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LAMB1通过ERK/F-actin通路调控小鼠大脑皮质神经元中谷氨酸受体的表达
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作者 李珍珍 刘可欣 +5 位作者 刘万能 窦志伟 王帅 唐扬 罗层 武胜昔 《神经解剖学杂志》 北大核心 2025年第5期549-555,共7页
目的:探讨大脑皮质神经元中层粘连蛋白β1(LAMB1)对谷氨酸受体的调控作用与机制。方法:利用重组慢病毒(LV-shLamb1)敲低小鼠原代皮质神经元中LAMB1的表达,通过免疫荧光染色和Western blot方法检测皮质神经元LAMB1敲低后,纤维肌动蛋白(F-... 目的:探讨大脑皮质神经元中层粘连蛋白β1(LAMB1)对谷氨酸受体的调控作用与机制。方法:利用重组慢病毒(LV-shLamb1)敲低小鼠原代皮质神经元中LAMB1的表达,通过免疫荧光染色和Western blot方法检测皮质神经元LAMB1敲低后,纤维肌动蛋白(F-actin),谷氨酸受体和细胞外信号调节激酶(ERK)的表达情况。结果:LV-shLamb1能够显著抑制小鼠大脑皮质神经元中LAMB1的表达,与此同时,LV-shLamb1显著增加了F-actin聚合,以及AMPA受体GluR1和GluR2、NMDA受体NR1和NR2A的表达,进一步通过Western blot检测显示:与对照组相比,LV-shLamb1感染后ERK磷酸化水平显著增加。结论:小鼠大脑皮质神经元中LAMB1表达抑制后,ERK通路激活,骨架蛋白F-actin聚合和谷氨酸受体表达上调,提示LAMB1可能通过ERK通路调控F-actin稳态和谷氨酸受体水平,从而在神经元功能中发挥潜在的重要作用。 展开更多
关键词 皮质神经 层粘连蛋白β1 纤维肌动蛋白 ERK通路 谷氨酸受体 小鼠
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远志皂苷元对新生大鼠皮质神经元的营养作用 被引量:13
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作者 皮婷 薛小燕 +3 位作者 林炼峰 苏钜年 程欣 罗焕敏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期40-44,共5页
目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10... 目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10μg.L-1。倒置显微镜下观察各组皮质神经元的形态及平均突起生长情况;免疫荧光染色法观察远志皂苷元的营养作用,检测神经元平均突起长度;另外在营养缺乏培养条件下,通过MTT法检测神经元的存活情况。结果分别加入药物作用3d后,远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1均可以促进神经元突起生长,从溶媒对照组(152±46)μm分别增加至186±51,188±34及(193±43)μm,其中远志皂苷元2μmol.L-1最为显著(P<0.01),稍弱于bFGF组(203±40)μm。营养缺乏培养条件下细胞存活率显著下降,从正常培养条件下(100.0±5.4)%降至(90.8±4.6)%(P<0.01)。远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1可明显改善营养缺乏引起的细胞死亡,细胞存活率分别为(109.7±3.2)%,(111.3±1.6)%及(112.9±4.8)%,且有一定的浓度依赖性(r=0.784,P<0.01)。结论远志皂苷元可以促进神经元的存活,并可促进皮质神经元突起生长,具有神经营养作用。 展开更多
关键词 远志皂苷元 皮质神经 神经营养因子 突起生长
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藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡的保护作用 被引量:6
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作者 唐孝礼 邱鹏新 +3 位作者 黎明涛 苏兴文 林穗珍 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期407-410,共4页
目的 研究藻酸双酯钠(PSS) 对蜂毒肽(mastoparan)诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法 体外培养大鼠皮质神经元,定性定量检测细胞凋亡:①用FDA(fluorescein diacetate) 染色... 目的 研究藻酸双酯钠(PSS) 对蜂毒肽(mastoparan)诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法 体外培养大鼠皮质神经元,定性定量检测细胞凋亡:①用FDA(fluorescein diacetate) 染色检测细胞存活率,用Hoechst 33258 染色,分析细胞核的形态变化;②琼脂糖凝胶电泳分析DNA 断裂;③流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 PSS使皮质神经元存活率增加,使mastoparan 引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失;mastoparan 使神经元的DNA电泳图谱出现明显的“梯子状”,而PSS使此现象消失;mastoparan使神经元的流式细胞仪分析图上出现明显的凋亡峰,PSS可使此凋亡峰消失。 展开更多
关键词 藻酸双酯钠 蜂毒肽 皮质神经 细胞凋亡
