过表达miR-34a脂肪干细胞外泌体调控增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的研究 被引量：11

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作者 肖向阳 郑德义 +1 位作者 王宝云 李自力 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第6期887-893,共7页

目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)过表达miR-34a后释放的外泌体对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法从人脂肪组织中分离原代ADSCs,流式细胞术鉴定其表面标记分子,茜素红和碱性磷酸酶染色观察其成骨分化能力;采用miR-34a过表... 目的探讨脂肪干细胞(ADSCs)过表达miR-34a后释放的外泌体对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法从人脂肪组织中分离原代ADSCs,流式细胞术鉴定其表面标记分子,茜素红和碱性磷酸酶染色观察其成骨分化能力;采用miR-34a过表达慢病毒感染ADSCs,获得miR-34a过表达的ADSCs(ADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs(ADSCs/miR-NC),然后提取各组细胞上清液中的外泌体,获得ADSCs外泌体(ExoADSCs)、miR-34a过表达的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-34a)和阴性对照的ADSCs外泌体(ExoADSCs/miR-NC),利用透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD81和CD63;再将得到的外泌体分别与HSF共培养,分为对照组(HSF+PBS)、ExoADSCs处理组(HSF+ExoADSCs)、ExoADSCs/miR-NC处理组(HSF+ExoADSCs/miR-NC)和ExoADSCs/miR-34a处理组(HSF+ExoADSCs/miR-34a)。采用qRT-PCR法检测各组ADSCs及外泌体中miR-34a的表达水平;MTT法检测各组HSF细胞的增殖能力;流式细胞术检测各组HSF细胞的凋亡水平。Western blot法检测各组HSF细胞凋亡相关蛋白(cleaved-Caspase-3、Bax和Bcl-2)、纤维化相关蛋白(COLⅠ、COLⅢ)及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白(TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3)的表达水平。结果成功分离得到ADSCs,并具有成骨分化能力;透射电镜可见直径在50~100 nm呈双层膜结构的圆形或椭圆形囊泡状小体,Western blot显示外泌体标志性蛋白CD81和CD63阳性表达;miR-34a过表达可增加ADSCs及其外泌体中miR-34a表达水平;与ExoADSCs处理组和ExoADSCs/miR-NC处理组比较,ExoADSCs/miR-34a干预可抑制HSF增殖(P <0. 05),提高其凋亡率(P <0. 05),并上调cleavedCaspase-3和Bax蛋白表达水平(P <0. 05),并下调Bcl-2、COLⅠ、COLⅢ、p-Smad2、p-Smad3和TGF-β1等蛋白表达水平(P <0. 05)。结论过表达miR-34a的ADSCs外泌体可能通过下调TGF-β/Smad信号通路抑制HSF细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 外泌体 MIR-34A 人增生性瘢痕成纤维细胞 增殖凋亡

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松萝酸对增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为及JNK/MAPK信号通路的影响 被引量：6

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作者 王晓妮 郭涛 +1 位作者 罗启云 关立锋 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1445-1451,共7页

目的:探讨松萝酸对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并阐明其对c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期HSFBs分为对照组、10μmol·L^(-1)松萝酸组、20μ... 目的:探讨松萝酸对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并阐明其对c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期HSFBs分为对照组、10μmol·L^(-1)松萝酸组、20μmol·L^(-1)松萝酸组和50μmol·L^(-1)松萝酸组,除对照组外,其他各组细胞给予相应浓度松萝酸处理。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭和迁移能力,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化JNK(p-JNK)、JNK、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果:MTT法和流式细胞术检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率均降低(P<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率均降低(P<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05)。Westernblotting法检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:松萝酸可抑制HSFBs增殖、侵袭和迁移,诱导HSFBs凋亡,并激活JNK/MAPK信号通路。 展开更多

关键词 增生性瘢痕成纤维细胞 松萝酸 C-JUN氨基末端激酶 丝裂原活化蛋白激酶 细胞增殖 细胞凋亡

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抑制Akt信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞生长、细胞周期及凋亡的影响 被引量：9

