低氧诱导因子-1Α参与低氧预处理诱导的心肌血管生成 被引量：4

1

作者 李玉珍 蔡莉蓉 +2 位作者 孙胜 刘凤英 刘秀华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期2301-2304,共4页

目的:研究低氧诱导因子-1Α(HIF-1Α)在低氧预处理(HPC)诱导心肌血管生成中的作用,并探讨其细胞信号转导的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组和HPC组。动物置于低氧仓内,持续通入100% O2和 90％ N2 4H复制低氧预处理模型。用Ⅷ因子... 目的:研究低氧诱导因子-1Α(HIF-1Α)在低氧预处理(HPC)诱导心肌血管生成中的作用,并探讨其细胞信号转导的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组和HPC组。动物置于低氧仓内,持续通入100% O2和 90％ N2 4H复制低氧预处理模型。用Ⅷ因子免疫组化染色检测HPC后7 D和21 D心肌组织微血管密度。制备心肌组织蛋白提取物,分别以磷酸化的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抗体和HIF-1Α抗体检测HPC后1 D、7 D和21 D P -ERK1/2活性及HIF-1Α表达。结果:HPC后7D和21D心肌组织微血管密度分别较对照组高36．99％和37．76％ (均P<0．01);P-ERK1/2活性在HPC后1D较对照组高18．67％;HPC诱导HIF-1Α的表达,其表达高峰出现在HPC 后1D。结论:HPC可以促进心肌微血管生成,其机制涉及ERKS活化和HIF-1Α表达上调。 展开更多

关键词 低氧诱导因子-1Α 低氧预处理 新生血管化 病理性

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小鼠角膜新生血管内皮细胞的分离培养及其趋化因子受体的表达 被引量：4

2

作者 刘高勤 肖艳辉 +2 位作者 陈志刚 徐静 陆培荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期132-136,共5页

背景研究角膜新生血管生成的病理机制对角膜新生血管的治疗具有重要意义，但目前的相关研究多采用非角膜新生血管来源的血管内皮细胞，研究结果的可靠性受到一定影响。目的探索从碱烧伤诱导实验性小鼠角膜新生血管组织中分离和培养血管... 背景研究角膜新生血管生成的病理机制对角膜新生血管的治疗具有重要意义，但目前的相关研究多采用非角膜新生血管来源的血管内皮细胞，研究结果的可靠性受到一定影响。目的探索从碱烧伤诱导实验性小鼠角膜新生血管组织中分离和培养血管内皮细胞的方法，并检测新生血管内皮细胞中趋化因子受体的表达，为角膜新生血管内皮细胞的生物学特性研究奠定基础。方法7—8周龄SPF级健康雄性BALB／c小鼠10只，采用NaOH碱烧伤法构建小鼠实验性角膜新生血管模型，采用免疫荧光技术检测CD31在角膜新生血管中的表达。在碱烧伤后2周摘取眼球分离角膜组织，眼科手术剪剪碎角膜组织后应用胶原酶D消化获取单个细胞，使用包被CD31抗体的磁珠分选获取血管内皮细胞。采用免疫组织化学染色法检测CD31在细胞中的表达以鉴定培养的细胞，采用逆转录PCR法检测血管内皮细胞中趋化因子受体基因的表达。结果碱烧伤后7d裂隙灯显微镜下可见小鼠左眼角膜出现新生血管，碱烧伤后2周角膜新生血管的形成达高峰，免疫荧光检测可见角膜组织内特异性CD31染色的血管网。角膜新生血管血管内皮细胞培养后2h贴壁生长，形态呈扁平多边形，体积较大，传代培养后细胞生长速度明显加快。培养的角膜新生血管内皮细胞CD31表达阳性，细胞质中呈棕黄色染色，而角膜基质细胞中CD31表达阴性。逆转录PCR结果显示分离培养的血管内皮细胞中CCR1、CCR2、CCR3和CCR4mRNA相对表达量最高，CXCR3、CCR6、CCR10和CX3CRlmRNA呈中等强度表达，CCR5、CCR8mRNA相对表达量较低，而CCR9、CXCR4和CXCR5mRNA表达未检测到。结论CD31抗体的磁珠分选法可有效分离纯化小鼠角膜新生血管内皮细胞，并可进行体外培养且培养的细胞可表达趋化因子受体。 展开更多

关键词 内皮细胞/角膜新生血管来源 细胞培养 角膜新生血管/化学诱导 趋化因子受体 动物模型 近交系BALB/c小鼠

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诱导型一氧化氮合酶在肺癌组织中的表达及其与血管生成的关系 被引量：2

3

作者 李红霞 王春光 +1 位作者 邵国光 张丽红 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期707-709,共3页

目的 :研究人体肺癌组织诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)的表达及其与临床参数和肿瘤血管生成的关系。方法 :采用免疫组织化学及原位分子杂交技术检测 4 1例人体肺癌组织中 i NOS的表达情况 ,CD34染色显示肿瘤内微血管密度 (MVD) ,显微镜下... 目的 :研究人体肺癌组织诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)的表达及其与临床参数和肿瘤血管生成的关系。方法 :采用免疫组织化学及原位分子杂交技术检测 4 1例人体肺癌组织中 i NOS的表达情况 ,CD34染色显示肿瘤内微血管密度 (MVD) ,显微镜下观察计数。结果 :肺癌组织中有 i NOS m RNA和蛋白质表达 ,阳性率分别为6 0 .98%、 5 8.5 4 % ,明显高于癌旁及正常组织 ,阳性细胞主要为肿瘤细胞和间质巨噬细胞、中性粒细胞 ,i NOS表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移有关 ,与 MVD值明显相关。结论 :肺癌组织中 i NOS的表达对术前评价患者淋巴结状态和临床分期中可能有一定价值 ,i NOS可促进血管生成 ,因此抑制 i NOS可望成为抗肿瘤血管生成疗法的又一新靶点。 展开更多