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大黄素甲醚对体外新生大鼠皮质神经元的营养作用 被引量:8
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作者 苏钜年 赖永长 +3 位作者 皮婷 薛小燕 林炼峰 罗焕敏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1790-1793,共4页
目的研究大黄素甲醚对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法体外以0.4%B27+DMEM/F12培养出生24h内的大鼠皮层神经元。采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定。分为溶媒对照组,大黄素甲醚(0.5、1、2、4μmol/L)组和碱性成纤维细胞... 目的研究大黄素甲醚对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法体外以0.4%B27+DMEM/F12培养出生24h内的大鼠皮层神经元。采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定。分为溶媒对照组,大黄素甲醚(0.5、1、2、4μmol/L)组和碱性成纤维细胞生长因子bFGF(10 ng/mL)组。显微镜观察各组皮质神经元的形态,利用软件统计神经元平均突起长度;MTT法检测神经元的存活情况;RT-PCR检测MAP-2表达量。加入Trk受体抑制剂或腺苷受体抑制剂单独作用或与大黄素甲醚相互作用,检测突起长度变化。结果与溶媒对照组相比,培养3d后的大黄素甲醚1、2、4μmol/L剂量组均可延长神经元的存活时间,促进神经元突起生长,增加MAP-2 mRNA的表达量。加入Trk受体抑制剂能抑制大黄素甲醚对神经元的影响,而加入腺苷受体抑制剂则无影响。结论大黄素甲醚对新生大鼠皮层神经元具有神经营养作用。 展开更多
关键词 大黄素甲醚 皮质神经 神经营养 突起生长
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胎鼠大脑皮质神经元的体外培养及鉴定 被引量:12
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作者 罗湘颖 杨志敏 +2 位作者 王廷华 刘苏 赵匡彦 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期505-508,共4页
为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5%马血清、5%小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖... 为了建立SD大鼠大脑皮质神经元的分离、培养及免疫细胞化学鉴定技术,本研究通过分离孕15 d SD胎鼠大脑皮质组织,经机械吹打后,加入含有5%马血清、5%小牛血清的MEM培养基接种在24孔培养板中进行原代培养,并于第3 d在培养基中加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长,于第9 d将细胞固定后采用免疫细胞化学技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果表明从孕15 d SD胎鼠大脑皮质分离的神经元纯度高,生长旺盛,形态典型,90%以上表达NSE免疫阳性。该结果提示我们建立的培养大鼠大脑皮质神经元的方法易于标准化操作,结果稳定,值得推广应用。 展开更多
关键词 大脑皮质神经 胎鼠 NSE SD 表达 体外培养 免疫阳性 胶质细胞 原代培养 免疫细胞化学
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缺氧复氧时培养的大脑皮质神经细胞一氧化氮动态变化及银杏叶提取物的调节作用 被引量:9
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作者 岳旭 郭艳茹 +2 位作者 季凤清 郭崇洁 赵天德 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期32-36,共5页
本研究用原代混合培养的 Wistar胎鼠大脑皮质神经细胞 ,给予不同时间的缺氧复氧 ,观察其一氧化氮的代谢中间产物亚硝酸盐的动态变化以及诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和银杏叶提取物对一氧化氮的调节作用。结果表明 :缺氧复氧可造成... 本研究用原代混合培养的 Wistar胎鼠大脑皮质神经细胞 ,给予不同时间的缺氧复氧 ,观察其一氧化氮的代谢中间产物亚硝酸盐的动态变化以及诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍和银杏叶提取物对一氧化氮的调节作用。结果表明 :缺氧复氧可造成培养大鼠的大脑皮质神经细胞一氧化氮双相升高。即 :在缺氧早期 (缺氧 2 h)可见一氧化氮一过性升高 ,然后很快恢复至正常水平 ;在缺氧 8h、复氧 18h后可见第二次一氧化氮升高。于缺氧前 1h在细胞培养上清液中分别加入氨基胍 (0 .5 m mol/L)和银杏叶提取物 (5 0 μg/ml) ,发现氨基胍可有效地抑制缺氧复氧晚期培养的大鼠大脑皮质神经细胞一氧化氮升高 ,但不能抑制缺氧早期一氧化氮的产生 ;而银杏叶提取物可有效地抑制缺氧复氧诱导的一氧化氮双相升高。提示 :在混合培养的胎鼠大脑皮质神经细胞缺氧复氧损伤模型中 ,一氧化氮的双相升高是由不同亚型的一氧化氮合酶所介导 ,其早期升高可能为神经元型一氧化氮合酶活性上调所致 ,而其晚期升高则是诱导型一氧化氮合酶活性增强的结果 ; 展开更多
关键词 缺氧复氧 一氧化氮 银杏叶提取物 原代培养 大脑皮质神经细胞 胎鼠 调节作用