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作者 潘学洪 王晓东 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第2期229-233,共5页

目的:研究抑制蛋白激酶B(Akt)信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞生长、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,用不同浓度的Akt信号通路抑制剂LY294002处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,计算IC50。用IC50浓度的... 目的:研究抑制蛋白激酶B(Akt)信号通路对病理性瘢痕成纤维细胞生长、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,用不同浓度的Akt信号通路抑制剂LY294002处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,计算IC50。用IC50浓度的LY294002处理病理性瘢痕成纤维细胞后,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、Akt、磷酸化的Akt(p-Akt)水平。结果:不同浓度的LY294002作用后细胞在570 nm处的吸光度值(A值)降低(P<0.001),IC50为30 mg/L。30 mg/L LY294002作用后细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.001)。30 mg/L LY294002作用后细胞凋亡率高于0 mg/L作用组,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达水平高于0 mg/L作用组,而p-Akt表达水平明显低于0 mg/L作用组(P<0.001)。结论:抑制Akt信号通路能够抑制病理性瘢痕成纤维细胞生长,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,促进细胞中Caspase-3、Caspase-9活化。 展开更多

关键词 AKT信号通路 病理性瘢痕成纤维细胞 细胞周期 凋亡

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慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响 被引量：1

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作者 柯晓苹 张启国 +1 位作者 林维嘉 蔡良奇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1508-1513,共6页

目的:探讨慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法:体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将细胞分成对照(control)组、阴性对照慢病毒感染(vector)组和pcDNA3.1-DKK3慢病毒感染(DKK3)组,RT-qPCR和Western blot... 目的:探讨慢病毒介导的DKK3过表达对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法:体外分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将细胞分成对照(control)组、阴性对照慢病毒感染(vector)组和pcDNA3.1-DKK3慢病毒感染(DKK3)组,RT-qPCR和Western blot检测过表达效果,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型caspase-9(cleaved caspase-9)、Ⅱ型胶原(COL II)、Ⅰ型胶原(COL I)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)及胞质、线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白表达变化。结果:pcDNA3.1-DKK3感染后增生性瘢痕成纤维细胞中DKK3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。DKK3组增生性瘢痕成纤维细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白水平升高,COL II和COL I蛋白水平降低,与vector细胞比较,胞质中cytochrome C蛋白水平升高,线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论:慢病毒介导的DKK3过表达能够诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡,并减少细胞合成胶原蛋白。 展开更多

关键词 DKK3基因 增生性瘢痕成纤维细胞 细胞凋亡 胶原蛋白 细胞色素C

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程序性细胞死亡因子4过表达对增生性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1

5

作者 潘学洪 李爱武 李新华 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2019年第5期703-707,共5页

目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)过表达对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法:分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,分别转染pEGFP-PDCD4、pEGFP,以未转染细胞为空白对照,采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中PDCD4水平确定... 目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)过表达对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡的影响。方法:分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,分别转染pEGFP-PDCD4、pEGFP,以未转染细胞为空白对照,采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中PDCD4水平确定转染效果。MTT法检测3组细胞增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot法检测PTEN、Bax、Bcl-2表达水平。结果:与空白对照组和pEGFP组相比,pEGFP-PDCD4组细胞中PDCD4表达水平升高;细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,同时细胞中PTEN、Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平下降(P<0.05)。结论:过表达PDCD4可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调细胞中PTEN、Bax的表达,下调Bcl-2的表达有关。 展开更多

关键词 程序性细胞死亡因子4 增生性瘢痕成纤维细胞 增殖 凋亡

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阿魏酸钠对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

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作者 王畅 陈炜 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2021年第1期97-102,共6页

