关键词 性腺体细胞衍生因子 真核翻译延伸因子1 42Sp50基因 卵巢发育 青鳉

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eEF1A1调控水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒复制的初步研究

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作者 陈美桦 徐含翠 +4 位作者 王林旭 罗洪 齐琦 王勃 段小涛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期170-176,共7页

目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧... 目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。 展开更多

关键词 真核翻译延伸因子1a1 水疱性口炎病毒 单纯疱疹病毒 病毒复制

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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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作者 何嘉文 李友 +1 位作者 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期831-839,共9页

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。 展开更多

关键词 真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒 稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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