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Aβ_(25-35)对大鼠大脑皮质神经元神经甾体水平的影响 被引量:8
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作者 于洋 薛改 +2 位作者 吴红海 李莎莎 侯艳宁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期783-786,共4页
目的研究Aβ25-35对大鼠大脑皮质神经元合成神经甾体的影响。方法采用Aβ25-35(1μmol·L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用法测定细胞培养液中神经甾体的浓度,四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞... 目的研究Aβ25-35对大鼠大脑皮质神经元合成神经甾体的影响。方法采用Aβ25-35(1μmol·L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用法测定细胞培养液中神经甾体的浓度,四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞活性。结果与对照组相比,Aβ25-35处理后神经元存活率降低约50%(P<0.01),胆固醇处理组神经元存活率未见改变(P>0.05),但Aβ+胆固醇组的神经元存活率明显高于Aβ处理组(P<0.01)。与胆固醇组相比,Aβ25-35处理后神经甾体PREG水平略有降低(P>0.05),PROG水平明显下降(P<0.01),AP水平明显增高(P<0.01)。结论神经甾体PREG-PROG-AP代谢通路在Aβ25-35引起的大鼠大脑皮质神经元损伤时发生明显改变,并能部分地对抗Aβ的神经毒性作用。 展开更多
关键词 Β-淀粉样蛋白 神经甾体发生 液相色谱-质联用法 皮质神经 神经毒性 阿尔采末病
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胸腺素β4对大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧损伤的保护作用研究 被引量:9
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作者 张忠胜 刘双凤 黄四春 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期296-302,共7页
目的研究胸腺素β4对体外培养大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法分离并鉴定原代培养的皮质神经细胞,通过OGD/R法建立皮质神经细胞模拟缺血-再灌注损伤模型(氧糖剥夺6h,复氧12h)。实验分为对照组、模型... 目的研究胸腺素β4对体外培养大鼠皮质神经细胞氧糖剥夺-复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其机制。方法分离并鉴定原代培养的皮质神经细胞,通过OGD/R法建立皮质神经细胞模拟缺血-再灌注损伤模型(氧糖剥夺6h,复氧12h)。实验分为对照组、模型组、治疗组(建模前2h加入胸腺素β4)。CCK8法确定胸腺素β4的最佳作用浓度,流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blotting检测78000葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bax的表达水平并进行组间比较。应用SPSS19.0软件分析处理数据,正态分布的计量资料3组间比较采用单因素方差分析。结果大鼠皮质神经细胞被正确分离。胸腺素β4最佳作用浓度为10μg/L。与对照组比较,模型组皮质神经细胞存活率明显下降(P=0.002),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),GRP78、CHOP、Bax表达水平明显升高(P值分别为0.034、0、0.045),Bcl-2的表达水平明显下降(P=0.006);与模型组比较,治疗组(10μg/L外源性胸腺素β4)细胞活力明显增高(P=0.008),细胞凋亡率明显降低(P=0.002),GRP78、CHOP、Bax表达水平明显下降(P值分别为0.032、0.027、0.019),Bcl-2表达水平明显升高(P=0.028),差异均有统计学意义。结论胸腺素β4能抑制OGD/R诱导的内质网应激依赖性细胞凋亡,为胸腺素β4在脑缺血-再灌注损伤治疗中的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 胸腺素 细胞凋亡 胸腺素Β4 皮质神经 内质网应激
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烟碱拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用 被引量:2
9
作者 黄晓卉 朱小南 +2 位作者 许燕 陈汝筑 汪雪兰 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期160-163,167,共5页
【目的】研究烟碱对皮质神经元的保护作用。【方法】在培养至第6天的皮质神经元中以不同浓度(1 μmol/L,10μmol/L,100μmol/L)烟碱预孵2 h,再加入0.1μmol/L秋水仙碱作用24 h。通过相差显微镜形态学观察,Hoechst33258核荧光染色进行凋... 【目的】研究烟碱对皮质神经元的保护作用。【方法】在培养至第6天的皮质神经元中以不同浓度(1 μmol/L,10μmol/L,100μmol/L)烟碱预孵2 h,再加入0.1μmol/L秋水仙碱作用24 h。通过相差显微镜形态学观察,Hoechst33258核荧光染色进行凋亡率计数和测定乳酸脱氢酶相对释放量(LDH)的实验,再测试10μmol/L 预孵不同时间(0.5,2,8)h的烟碱对秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用。【结果】秋水仙碱可诱导皮质神经元调亡,烟碱可拮抗秋水仙碱的此种作用。其中10μmol/L烟碱预孵2 h保护作用最强。【结论】烟碱可拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用。 展开更多