探讨阿魏酸钠(SF)对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb)增殖及胶原合成的影响。体外培养HSFb,MTT法计算SF的LC50及最佳药物时间后,分为空白对照组、SF干预组(高、中、低浓度分别为0.3、0.03、0.003 mg/mL),培养72 h后,在倒置显微镜和透射电镜... 探讨阿魏酸钠(SF)对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFb)增殖及胶原合成的影响。体外培养HSFb,MTT法计算SF的LC50及最佳药物时间后,分为空白对照组、SF干预组(高、中、低浓度分别为0.3、0.03、0.003 mg/mL),培养72 h后,在倒置显微镜和透射电镜下观察HSFb微观形态学变化;MTT法、Western blot法检测SF对HSFb细胞增殖和I、Ⅲ胶原蛋白表达的影响。结果显示,与空白对照组相比,倒置显微镜下HSFb细胞明显减少,电镜下见核固缩,线粒体轻度肿胀,粗面内质网扩张呈囊泡状,有较多空泡、自噬的产生;MTT法显示各浓度SF干预组对HSFb增殖均有明显抑制作用(P<0.01);Western blot法检测显示低浓度SF对I胶原蛋白表达有一定的抑制作用(P<0.05),高、中浓度SF能明显抑制HSFb的I、Ⅲ胶原蛋白的表达(P<0.01)。本研究结果表明,SF能改变HSFb的微观形态,抑制HSFb的细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。 展开更多

关键词 阿魏酸钠 增生性瘢痕成纤维细胞 增殖 胶原

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“瘢痕Ⅱ”对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用

7

作者 张素贞 张明莉 +3 位作者 戴方平 郭恩覃 陈玉林 葛绳德 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期74-77,共4页

目的：观察＂瘢痕＂对皮肤瘢痕组织中成纤维细胞增殖的影响，为该药临床应用提供依据。方法：分别取人皮肤瘢痕组织和正常人表皮组织进行原代细胞培养，加入倍比稀释的＂瘢痕Ⅱ＂，定时观察细胞形态，用ＮＡＧ酶法测定细胞增殖活性。结... 目的：观察＂瘢痕＂对皮肤瘢痕组织中成纤维细胞增殖的影响，为该药临床应用提供依据。方法：分别取人皮肤瘢痕组织和正常人表皮组织进行原代细胞培养，加入倍比稀释的＂瘢痕Ⅱ＂，定时观察细胞形态，用ＮＡＧ酶法测定细胞增殖活性。结果：＂瘢痕Ⅱ＂浓度＞０．５ｍｇ／ｍｌ时，生长的表皮细胞膜片部分脱落；成纤维细胞对＂瘢痕Ⅱ＂较敏感，加药各组成纤维细胞的形态发生了明显变化，细胞变圆、减少，药物浓度＞０．４ｍｇ／ｍｌ时，成纤维细胞全部失活；培养３ｄ时，药物浓度与表皮细胞及成纤维细胞活性Ｄ值均成负相关。结论：＂瘢痕Ⅱ＂对人皮肤瘢痕成纤维细胞和人正常表皮细胞的生长均有抑制作用，尤其对成纤维细胞生长抑制效应更为明显。 展开更多

关键词 瘢痕:成纤维细胞

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党参多糖通过PI3K/AKT信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和诱导细胞周期阻滞的实验研究 被引量：6

8

作者 田艳 朱飞 +3 位作者 宋采滢 朱秋璇 程盛荣 陈文东 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1142-1146,共5页

目的:探讨党参多糖对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期进程的影响及其分子机制。方法:四唑盐比色测定法[3-(4,5-Dimethylthazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测党参多糖对细胞存活率的影响,筛选党参多糖加药浓度,... 目的:探讨党参多糖对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期进程的影响及其分子机制。方法:四唑盐比色测定法[3-(4,5-Dimethylthazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测党参多糖对细胞存活率的影响,筛选党参多糖加药浓度,采用平板克隆实验检测瘢痕疙瘩成纤维细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期比例和细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和丝苏氨酸蛋白激酶(protein kinase B,AKT)蛋白磷酸化水平。结果:当党参多糖浓度小于80μmol/L时对瘢痕疙瘩成纤维细胞无明显毒性作用,本实验选择浓度为10、20、40μmol/L的党参多糖作为后续实验加药标准浓度;与0μmol/L组相比,10、20和40μmol/L组瘢痕疙瘩成纤维细胞克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,PCNA、Cyclin D1、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达下调,细胞凋亡率升高,PI3K和AKT磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:党参多糖能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和细胞周期进程,其分子机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 党参多糖 瘢痕疙瘩成纤维细胞 增殖 细胞周期 PI3K/AKT信号通路

