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红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生
被引量：
7
1
作者
赵瑞
刘建民
+4 位作者
赵文元
黎莉
霍克克
许奕
黄清海
《医学研究生学报》
CAS
2005年第4期318-320,i015,共4页
目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止...
目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止后12、24、48、72和96h海马神经元凋亡情况,同时以Westernblot法检测模型鼠海马eIF2α的表达变化及其与细胞凋亡之间的相关性。结果:在癫痫发作后12h出现凋亡神经元,随时间延长,海马神经元凋亡数不断增加,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现了Caspase3酶切eIF2α产生的片段,并逐渐变浓,至72h。结论:癫痫模型大鼠海马中Caspase3酶切eIF2α与神经元凋亡的发生时间一致,提示在癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中eIF2α被Caspase3酶切。
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关键词
癫痫
海马
凋亡
真核生物起始因子2
半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶
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职称材料
鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
袁晓琴
陈仕怡
+5 位作者
刘梦茜
李春燕
许丽惠
周五朵
吴异健
王全溪
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期151-156,共6页
为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG...
为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。
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关键词
鸡
真核生物
翻译
起始
因子
2α
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析
被引量：
1
3
作者
卢晓昭
彭鸿娟
陈晓光
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第4期296-299,共4页
目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸...
目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。
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关键词
日本血吸虫
表达序列标签
基因克隆
真核生物
翻译
起始
因子
2α
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职称材料
题名
红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生
被引量：
7
1
作者
赵瑞
刘建民
赵文元
黎莉
霍克克
许奕
黄清海
机构
第二军医大学长海医院神经外科
复旦大学生命科学院遗传工程国家重点实验室
出处
《医学研究生学报》
CAS
2005年第4期318-320,i015,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:39980039)
上海市自然科学基金资助项目(批准号:99ZB14039)
文摘
目的:研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase3)在红藻氨酸癫痫模型大鼠海马凋亡神经元中,对其已知底物真核生物起始因子2(eIF2α)的作用。方法:制备红藻氨酸诱导大鼠癫痫模型,记录模型发作行为及脑电图表现,以TUNEL法检测模型癫痫发作终止后12、24、48、72和96h海马神经元凋亡情况,同时以Westernblot法检测模型鼠海马eIF2α的表达变化及其与细胞凋亡之间的相关性。结果:在癫痫发作后12h出现凋亡神经元,随时间延长,海马神经元凋亡数不断增加,72h达高峰;发作后24h海马神经元出现了Caspase3酶切eIF2α产生的片段,并逐渐变浓,至72h。结论:癫痫模型大鼠海马中Caspase3酶切eIF2α与神经元凋亡的发生时间一致,提示在癫痫模型大鼠海马神经元凋亡中eIF2α被Caspase3酶切。
关键词
癫痫
海马
凋亡
真核生物起始因子2
半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶
Keywords
Epilepsy
Hippocampus
Apoptosis
eIF
2
Caspase-3
分类号
R742.1 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
袁晓琴
陈仕怡
刘梦茜
李春燕
许丽惠
周五朵
吴异健
王全溪
机构
福建农林大学动物科学学院
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期151-156,共6页
基金
国家自然科学基金-促进海峡两岸科技联合基金重点项目(U1305212)~~
文摘
为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。
关键词
鸡
真核生物
翻译
起始
因子
2α
原核表达
多克隆抗体
Keywords
eukaryotic initiation factor alpha
2
prokaryotic expression
polyclonal antibody
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析
被引量：
1
3
作者
卢晓昭
彭鸿娟
陈晓光
机构
第一军医大学寄生虫学教研室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第4期296-299,共4页
基金
联合国发展计划署/世界银行/世界卫生组织热带病研究和培训特别规划署基金(A00690
A00191)~~
文摘
目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。
关键词
日本血吸虫
表达序列标签
基因克隆
真核生物
翻译
起始
因子
2α
Keywords
Schistosoma japonicum
Schistosoma mansoni
expression seqnence tag
gene clone
eukaryotic initiation factor
2
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
红藻氨酸致痫大鼠海马神经元中真核生物起始因子2α酶切片段的产生
赵瑞
刘建民
赵文元
黎莉
霍克克
许奕
黄清海
《医学研究生学报》
CAS
2005
7
在线阅读
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职称材料
2
鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备
袁晓琴
陈仕怡
刘梦茜
李春燕
许丽惠
周五朵
吴异健
王全溪
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析
卢晓昭
彭鸿娟
陈晓光
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003
1
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