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精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
被引量:
1
1
作者
张磊
戴朝
+4 位作者
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第2期182-186,共5页
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶...
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。
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关键词
皮质神经元细胞
自噬
自噬流
OGD/R
检测
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职称材料
大鼠大脑皮质神经细胞氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的抑制作用
被引量:
4
2
作者
张磊
李阳
+5 位作者
胡玉奇
许晖
朱超
王旭
赵冬
贺昕
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期590-597,共8页
目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛...
目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛霉素A1(BafA1)组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测细胞活力,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,采用反转录PCR法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA表达,Western blot法检测LC3、 P62及caspase-3的蛋白表达。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒转染神经细胞检测自噬荧光强度,透射电子显微镜观察自噬体的超微结构变化。结果 与对照组相比,OGD/R组神经细胞活力明显降低,LDH释放水平明显升高,凋亡增加;LC3、 P62、 caspase-3的mRNA和蛋白表达增强;RFP荧光强度增加,自噬体增加且自噬溶酶体更加聚集,加用自噬晚期抑制剂BafA1后RFP荧光强度显著降低。结论 OGD/R诱导了神经元细胞的自噬和凋亡,抑制自噬后加重了神经细胞的损伤和凋亡。
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关键词
皮质神经元细胞
氧糖剥夺再复氧(OGD/R)
细胞
凋亡
自噬
巴弗洛霉素A1(BafA1)
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职称材料
盐酸非那嗪奈对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用
被引量:
4
3
作者
李冬洁
李建其
+3 位作者
黄丽瑛
苏定冯
沈甫明
奚涛
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期716-720,共5页
目的探讨盐酸非那嗪奈(fenazinel dihydrochloride,FD)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法线拴法制备大鼠中动脉局灶性脑缺血(24h)模型。测定脑梗死面积;检测缺血组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)、乳酸(LA)...
目的探讨盐酸非那嗪奈(fenazinel dihydrochloride,FD)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法线拴法制备大鼠中动脉局灶性脑缺血(24h)模型。测定脑梗死面积;检测缺血组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)、乳酸(LA)含量;观察组织病理学改变。制备大鼠原代神经元细胞撤血清损伤模型及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,检测FD对损伤细胞死亡率、SOD活性及MDA、LA含量的影响。结果FD可明显降低脑梗死面积,升高组织中SOD活性,降低MDA、LA含量,减轻脑组织病理学损害;在细胞水平上,FD降低损伤细胞死亡率,升高SOD活性,降低MDA、LA含量。结论FD对大鼠局灶性脑缺血损伤具有明显的保护作用,其机制与降低兴奋性氨基酸损伤、清除氧自由基及改善能量代谢有关。
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关键词
盐酸非那嗪奈
局灶性脑缺血
大鼠
皮质神经元细胞
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职称材料
题名
精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
被引量:
1
1
作者
张磊
戴朝
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
机构
石河子大学第一附属医院神经外科
新疆生产建设兵团第十师北屯医院外科
新疆生产建设兵团第十师疾病预防控制中心
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第2期182-186,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81960222)
石河子大学国际科技合作促进计划(编号:GJHZ201704)
兵团财政科技计划项目(编号:2020CB011)。
文摘
目的用几种高度精细灵敏的方法检测氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后神经元自噬流不同阶段的变化。方法原代皮质神经元细胞经过OGD/R后将实验分为OGD/R组及OGD/R+bafilomycin A1(BafA1)组,用RFP-GFP串联荧光标记LC3基因转染检测自噬小体和溶酶体的融合情况,透射电子显微镜(TEM)观察自噬的超微结构,SQSTM1/p62结合LC3蛋白翻转实验检测p62与LC3蛋白的定量,p62免疫染色观测其分布与含量。结果荧光显微镜下OGD/R组自噬溶酶体与自噬小体比值明显增高;TEM可观测到不同阶段的自噬结构变化;可溶性p62的比值结合LC3Ⅱ/Ⅰ的比值共同反映了自噬流的活化;p62荧光染色后在BafA1组中分布居多。结论每种方法各有其优点,不同方法和指标能够精准地反映神经元OGD/R后自噬流在不同阶段的具体变化,掌握并应用好这些方法能有效从自噬角度探索中枢神经系统疾病。