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冬凌草甲素对人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞生物学行为的影响及作用机制

9

作者 宋采滢 高翔 +3 位作者 朱秋璇 程盛荣 陈文东 朱飞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第10期1706-1712,共7页

目的探讨冬凌草甲素(ORI)对人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞(HKF)的影响及作用机制。方法CCK-8法检测ORI对HKF的增殖活性的影响,实验分为对照组和实验组,细胞划痕和transwell实验检测HKF的迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免... 目的探讨冬凌草甲素(ORI)对人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞(HKF)的影响及作用机制。方法CCK-8法检测ORI对HKF的增殖活性的影响,实验分为对照组和实验组,细胞划痕和transwell实验检测HKF的迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ORI对HKF的细胞外基质形成相关mRNA和纤维连接蛋白1(FN1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、COLⅢ表达的影响。实验分为对照组、模型组和转化生长因子(TGF)-β1+ORI组,用RT-qPCR和Western blot检测ORI对HKF内TGF-β1诱导的相关mRNA和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2蛋白(p-Smad2)、p-Smad3表达的影响。结果CCK-8显示随着ORI浓度增加,HKF细胞抑制率逐渐增加;与对照组比较,实验组细胞24 h迁移面积、侵袭细胞数显著下降,FN1、α-SMA、COL I、COLⅢ表达水平显著下降(P<0.05);与对照组相比,模型组NLRP3、ASC、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,TGF-β1+ORI组NLRP3、ASC、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3表达显著下降(P<0.05)。结论ORI通过阻断TGF-β1/Smad信号通路和NLRP3介导的炎症反应,抑制HKF的增殖、迁移和侵袭能力以及细胞外基质的形成和沉积。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 人瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞 细胞外基质 NLRP3 TGF-β1 SMAD蛋白

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shRNA对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3及Ⅰ型胶原表达的影响 被引量：2

10

作者 但洋 沈为民 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期78-80,共3页

目的:构建抑制瘢痕成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFBSmad3及I型胶原(type I collagen,COL1A2)表达的影响。方法:用前期实验筛选出的1对最有效SiRNA重组构建Smad3shRNA表达质... 目的:构建抑制瘢痕成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体。研究Smad3 shRNA对KFBSmad3及I型胶原(type I collagen,COL1A2)表达的影响。方法:用前期实验筛选出的1对最有效SiRNA重组构建Smad3shRNA表达质粒。通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、COLlA2在不同时间点(0d至9d)表达的变化。结果:①重组质粒经酶切鉴定和测序、RT-PCR和Western blot的结果均证实Smad3 shRNA载体构建成功。②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72h作用最强。光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。COLlA2的mRNA与蛋白表达都明显下降(P<0.05)。结论:体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFBSmad3的表达。并使其I型胶原mRNA和蛋白水平表达出现相同的变化,提示Smad3 shRNA可能是改善皮肤创面愈合和抑制瘢痕增生一个新的治疗方向。 展开更多

关键词 瘢痕成纤维细胞 SMAD3 Ⅰ型胶原 RNA干扰 SHRNA

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PI3K/AKT/mTOR信号通路介导黄芩苷抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖 被引量：16

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作者 吴登艳 邓娅 +1 位作者 郝进 徐祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期60-67,共8页

黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（... 黄芩苷作为一种黄酮类成分可通过抑制细胞增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，但它是否对异常增生的瘢痕具有抑制增生的作用尚不清楚．本研究探讨黄芩苷抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的分子机制．采用MTT比色法检测不同浓度的黄芩苷（2．24×10^-2～2．24×10^2mmol／L）对体外培养的增生性瘢痕组织成纤维细胞增殖的抑制作用．发现浓度为2．24×10^0～2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理组明显抑制增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖（P〈0．05）．转染后的荧光素酶报告基因活性检测、RT—PCR及Western印迹分析技术检测其mRNA水平及细胞的帽状依赖翻译的表达．2．24×10^2mmol／L黄芩苷处理后，黄芩苷作用组的mRNA水平并无明显差异（P〉0．05）；增生性瘢痕成纤维细胞的帽状依赖结构的翻译明显被黄芩苷所抑制．采用Western印迹分析检测被黄芩苷干预的增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖相关的蛋白的表达；m^7GTP琼脂糖殊沉淀结合蛋白4E—BPl与elF4E的变化．发现增殖相关的蛋白mTOR、p70S6K、S6、4EBPl、elF4E及其上游的AKT表达明显下调（P〈0．05），而PTEN表达明显上调．p-AKT（Ser473）、p-mTOR（Ser2448）、p．S6（Ser235／236）、p4EBPl（Thr37／46）、p-PTEN（T380／S382／383）磷酸化水平下降（P〈0．05）．在黄芩苷作用下的增生性成纤维细胞中的游离的4E。BPl明显减少（P〈0．05），而与eIF4E结合的4E．BPl明显增加（P〈0．05）黄芩苷诱导游离的4E—BP1与eIF4E结合，从而抑制帽状依赖蛋白翻译．以上结果说明，黄芩苷可通过抑制P13K／AKT／mTOR信号通路抑制人增生性瘢痕组织成纤维细胞的增殖． 展开更多

关键词 黄芩苷 人增生性瘢痕组织成纤维细胞 增殖 P13K AKT mTOR信号通路

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TSG-6促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及其NF-κB信号通路影响的实验研究 被引量：7

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作者 王佳妮 李小静 +1 位作者 李涛 王瑜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第9期1266-1270,共5页

目的探讨TSG-6预处理对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响。方法标本人瘢痕疙瘩共3例,采用酶消化法分离纯化得到人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs),MTT法检测rh TSG-6蛋白对KFs的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检... 目的探讨TSG-6预处理对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响。方法标本人瘢痕疙瘩共3例,采用酶消化法分离纯化得到人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs),MTT法检测rh TSG-6蛋白对KFs的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术检测KFs(空白对照组)与接近IC50rh TSG-6蛋白处理组(rh TSG-6实验组)细胞凋亡情况。Western blot检测各组细胞中IκBα、p-IκBα、活化caspase3及caspase8的表达。凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测各组细胞NF-κB DNA结合活性。结果 rh TSG-6在体外对KFs增殖有明显抑制作用(IC50接近300 ng/ml),细胞凋亡率增高,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot法检测显示rh TSG-6实验组KFs中IκBα表达增加,p-IκBα表达减少,活化caspase3和caspase8表达明显增多。EMSA结果显示rh TSG-6实验组NF-κB DNA结合活性明显降低。结论TSG-6在体外可能通过抑制NF-κB信号通路活性进而抑制KFs增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 TSG-6 瘢痕疙瘩成纤维细胞 NF-ΚB 凋亡

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地西他滨抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究 被引量：2

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作者 邹崎葩 凌镜 刘朝东 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期210-215,共6页

目的探讨地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达的影响。方法 CCK8法检测不同浓度地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。Western blotting检测药物作用前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-... 目的探讨地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达的影响。方法 CCK8法检测不同浓度地西他滨对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。Western blotting检测药物作用前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad4、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)的表达;采用免疫共沉淀法及Smad4 siRNA转染研究p-Smad2/3-Smad4共聚体在瘢痕疙瘩形成中的作用,Real-time PCR检测下游转录因子的表达情况。结果 CCK8法检测结果显示:干预后48 h,随着地西他滨浓度的升高,成纤维细胞生长抑制率总体呈上升趋势,实验选择半数抑制浓度4.38μmol/L作为地西他滨对耳垂瘢痕疙瘩成纤维细胞的干预浓度。药物干预后,瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1、p-Smad2/3、COL1A1和COL3A1表达及p-Smad2/3-Smad4共聚体形成显著减少。Smad4被沉默后,瘢痕疙瘩成纤维细胞COL1A1表达减少,转录因子c-jun、runx2、irf-7 mRNA的表达下调。结论地西他滨抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,使胶原蛋白合成受限,其机制可能与抑制Smad2/3的磷酸化及p-Smad2/3-Smad4蛋白复合体的形成有关。 展开更多