关键词 烟碱 皮质神经 秋水仙碱 凋亡 乳酸脱氢酶
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铅镉联合对新生大鼠大脑皮质神经细胞形态学损伤的研究 被引量:3
10
作者 路浩 梅莉 +2 位作者 张英 达剑森 刘宗平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第5期9-12,共4页
为了观察铅、镉及其联合对新生大鼠大脑皮质神经细胞的形态学影响,本试验通过对原代培养的新生大鼠大脑皮质神经细胞经提取、纯化和鉴定后,分九组进行单独或联合染毒,染毒时间为12 h,显微镜观察神经细胞形态并测量其胞体短直径和突起长... 为了观察铅、镉及其联合对新生大鼠大脑皮质神经细胞的形态学影响,本试验通过对原代培养的新生大鼠大脑皮质神经细胞经提取、纯化和鉴定后,分九组进行单独或联合染毒,染毒时间为12 h,显微镜观察神经细胞形态并测量其胞体短直径和突起长度的变化。结果显示,与对照组相比,各试验组神经细胞密度降低,神经网络减少;各试验组神经细胞胞体短直径显著减小(P<0.05),突起长度显著变短(P<0.05);随铅、镉单剂量作用浓度的增加,神经细胞胞体短直径和突起长度有减小趋势,但组间差异不显著(P>0.05)。与相应铅、镉单独染毒组比较,各铅镉联合染毒组神经细胞胞体短直径减小、突起长度变短更加明显,部分组间差异显著(P<0.05)。结果表明,铅、镉作用浓度与神经细胞形态改变存在明显的剂量-效应关系,铅镉联合表现协同毒性效应。 展开更多
关键词 大脑皮质神经细胞 铅镉联合 形态学 协同效应 大鼠
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银杏内酯B对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响 被引量:8
11
作者 蔡卫斌 臧颖 余明华 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期256-260,共5页
【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元,用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况;用硫代巴... 【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元,用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化的程度;并同时检测了细胞内抗氧化酶的活性。【结果】银杏内酯B(10~100μmol/L)能剂量依赖性地抑制谷氨酸(0.8 mmol/L)引起的细胞存活率下降和细胞损伤,同时提高细胞内抗氧化酶活性和减轻细胞脂质过氧化。【结论】银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能提高神经细胞内抗氧化酶活性和清除氧自由基有关。 展开更多
关键词 银杏内酯B 谷氨酸 大鼠 大脑皮质神经 氧化损伤 氧自由基
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c-fos反义寡聚核苷酸对亚硒酸钠引起的皮质神经元凋亡的保护作用(英文) 被引量:2
12
作者 肖荣 窦岩 +3 位作者 赵嘉惠 王瑞 闫秀珍 乔健天 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期93-100,共8页
本文利用 c-fos ASO(反义链全部硫代磷酸化修饰 )技术阻断 c-fos的表达 ,观察此项处理对亚硒酸钠在体外培养皮质神经细胞致凋亡作用和相关基因表达改变的影响。结果显示 :( 1) c-fos ASO可阻断亚硒酸钠的致凋亡作用 ,且有一定的剂量和... 本文利用 c-fos ASO(反义链全部硫代磷酸化修饰 )技术阻断 c-fos的表达 ,观察此项处理对亚硒酸钠在体外培养皮质神经细胞致凋亡作用和相关基因表达改变的影响。结果显示 :( 1) c-fos ASO可阻断亚硒酸钠的致凋亡作用 ,且有一定的剂量和时间依赖性 ;用琼脂糖凝胶电泳分析由各个时间点提取的 DNA片段 ,与对照组比较 ,c-fos ASO能明显阻断亚硒酸钠诱导的典型的 DNA梯型 ;用流式细胞仪检测得到的 DNA含量直方图也显示 ,在 c-fos ASO处理后 ,与对照组比较 ,亚硒酸钠引起的亚二倍体峰变小 ;( 2 )用 RT-PCR法检测表明 ,在用 c-fos ASO和亚硒酸钠处理皮质神经细胞后 ,不仅阻断了 c-fos表达的上调 ,对其它几种基因表达的改变也有不同的影响 ,与对照组比较 ,c-fosm RNA在各个时间点 ( 0 .5、1、2、4和 2 4h)不再上升 ,bcl-2 m RNA则不再下降 ,bax m RNA和 ACh E m RNA都不再上升 ;唯一不同的是 ,p5 3m RNA的变化趋势则与未经 c-fos ASO预处理时基本相同 ,在多数时间点两组 p-5 3m RNA水平之间无显著性差异 ( P>0 .0 5 ) ,说明此基因的表达基本不受 c-fos ASO作用的影响。上述结果提示 ,亚硒酸钠诱导的神经元凋亡可能是一组级联式基因表达更变的结果 ,c-fos是其中的一个组成成员 ,它的表达改变被阻断后 ,处于它下游? 展开更多
关键词 c-fos反义寡聚核苷酸 亚硒酸钠 皮质神经元凋亡 保护作用
