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家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立
被引量：
1
1
作者
胡佳佳
恽时锋
+2 位作者
王芳
范志宇
胡波
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第2期28-32,共5页
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PC...
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
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关键词
兔
支气管败血波氏
杆菌
百日咳
杆菌
粘附
素
(
prn
)
原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立
被引量：
1
1
作者
胡佳佳
恽时锋
王芳
范志宇
胡波
机构
江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病免疫与诊断重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心
南京军区南京总医院比较医学科
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2012年第2期28-32,共5页
基金
现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(nycytx-44)
文摘
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法。结果成功克隆了prn全基因序列,并在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性。应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1∶40。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
关键词
兔
支气管败血波氏
杆菌
百日咳
杆菌
粘附
素
(
prn
)
原核表达
间接ELISA
Keywords
Rabbits
Bordetella bronchiseptica
pertactin（
prn
）
Prokaryotic expression
Indirect ELISA
分类号
R332 [医药卫生—人体生理学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立
胡佳佳
恽时锋
王芳
范志宇
胡波
《中国比较医学杂志》
CAS
2012
1
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