关键词 地西他滨 瘢痕疙瘩成纤维细胞 TGF-Β/SMAD信号通路 p-Smad2/3-Smad4蛋白复合体

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谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响 被引量：3

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作者 吕经纬 王佳婧 胡刚 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第12期46-50,114,共6页

目的探索谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)抑制作用的研究。方法 0(对照组),3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L的谷甾醇-3-O-葡萄糖苷作用KF细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色法检测细胞增殖... 目的探索谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)抑制作用的研究。方法 0(对照组),3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L的谷甾醇-3-O-葡萄糖苷作用KF细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色法检测细胞增殖,流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中COL I、COL III含量。结果 3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低KF细胞活力(P<0.01),提高细胞增殖抑制率(P<0.01),IC50=(27.54±2.18)μg/m L。与对照组比较,12.5、25、50μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低细胞增殖率(P<0.01),提高细胞早期及晚期凋亡率(P<0.01),使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),同时还能显著的降低细胞中COL I、COL III含量(P<0.01)。结论谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的抑制KF细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时还能抑制胶原的合成。 展开更多

关键词 谷甾醇-3-O-葡萄糖苷 瘢痕疙瘩成纤维细胞 增殖 凋亡 抑制

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RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β_1刺激结缔组织生长因子表达的影响 被引量：2

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作者 赵平 李世荣 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期213-215,共3页

目的体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达基因和蛋白的影响。方法体外构建CTGF序列特异性siRNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩... 目的体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF表达基因和蛋白的影响。方法体外构建CTGF序列特异性siRNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,用10ng/ml剂量的转化生长因子(TGF-β1)刺激细胞,采用RQ-PCR和Western blot观察CTGF mRNA和蛋白水平的变化。结果经TGF-β1刺激后,重组质粒组CTGF mRNA仅为正常表达的56.6%(P<0.05),CTGF蛋白仅为正常表达的基线水平(P<0.05)。结论siRNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞CTGF基因表达和蛋白分泌,即使在TGF-β1刺激条件下,其分泌功能仍明显受抑。 展开更多

关键词 结缔组织生长因子 RNA干扰 人瘢痕疙瘩成纤维细胞 转化生长因子

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干扰SNHG7对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

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作者 任永强 李庆华 黄新建 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期1819-1824,共6页

目的:探究干扰小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:分离培养人瘢痕疙瘩成纤维(KF)细胞,将si-NC、si-SNHG7、pcDNA3.1、pcDNA3.1-SNHG7、miR-NC、miR-122分别转染至KF细胞,记为si-NC组(SN... 目的:探究干扰小核仁RNA宿主基因7(SNHG7)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:分离培养人瘢痕疙瘩成纤维(KF)细胞,将si-NC、si-SNHG7、pcDNA3.1、pcDNA3.1-SNHG7、miR-NC、miR-122分别转染至KF细胞,记为si-NC组(SNHG7阴性对照组)、si-SNHG7组(SNHG7抑制表达组)、pcDNA3.1组(SNHG7阳性对照组)、pcDNA3.1-SNHG7组(SNHG7过表达组)、miR-NC组(miR-122阳性对照组)、miR-122组(miR-122过表达组)。将si-SNHG7分别与anti-miR-NC、anti-miR-122共转染至KF细胞中,记为si-SNHG7+anti-miR-NC组(miR-122阴性对照组)、si-SNHG7+anti-miR-122组(miR-122抑制剂组)。RT-qPCR检测SNHG7和miR-122表达水平;Western blot检测细胞周期素(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测SNHG7和miR-122的靶向关系。结果:与正常皮肤组织相比,瘢痕疙瘩组织SNHG7表达显著升高,miR-122表达显著降低(P<0.05)。抑制SNHG7表达和过表达miR-122,CyclinD1、Bcl-2表达显著降低,P21、Bax表达显著升高,细胞增殖抑制率显著升高,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。SNHG7靶向调控miR-122,抑制miR-122表达逆转SNHG7对KF增殖和凋亡的作用。结论:抑制SNHG7表达可抑制KF细胞增殖,促进其凋亡,具体机制可能与miR-122有关,为瘢痕疙瘩的治疗提供新思路和新靶点。 展开更多

