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抗人白介素-17RA单克隆抗体的制备及活性检测
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作者 徐真真 孙春昀 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期428-433,共6页
目的制备具有中和人白介素-17RA(h IL-17RA)免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性。方法通过基因工程技术制备抗h IL-17RA的单克隆抗体。采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交... 目的制备具有中和人白介素-17RA(h IL-17RA)免疫活性的单克隆抗体,并探讨其生物学活性。方法通过基因工程技术制备抗h IL-17RA的单克隆抗体。采用OctetRED系统检测其亲和力,ELISA、Western blot和流式细胞术分析抗体的结合作用和种属交叉反应,人包皮成纤维细胞-1上细胞因子分泌实验检测抗体的中和活性。结果抗h IL-17RA单克隆抗体亲和力常数KD<1.0×10^(-12)mol/L,并与其他物种有一定的交叉结合反应,它能结合白介素(IL)-17RA并有效阻断其与配体的结合,抑制下游相关细胞因子IL-6、IL-8和人CXC趋化因子配体1的分泌。结论成功制备1株抗h IL-17RA的中和抗体,为IL-17RA相关疾病通路的研究提供了工具,也为IL-17RA靶点药物的开发奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 白介素-17RA 白介素-17A 白介素-17F 抗体 人包皮成纤维细胞-1
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单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证
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作者 董标 梁月琴 +1 位作者 王杰 董方霆 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期125-127,共3页
建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素... 建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体-白介素2融合蛋白 结构确证 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 肽图 毛细管等电聚焦
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IL-17单克隆抗体对肺纤维化大鼠的保护作用及部分机制研究 被引量:12
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作者 刘理静 钱红 +3 位作者 尹辉明 张平 王在岩 肖华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1586-1592,共7页
目的探讨白介素(IL)-17单克隆抗体(m Ab)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用及相关机制。方法将♂SD大鼠75只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、非特异性Ig G组、IL-17 m Ab组,各组15只,后3组大鼠予以博莱霉素A5气管内注入构建... 目的探讨白介素(IL)-17单克隆抗体(m Ab)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的保护作用及相关机制。方法将♂SD大鼠75只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、非特异性Ig G组、IL-17 m Ab组,各组15只,后3组大鼠予以博莱霉素A5气管内注入构建肺纤维化模型,而假手术组给予等量生理盐水气管内注入。后2组于d 7、14、21分别给予非特异性IgG、IL-17 mAb尾静脉注射,其余3组给予等量生理盐水尾静脉注射。所有大鼠d 28处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western blot分析肺组织胞核核因子-κB(NF-κB)p65以及细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)蛋白表达情况,荧光实时定量PCR检测肺组织ColⅠ、ColⅢmRNA表达水平,分离血清,采用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PIIINP)浓度。结果 IL-17m Ab组肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组及非特异性Ig G组(P<0.01)。模型组和非特异性Ig G组肺组织IL-17、IL-6、TNF-α含量、胞核NF-κB p65蛋白表达、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达以及血清PICP、PIIINP浓度较正常对照组及假手术组明显升高(P<0.01)。经IL-17 m Ab处理后,上述指标相比模型组和非特异性IgG组明显降低(P<0.01)。但非特异性Ig G组与模型组以及假手术组与正常对照组上述指标比较无差异(P>0.05)。结论 IL-17 mAb通过下调NF-κB表达,抑制肺组织炎症反应及减少胶原蛋白合成,对肺纤维化大鼠产生保护作用。 展开更多
关键词 白介素-17单克隆抗体 肺纤维化 炎症反应 白介素-6 肿瘤坏死因子-α 核因子-ΚB Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原
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IL-17单克隆抗体对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制 被引量:5
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作者 钱红 刘理静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期509-512,共4页