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用快速自动比色显微分析法探讨巨噬细胞条件性培养基对小脑皮质神经元生存的影响 被引量:5
13
作者 郭畹华 周明华 《中山医科大学学报》 CSCD 1990年第3期9-14,2,共6页
用快速自动比色显微分析法检测巨噬细胞条件性培养基(MΦCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MΦCM有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MΦCM浓度10μl/孔为显著(P<0... 用快速自动比色显微分析法检测巨噬细胞条件性培养基(MΦCM)对体外培养的生后7天SD大鼠小脑皮质神经元的作用。实验结果表明,MΦCM有支持神经元生存及增强其活性的作用。此作用以细胞密度1×10~5/孔,MΦCM浓度10μl/孔为显著(P<0.05)。不同分子量的MΦCM对神经元的作用亦有不同,>10kdaltons(kDa)组分比<10KDa的作用强。 展开更多
关键词 巨噬细胞 小脑 皮质神经 培养
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miR-150-5p通过调控DDR1表达对缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响 被引量:3
14
作者 王立侠 韩金芬 马明明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1428-1433,共6页
目的:探讨miR-150-5p对缺氧缺糖(OGD)诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响及分子机制。方法:设置OGD组、正常对照(Con)组、miR-NC组、miR-150-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-150-5p组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-150-5p组、OGD+si-NC组、OGD... 目的:探讨miR-150-5p对缺氧缺糖(OGD)诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的影响及分子机制。方法:设置OGD组、正常对照(Con)组、miR-NC组、miR-150-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-150-5p组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-150-5p组、OGD+si-NC组、OGD+si-DDR1组、OGD+miR-150-5p+pcDNA组、OGD+miR-150-5p+pcDNA-DDR1组。RT-qPCR检测miR-150-5p和DDR1 mRNA表达;Western blot检测盘状结构域受体1(DDR1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;MTT检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH释放率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证miR-150-5p和DDR1靶向关系。结果:OGD诱导的大鼠皮质神经细胞中miR-150-5p呈低表达,DDR1呈高表达,细胞存活率降低,LDH释放率升高,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高(P<0.05)。过表达miR-150-5p或抑制DDR1表达可促进细胞存活,抑制LDH释放和细胞凋亡。miR-150-5p靶向调控DDR1,DDR1过表达逆转miR-150-5p过表达对OGD诱导的大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用。结论:过表达miR-150-5p通过下调DDR1保护缺氧缺糖诱导的大鼠皮质神经细胞损伤。 展开更多
关键词 miR-150-5p DDR1 缺氧缺糖 大脑皮质神经细胞 凋亡
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盐酸右美托咪定对丙泊酚诱导原代培养皮质神经元凋亡的影响 被引量:3
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作者 李建立 郭洪霞 +2 位作者 梁巍 容俊芳 刘锐 《医药导报》 CAS 2016年第11期1164-1168,共5页
目的探讨盐酸右美托咪定对丙泊酚诱导原代培养皮质神经元凋亡的影响及其机制。方法将原代培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为溶剂对照组(给予等体积20%脂肪乳)、丙泊酚组(丙泊酚终浓度500μmol·L^(-1))和盐酸右美托咪定+丙泊酚组(盐... 目的探讨盐酸右美托咪定对丙泊酚诱导原代培养皮质神经元凋亡的影响及其机制。方法将原代培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为溶剂对照组(给予等体积20%脂肪乳)、丙泊酚组(丙泊酚终浓度500μmol·L^(-1))和盐酸右美托咪定+丙泊酚组(盐酸右美托咪定终浓度分别为0.001,0.01,0.1,1μmol·L^(-1),丙泊酚终浓度500μmol·L^(-1)),药物处理12 h后,噻唑蓝(MTT)法检测神经元存活率,光学显微镜观察神经元形态,Hoechst33258核染色法检测神经元凋亡率,罗丹明染色检测神经元线粒体膜电位。结果与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0.05)。与丙泊酚组比较,盐酸右美托咪定各剂量组神经元存活率升高(P<0.01),作用呈剂量依赖性。与溶剂对照组比较,光镜下丙泊酚组神经元数量明显减少,胞体立体感消失,细胞轮廓不清,神经元轴突断裂。与丙泊酚组比较,盐酸右美托咪定各剂量组神经元形态学损伤明显改善。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著上升(P<0.01),线粒体膜电位显著下降(P<0.01)。与丙泊酚组比较,盐酸右美托咪定各剂量组神经元凋亡率显著下降(P<0.01),线粒体膜电位显著上升(P<0.01)。结论盐酸右美托咪定可通过抑制神经元线粒体膜电位下降,减轻丙泊酚所致原代培养皮质神经元凋亡。 展开更多