关键词 SNHG7 MIR-122 瘢痕疙瘩成纤维细胞 增殖 凋亡

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丹参酮ⅡA磺酸钠在低氧下对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和促纤维化因子表达的影响 被引量：14

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作者 康春福 陈斌 +5 位作者 秦泽莲 孙艳 李艳芳 于东宁 安阳 毕洪森 《中国微创外科杂志》 CSCD 北大核心 2015年第7期649-654,共6页

目的研究常氧和低氧下,丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)增殖和促纤维化因子表达的影响,探讨STS治疗瘢痕疙瘩的可能作用。方法原代培养5例KFs,将细胞分组,分别在常氧(... 目的研究常氧和低氧下,丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)增殖和促纤维化因子表达的影响,探讨STS治疗瘢痕疙瘩的可能作用。方法原代培养5例KFs,将细胞分组,分别在常氧(21%O2)和低氧(2%O2)下用不同剂量的STS(0、50、100、200、400、800μmol/L)干预48 h,采用CCK-8方法检测细胞增殖活力,同时在倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化。用不同剂量的STS(0、100、200μmol/L)同样干预48 h,实时定量PCR检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、血管内皮生长因子(VEGF)、成骨细胞特异因子2(Periostin)的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测HIF-1α、TGF-β1蛋白的表达情况。结果低氧与常氧下的KFs增殖活力无明显差异;STS在常氧和低氧下明显抑制KFs增殖(P<0.01),其有剂量依赖性,在低氧条件下STS的起效剂量比常氧下的高。低氧能够引起HIF-1α的mRNA和蛋白分别增加0.606(P=0.037)、0.950(P=0.002),VEGF mRNA上调7.256(P=0.043),Periostin mRNA上调6.285(P=0.006),TGF-β1蛋白增加1.641(P=0.011),对ColⅠ和ColⅢ的mRNA的表达无明显影响。常氧下,200μmol/L的STS增加HIF-1α和Periostin的mRNA表达分别为0.750(P=0.015)和8.553(P=0.000),减少TGF-β1、ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达分别为0.349(P=0.007)、0.320(P=0.006)、0.453(P=0.015),对TGF-β1蛋白和VEGF mRNA表达影响不明显。低氧48 h,200μmol/L的STS使HIF-1αmRNA和蛋白表达分别减少0.548(P=0.016)、0.984(P=0.001),对TGF-β1 mRNA和蛋白以及ColⅠ、ColⅢ、VEGF、Periostin的mRNA表达影响不明显。结论常氧和低氧下STS对KFs的增殖均有抑制作用,并能够影响促纤维化因子的表达,可能作为治疗瘢痕疙瘩的潜在药物。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA磺酸钠 瘢痕疙瘩成纤维细胞 低氧 增殖 基因表达

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miR-200c抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的研究 被引量：4

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作者 孙慧娟 胡纯婷 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期210-213,共4页

