为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5％马血清、5％小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖...为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5％马血清、5％小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,于第9 d将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果表明从孕15 d SD胎鼠大脑皮质分离的神经元纯度高,生长旺盛,形态典型,90％以上表达NSE免疫阳性。该结果提示我们建立的培养大鼠大脑皮质神经元的方法易于标准化操作,结果稳定,值得推广应用。展开更多
目的:观察番茄红素(lycopene)对氧化损伤的原代皮质神经元的保护效应并探讨其作用机制。方法:采用原代细胞培养技术体外分离培养小鼠皮质神经元,通过免疫荧光染色法检测微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)的表达进...目的:观察番茄红素(lycopene)对氧化损伤的原代皮质神经元的保护效应并探讨其作用机制。方法:采用原代细胞培养技术体外分离培养小鼠皮质神经元,通过免疫荧光染色法检测微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)的表达进行鉴定。将神经元分为4组:正常神经元组、叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)处理组、t-BHP+lycopene处理组和lycopene处理组,培养24 h,采用MTT法检测各组神经元的活力;采用流式细胞技术检测各组神经元内ROS的水平;Western blot法检测各组神经元Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3及细胞色素C蛋白表达的变化。结果:Lycopene能明显提高t-BHP处理的神经元活性,降低tBHP处理的神经元内ROS含量,同时上调Bcl-2蛋白的表达,降低Bax、cleaved caspase-3和细胞色素C蛋白的表达(P<0.05)。结论:Lycopene能够对抗t-BHP诱导的原代皮质神经元的损伤,抑制神经元凋亡,其机制可能与降低神经元内ROS的水平及上调的表达有关。展开更多
文摘为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5％马血清、5％小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,于第9 d将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果表明从孕15 d SD胎鼠大脑皮质分离的神经元纯度高,生长旺盛,形态典型,90％以上表达NSE免疫阳性。该结果提示我们建立的培养大鼠大脑皮质神经元的方法易于标准化操作,结果稳定,值得推广应用。