关键词 右美托咪定 盐酸 丙泊酚 凋亡 皮质神经 原代培养 线粒体膜电位
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在大脑胚胎脑皮质神经细胞Dlx2基因表达的影响 被引量:1
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作者 尹娜 沙哑哈提.别尔克哈之 +4 位作者 李艳 李卉 罗燕 杨新玲 李惠武 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期81-85,共5页
目的:观察KCl刺激培养的大鼠E17脑皮质神经细胞后不同时间点Dlx2、Arx、Rbl基因的表达,探讨Dlx2、Arx、Rbl的表达的变化。方法:原代细胞培养获取胎龄E17大鼠脑皮质神经细胞,采用反转录.聚合酶链反应(reverse transcription polyme... 目的:观察KCl刺激培养的大鼠E17脑皮质神经细胞后不同时间点Dlx2、Arx、Rbl基因的表达,探讨Dlx2、Arx、Rbl的表达的变化。方法:原代细胞培养获取胎龄E17大鼠脑皮质神经细胞,采用反转录.聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测Dlx2、Arx、Rbl在经KCl刺激0.5~24h后的表达变化情况。结果:RT—PCR结果显示KCl诱导组不同时间点神经细胞中RblmRNA表达在0.5~6h时呈现递增的趋势,而在12hmRNA表达明显大幅度降低,24h又出现上升;Dlx2随着KCl的诱导表现出表达的一个长时程增强的过程,其mRNA表达随着时间的变化而增多,并在24h达到表达的高峰;ArxmRNA的表达则出现增强趋势,持续24h,但此时略有下降。结论:经KCl刺激后Dlx2mRNA表达升高对胚胎期神经细胞的存活功能可能具有重要作用。 展开更多
关键词 Dlx2 ARX RB1 KCL 皮质神经细胞培养
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SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制 被引量:1
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作者 张志鑫 崔应麟 +2 位作者 李彦杰 任锟 邢若星 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第13期1381-1386,共6页
目的探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制。方法分离培养10只SD怀孕大鼠(190~230 g,胎龄16 d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定。建立缺氧... 目的探讨抑制脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制。方法分离培养10只SD怀孕大鼠(190~230 g,胎龄16 d)胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定。建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,q RT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 m RNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达。Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元。结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞。缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达(P<0.01),RNA干扰抑制SYK表达后caspase-3活性(P<0.05)和细胞凋亡(P<0.01)均显著降低,但是Fra-1 m RNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达量明显上升。用RNA干扰技术同时抑制SYK和Fra-1后,caspase-3活性(P<0.01)显著上升但Bcl-2蛋白表达(P<0.01)显著降低。结论 Fra-1介导了SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的神经元凋亡的调节,为脑卒中所致的神经元缺血性损伤的治疗提供了新的靶点。 展开更多
关键词 SYK Fra-1 缺氧/缺糖损伤 大脑皮质神经 凋亡
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大鼠大脑皮质神经细胞氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的抑制作用 被引量:4
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作者 张磊 李阳 +5 位作者 胡玉奇 许晖 朱超 王旭 赵冬 贺昕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期590-597,共8页