关键词
皮质神经元细胞
自噬
自噬流
OGD/R
检测
Keywords
cortical neuron cells
autophagy
autophagic flux
OGD/R
detect
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
大鼠大脑皮质神经细胞氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的抑制作用
被引量:
4
2
作者
张磊
李阳
胡玉奇
许晖
朱超
王旭
赵冬
贺昕
机构
石河子大学第一附属医院神经外科
新疆生产建设兵团第十师北屯医院神经外科
新疆乌鲁木齐市口腔医院颌面外科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期590-597,共8页
基金
国家自然科学基金(81960222)
石河子大学国际科技合作促进计划(GJHZ201704)
兵团中青年科技创新领军人才(2020CB011)。
文摘
目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛霉素A1(BafA1)组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测细胞活力,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,采用反转录PCR法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA表达,Western blot法检测LC3、 P62及caspase-3的蛋白表达。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒转染神经细胞检测自噬荧光强度,透射电子显微镜观察自噬体的超微结构变化。结果 与对照组相比,OGD/R组神经细胞活力明显降低,LDH释放水平明显升高,凋亡增加;LC3、 P62、 caspase-3的mRNA和蛋白表达增强;RFP荧光强度增加,自噬体增加且自噬溶酶体更加聚集,加用自噬晚期抑制剂BafA1后RFP荧光强度显著降低。结论 OGD/R诱导了神经元细胞的自噬和凋亡,抑制自噬后加重了神经细胞的损伤和凋亡。
关键词
皮质神经元细胞
氧糖剥夺再复氧(OGD/R)
细胞
凋亡
自噬
巴弗洛霉素A1(BafA1)
Keywords
cortical neurons
oxygen-glucose deprivation and reoxygenation(OGD/R)
apoptosis
autophagy
Bafilomycin A1(BafA1)
分类号
R965 [医药卫生—药理学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
R364.4 [医药卫生—病理学]
Q255 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
盐酸非那嗪奈对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用
被引量:
4
3
作者
李冬洁
李建其
黄丽瑛
苏定冯
沈甫明
奚涛
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
上海医药工业研究院
中国人民解放军第二军医大学药学院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期716-720,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)重大专项基金资助项目(No2006AA02Z4C1)
文摘
目的探讨盐酸非那嗪奈(fenazinel dihydrochloride,FD)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法线拴法制备大鼠中动脉局灶性脑缺血(24h)模型。测定脑梗死面积;检测缺血组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)、乳酸(LA)含量;观察组织病理学改变。制备大鼠原代神经元细胞撤血清损伤模型及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)损伤模型,检测FD对损伤细胞死亡率、SOD活性及MDA、LA含量的影响。结果FD可明显降低脑梗死面积,升高组织中SOD活性,降低MDA、LA含量,减轻脑组织病理学损害;在细胞水平上,FD降低损伤细胞死亡率,升高SOD活性,降低MDA、LA含量。结论FD对大鼠局灶性脑缺血损伤具有明显的保护作用,其机制与降低兴奋性氨基酸损伤、清除氧自由基及改善能量代谢有关。
关键词
盐酸非那嗪奈
局灶性脑缺血
大鼠
皮质神经元细胞
Keywords
fenazinel dihydrochloride
focal cerebral ischemia
rat cerebral cortical neurons
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.81 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
精细化检测原代皮质神经元细胞氧糖剥夺再复氧后自噬流的变化
张磊
戴朝
韩延峰
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022
1
在线阅读
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职称材料
2
大鼠大脑皮质神经细胞氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的抑制作用
张磊
李阳
胡玉奇
许晖
朱超
王旭
赵冬
贺昕
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
4
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职称材料
3
盐酸非那嗪奈对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用
李冬洁
李建其
黄丽瑛
苏定冯
沈甫明
奚涛
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
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