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基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体
1
作者
张晟
黎海燕
+3 位作者
廉梅
刘宇
肖东
林晓琳
《动物医学进展》
北大核心
2019年第8期29-33,共5页
基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠...
基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。
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关键词
白蛋白启动子
大鼠尿激酶
桡足类绿色荧光
蛋白
四环素调控系统
慢病毒载体
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职称材料
肝特异性表达HCV5′NCR调控荧光素酶质粒的构建及表达
被引量：
3
2
作者
王小红
王升启
+2 位作者
管伟
毛秉智
nic.bmi.ac.cn
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第3期318-321,共4页
小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调...
小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价
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关键词
HCV
小鼠
白蛋白启动子
/增强子
pA1b-HCV
药物
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职称材料
题名
基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体
1
作者
张晟
黎海燕
廉梅
刘宇
肖东
林晓琳
机构
南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室
南方医科大学基础医学院肿瘤研究所
南方医科大学实验动物中心
出处
《动物医学进展》
北大核心
2019年第8期29-33,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81600488)
广东省科技计划项目(2017A010105017)
文摘
基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。
关键词
白蛋白启动子
大鼠尿激酶
桡足类绿色荧光
蛋白
四环素调控系统
慢病毒载体
Keywords
albumin(Alb) promoter
ruPA(rat urokinase-type plasminogen activator)
copGFP
Tet-On system
lentivirus vector
分类号
S858.91 [农业科学—临床兽医学]
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
肝特异性表达HCV5′NCR调控荧光素酶质粒的构建及表达
被引量：
3
2
作者
王小红
王升启
管伟
毛秉智
nic.bmi.ac.cn
机构
军事医学科学院放射医学研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000年第3期318-321,共4页
基金
国家" 8 6 3" !(1 0 2 - 0 8- 0 4- 0 1 )
军队"九五"重点课题基金资助!(96 Z0 0 7)
文摘
小鼠白蛋白是肝组织特异性表达的蛋白 ,这种特异性是由白蛋白启动子所介导的 .以2 2 35A- 1质粒为模板 ,通过 PCR扩增获得小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段 ,用小鼠白蛋白启动子 /增强子基因片段取代 p HCV- neo4质粒 (含 HCV5′NCR调控荧光素酶基因 )的 CMV启动子 ,构建了一种白蛋白启动子启动转录的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 (p A1 b- HCV) .该质粒能在小鼠肝癌细胞中表达且较小鼠其它癌细胞中表达水平明显增高 ,表明成功地构建了肝特异性表达的 HCV5′NCR调控荧光素酶表达质粒 .该研究为建立肝特异性表达的 HCV5′NCR转基因小鼠模型奠定了基础 ,对评价
关键词
HCV
小鼠
白蛋白启动子
/增强子
pA1b-HCV
药物
Keywords
HCV
Luciferase
Mouse albumin/enhancer
pA1b HCV
分类号
R512.630.5 [医药卫生—内科学]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体
张晟
黎海燕
廉梅
刘宇
肖东
林晓琳
《动物医学进展》
北大核心
2019
0
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职称材料
2
肝特异性表达HCV5′NCR调控荧光素酶质粒的构建及表达
王小红
王升启
管伟
毛秉智
nic.bmi.ac.cn
《中国生物化学与分子生物学报》
CSCD
2000
3
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职称材料
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