目的：探讨miR-200c对人瘢痕疙瘩成纤维细胞human keloid fibroblasts，HKFs）增殖和胶原合成的影响及阐明其机制。方法：将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经转化生长因子（TGF）-β1诱导的HKFs，CCK-8法测细胞增殖变化；3H-... 目的：探讨miR-200c对人瘢痕疙瘩成纤维细胞human keloid fibroblasts，HKFs）增殖和胶原合成的影响及阐明其机制。方法：将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经转化生长因子（TGF）-β1诱导的HKFs，CCK-8法测细胞增殖变化；3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。Western blot检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）及磷酸化ERK1／2蛋白表达变化。结果：在有或无TGF-β1刺激下，miR一200c均能明显抑制HKFs的增殖能力及胶原合成，并且能明显减低磷酸化ERK1／2蛋白表达水平，但对非磷酸化ERK表达无影响。结论：miR-200c能抑制HKFs增殖和胶原合成．并起拮抗TGF-B1的作用。其机制可能是通过降低ERK通路活性介导实现的。 展开更多

关键词 MIR-200C 人瘢痕疙瘩成纤维细胞 细胞外信号调节激酶

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莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成 被引量：10

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作者 袁巍巍 孙辉 +1 位作者 于丽 王京波 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期687-693,共7页

目的研究莪术醇(curcumol)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法用不同浓度的莪术醇(10、20、40、80、160 mg/L)处理瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)作为不同浓度莪术醇组;用20μmol/L蛋白激酶(ERK)信号通路激活剂... 目的研究莪术醇(curcumol)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法用不同浓度的莪术醇(10、20、40、80、160 mg/L)处理瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)作为不同浓度莪术醇组;用20μmol/L蛋白激酶(ERK)信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐(ISO)和160 mg/L莪术醇处理KF细胞,记为curcumol 160 mg/L+ISO组,Westernblot检测KF细胞中增殖蛋白(Cyclin D1、PCNA)、纤维化标记蛋白(Col1A1、Col3A1、α-SMA)、凋亡蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3)、ERK信号通路蛋白(p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf)表达水平,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果不同浓度的莪术醇(10、20、40、80、160 mg/L)均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量,抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达,抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达,提高Bax、cleaved caspase-3表达量,抑制KF细胞增殖、胶原合成,促进细胞凋亡,抑制ERK信号通路(P<0.05)。ERK信号通路激活剂ISO(20μmol/L)可逆转莪术醇(160 mg/L)对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。 展开更多

关键词 瘢痕疙瘩成纤维细胞 增殖 莪术醇 胶原合成 ERK信号通路

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马齿苋提取物调控miR-199a-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和胶原合成的影响 被引量：5

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作者 张佳音 饶美荣 +1 位作者 钟咪 曾芬 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期969-972,共4页

目的探讨马齿苋提取物调控miR-199a-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)生长和胶原合成的影响。方法将HKF细胞分为对照组、马齿苋提取物(50、100、200μg/mL)组、miR-NC组、miR-199a-5p组、anti-miR-NC+200μg/mL马齿苋提取物组、anti-miR-1... 目的探讨马齿苋提取物调控miR-199a-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)生长和胶原合成的影响。方法将HKF细胞分为对照组、马齿苋提取物(50、100、200μg/mL)组、miR-NC组、miR-199a-5p组、anti-miR-NC+200μg/mL马齿苋提取物组、anti-miR-199a-5p+200μg/mL马齿苋提取物组。CCK-8法检测HKF细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR法检测细胞miR-199a-5p表达,Western blot法检测细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ蛋白表达。结果与对照组比较,马齿苋提取物组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达降低(P<0.05),miR-199a-5p表达、G_(0)/G_(1)期细胞比例升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-5p组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达降低(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例升高(P<0.05)。与anti-miR-NC+200μg/mL马齿苋提取物组比较,anti-miR-199a-5p+200μg/mL马齿苋提取物组细胞活力、S期细胞比例、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白表达升高(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例降低(P<0.05)。结论马齿苋提取物可能通过上调miR-199a-5p表达抑制HKF细胞生长和胶原合成。 展开更多

关键词 马齿苋提取物 瘢痕疙瘩成纤维细胞 miR-199a-5p 增殖 胶原合成

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