目的探讨IL-17单克隆抗体(mAb)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用及可能机制。方法 90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(n=15)、模型组(n=15)、同型对照组(n=25)及IL-17 mAb组(n=25)。模型组、同型对照组、IL-17mAb组小鼠腹腔接种0.1 m... 目的探讨IL-17单克隆抗体(mAb)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠的保护作用及可能机制。方法 90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(n=15)、模型组(n=15)、同型对照组(n=25)及IL-17 mAb组(n=25)。模型组、同型对照组、IL-17mAb组小鼠腹腔接种0.1 mL内含柯萨奇病毒B3(CVB3)的Eagle液建立VMC模型,对照组仅注射Eagle液。接种后第3、5天,同型对照组腹腔注射100μg非特异性IgG,IL-17抗体组腹腔注射100μg IL-17 mAb。第7天,每组处死5只小鼠,取心脏,采用Reed-Muench法测定病毒滴度,实时荧光定量PCR检测CVB3 mRNA拷贝数。第14天称体质量后处死全部小鼠,比较各组死亡率;分离血清,ELISA测定血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度;称心脏质量(HM),计算心脏指数(HM/BM);HE染色计算心肌病理积分,Western blot法测定心脏核因子-κB(NF-κB)p65表达,ELISA检测心脏IL-6、TNF-α含量。结果模型组心脏指数、血清cTnI浓度、NF-κB p65表达水平及心脏IL-6、TNF-α含量高于对照组(P<0.01)。IL-17 mAb组死亡率、心脏指数、血清cTnI浓度、心肌病理积分、病毒滴度、CVB3 mRNA拷贝数、NF-κB p65表达水平及心肌IL-6、TNF-α含量较模型组及同型对照组减少(P<0.05或P<0.01)。同型对照组上述指标与模型组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论 IL-17 mAb能够减轻VMC小鼠心肌损伤,其机制可能与抑制病毒复制及NF-κB激活有关。 展开更多
关键词 IL-17单克隆抗体 病毒性心肌炎 核因子-KB 白介素-6 肿瘤坏死因子-A
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抗白细胞介素6单克隆抗体抑制小鼠心脏移植急性排斥反应及其机制 被引量:2
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作者 雷钧 陈知水 +4 位作者 方路 刘天德 袁荣发 王军 邵江华 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期275-280,共6页
目的观察抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6monoclonal antibody,anti-IL-6mAb)对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植模... 目的观察抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6monoclonal antibody,anti-IL-6mAb)对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用,并探讨其可能作用机制。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型。实验动物随机分为同系移植组、移植模型组、移植对照组(注射rat-IgG)和移植治疗组(注射anti-IL-17mAb或anti-IL-6mAb)。观察各组移植心脏存活时间并检测病理组织学改变;Real-time PCR检测各组移植心脏中细胞因子IL-17、干扰素-γ(IFN-γ)及Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测各组受鼠脾脏CD4+、CD8+T细胞中IL-17、IFN-γ的表达水平。结果①anti-IL-6mAb、anti-IL-17mAb输注均可显著抑制小鼠急性排斥反应的发生,移植心脏存活时间分别延长至(22.0±2.3)d、(13.0±1.8)d,anti-IL-6mAb组抑制排斥反应发生的效果更加显著。组织病理学结果显示anti-IL-6mAb组排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);②anti-IL-6mAb组移植心脏中IL-17、IFN-γ和RORγt mRNA的转录水平较rat-IgG对照组及移植模型组显著下降,anti-IL-17mAb输注可部分下调IFN-γmRNA的转录水平;③anti-IL-6mAb组受鼠脾脏CD4+及CD8+T细胞中IFN-γ+的比例均有不同程度的下降,且CD4+IFN-γ+T细胞较CD8+IFN-γ+T细胞下降更为明显,同时CD4+IL-17+T(Th17)细胞的比例在anti-IL-6mAb组中亦明显下降。结论 anti-IL-6mAb可有效抑制急性排斥反应小鼠体内Th17和Th1细胞的活化,并延长同种异体心脏移植物的存活时间。 展开更多
关键词 急性排斥反应 心脏移植 抗白细胞介素6单克隆抗体 白细胞介素-17 RORyt 干扰素-γ
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白介素10抑制幼稚T细胞分化为辅助性T细胞17的研究 被引量:1
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作者 韩晶晶 周骏 +1 位作者 王婷 曲学彬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期423-427,共5页
目的:研究白介素10(interleukin,IL-10)在辅助性T细胞17(helper T cell,Th17)体外诱导分化中的作用。方法:分选小鼠脾脏CD4+幼稚T(nave T)细胞,在经典的Th17诱导条件中加入不同浓度的IL-10中和抗体(0、1、5、10μg/ml NA-IL-10),流式... 目的:研究白介素10(interleukin,IL-10)在辅助性T细胞17(helper T cell,Th17)体外诱导分化中的作用。方法:分选小鼠脾脏CD4+幼稚T(nave T)细胞,在经典的Th17诱导条件中加入不同浓度的IL-10中和抗体(0、1、5、10μg/ml NA-IL-10),流式细胞术检测各组CD4+IL-17+细胞的生成比率,ELISA法检测各组培养上清中Th17特异细胞因子IL-17A和IL-17F的浓度,qRT-PCR及Western Blot检测各组细胞中表达转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t,Rorγt)的表达水平。结果:在经典的诱导CD4+nave T细胞分化为Th17的过程中,IL-10的浓度随诱导天数的增加而逐渐上升。加入NA-IL-10后,IL-17+细胞的诱导比例随NA-IL-10浓度的增加而逐渐上升,在10μg/ml的NA-IL-10条件下,诱导生成的IL-17+细胞可达22.1%±4.5%,与无NA-IL-10组8.1%±1.9%相比差异有统计学意义(P<0.05)。10μg/ml NA-IL-10组IL-17A和IL-17F的浓度以及Rorγt的表达水平均明显高于无NA-IL-10组(P<0.05)。结论:降低培养条件中IL-10的水平能够有效地促进Th17的体外诱导分化,也进一步验证了IL-10对Th17分化的抑制作用。 展开更多
关键词 辅助性T细胞17 白介素-10 幼稚T细胞 中和抗体
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