目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛... 目的 观察大脑皮质神经元氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后自噬对凋亡的影响。方法 取18只出生在24 h内的新生SD大鼠,采用机械分离胰蛋白酶消化法提取大脑皮质神经元培养7 d后,建立OGD/R模型,随机分为3组,正常对照组、OGD/R组、OGD/R联合巴弗洛霉素A1(BafA1)组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测细胞活力,用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,采用反转录PCR法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62及胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA表达,Western blot法检测LC3、 P62及caspase-3的蛋白表达。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒转染神经细胞检测自噬荧光强度,透射电子显微镜观察自噬体的超微结构变化。结果 与对照组相比,OGD/R组神经细胞活力明显降低,LDH释放水平明显升高,凋亡增加;LC3、 P62、 caspase-3的mRNA和蛋白表达增强;RFP荧光强度增加,自噬体增加且自噬溶酶体更加聚集,加用自噬晚期抑制剂BafA1后RFP荧光强度显著降低。结论 OGD/R诱导了神经元细胞的自噬和凋亡,抑制自噬后加重了神经细胞的损伤和凋亡。 展开更多
关键词 皮质神经元细胞 氧糖剥夺再复氧(OGD/R) 细胞凋亡 自噬 巴弗洛霉素A1(BafA1)
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Sertoli细胞对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用 被引量:6
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作者 上官芳芳 史小林 《首都医科大学学报》 CAS 2003年第3期247-250,共4页
为研究睾丸支持细胞 (Sertolicells,SCs)对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用 ,采用 2种实验方法 :1 )将Sertoli细胞与大脑皮质神经元共培养 ;2 )在神经元培养基内添加Sertoli细胞条件培养基 (Sertolipreconditionedmedium ,SCM)。结... 为研究睾丸支持细胞 (Sertolicells,SCs)对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用 ,采用 2种实验方法 :1 )将Sertoli细胞与大脑皮质神经元共培养 ;2 )在神经元培养基内添加Sertoli细胞条件培养基 (Sertolipreconditionedmedium ,SCM)。结果 :在培养早期SCs能显著促进大脑皮质神经元的贴壁 ,对神经元胞体及突起的生长也有显著的效果 ,培养晚期SCs组的神经元生长状况也显著优于DMEM培养组和SCM组 ,说明SCs对神经元有显著的促生长作用 ; 展开更多
关键词 SERTOLI细胞 体外培养 大脑皮质神经 营养作用 睾丸支持细胞 SCS 细胞培养
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高碘对大鼠大脑皮质神经细胞凋亡及机制的研究 被引量:1
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作者 李红 肖建英 岳丹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-189,共3页
目的探讨高碘对大鼠皮质神经细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将SD大鼠随机分为:对照组、高碘Ⅰ组、高碘Ⅱ组,分别以含碘量为5、5000、10000μg/L的自来水及普通饲料喂养6个月断头处死,观察皮质神经元形态结构的改变,应用流式细胞仪检... 目的探讨高碘对大鼠皮质神经细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将SD大鼠随机分为:对照组、高碘Ⅰ组、高碘Ⅱ组,分别以含碘量为5、5000、10000μg/L的自来水及普通饲料喂养6个月断头处死,观察皮质神经元形态结构的改变,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,采用比色法检测大鼠皮质神经细胞一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活性,RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA的表达。结果流式细胞仪检测实验组引起大鼠皮质神经细胞周期改变,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01),同时实验组NOS活性及NO含量显著降低,但实验组之间无明显差异(P>0.05),皮质组织bcl-2mRNA表达下降,bax mRNA表达升高。结论长期高碘可诱导大鼠皮质神经细胞凋亡,其机制可能与NOS活性及NO含量降低以及bax基因过度表达、bcl-2基因表达下调有关。 展开更多
关键词 高碘 大鼠 皮质神经细胞 细胞凋亡
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