关键词 肺肿瘤 酶学 新生血管化 病理性 一氧化氮合酶 血管生成因子 免疫组织化学

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缺氧诱导因子-1α的表达与肝癌血管生成的关系 被引量：5

4

作者 穆四清 张峰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期172-175,F0002,共5页

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与肝癌血管生成的关系及HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)对肝癌生物学行为的影响。方法:应用免疫组织化学法检测肝癌组织中HIF-1α、VEGF的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤... 目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与肝癌血管生成的关系及HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)对肝癌生物学行为的影响。方法:应用免疫组织化学法检测肝癌组织中HIF-1α、VEGF的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤血管内皮细胞,计数肝癌组织中的肿瘤MVD。结果:肝癌组织中HIF-1α、VEGF的表达阳性率分别为71%、75%,MVD为41.32±9.47,明显高于正常肝组织(P<0.01),HIF-1α与VEGF的表达及MVD的变化呈显著正相关(r=0.37,P<0.05;r=0.685,P<0.001)。HIF-1α、VEGF、MVD与肝癌的淋巴转移、包膜及静脉侵犯密切相关(P<0.05)。结论:HIF-1α的表达与肝癌新生血管的生成密切相关,HIF-1α的过表达、高MVD与肝癌的不良生物学行为有关,影响肝癌的预后,可能成为预测肝癌转移复发的参考指标。 展开更多

关键词 肝癌 缺氧诱导因子-1Α 内皮生长因子 新生血管化 免疫组织化学法

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脉络膜新生血管患者房水中血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子的浓度

5

作者 童剑萍 沈晔 +2 位作者 陈伟民 林顺潮 彭智培 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2006年第3期311-314,共4页

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在活动性脉络膜新生血管膜(CNV)患者房水中的表达。方法:应用酶联免疫吸附测定法对32例活动性CNV患者和10例白内障患者(对照组)的房水标本进行VEGF和PEDF检测。结果:CNV患者房... 目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在活动性脉络膜新生血管膜(CNV)患者房水中的表达。方法:应用酶联免疫吸附测定法对32例活动性CNV患者和10例白内障患者(对照组)的房水标本进行VEGF和PEDF检测。结果:CNV患者房水中的VEGF为(523.0±273.7)pg/m l,PEDF为(16.58.±13.11)ng/m l;对照组患者房水中的VEGF为(108.3±72.3)pg/m l,PEDF为(0.35±0.57)ng/m l。两组间的VEGF和PEDF均有显著性差异(均P=0.000)。结论:活动性CNV患者房水中VEGF和PEDF增高,可能与脉络膜新生血管的形成有关。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子A/生物合成 色素上皮 眼 眼房水/化学 脉络膜新生血管化/代谢 新生血管化 病理性 酶联免疫吸附测定

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甲状腺实性结节超声造影与免疫组织化学分析 被引量：22

6

作者 张波 姜玉新 +4 位作者 戴晴 崔全才 张青 李文波 杨萌 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2011年第9期1783-1787,共5页

目的探讨甲状腺良恶性实性结节CEUS增强模式与CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学表达的相关性。方法采用低机械指数实时灰阶谐波CEUS技术,对80例甲状腺患者的82个实性结节进行CEUS,包括甲状腺乳头状癌结节38个、髓样癌3个,结节性甲... 目的探讨甲状腺良恶性实性结节CEUS增强模式与CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学表达的相关性。方法采用低机械指数实时灰阶谐波CEUS技术,对80例甲状腺患者的82个实性结节进行CEUS,包括甲状腺乳头状癌结节38个、髓样癌3个,结节性甲状腺肿31个、腺瘤7个、桥本病结节3个。术后行CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学染色。比较良恶性结节CEUS增强模式和免疫组织化学表达水平差异,分析其相关性。结果甲状腺良恶性结节的增强模式存在差别(P<0.01),良性结节78.05%(32/41)表现为环状增强,恶性结节92.68%(38/41)表现为不均匀增强。恶性结节的CD34、VEGF、CK19和Ki-67表达显著高于良性结节(P<0.01)。非均匀增强与CD34、VEGF、CK19呈正相关(r=0.39,P<0.001;r=0.26,P=0.04;r=0.54,P<0.001);环状增强与CD34、CK19、Ki-67呈负相关(r=-0.38,P<0.001;r=-0.59,P<0.001;r=-0.25,P=0.03)。结论 CEUS和CD34、VEGF、CK19和Ki-67免疫组织化学染色有助于鉴别甲状腺良恶性结节。 展开更多

关键词 甲状腺结节 超声检查 介入性 新生血管化 病理性 免疫组织化学

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缺氧诱导因子-1α在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其临床意义 被引量：8

7

作者 郑延波 徐克 《介入放射学杂志》 CSCD 2007年第5期334-338,共5页

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其与肿瘤血管生成的相关性。方法24只荷VX2瘤兔随机分为3组,每组8只。对照组:经肝动脉注入生理盐水2ml;TAE组:单纯碘油(UFLP)0.5～0.8ml栓塞,TACE组:碘油抗癌药混悬液... 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其与肿瘤血管生成的相关性。方法24只荷VX2瘤兔随机分为3组,每组8只。对照组:经肝动脉注入生理盐水2ml;TAE组:单纯碘油(UFLP)0.5～0.8ml栓塞,TACE组:碘油抗癌药混悬液(UFLP+THP)栓塞,UFLP0.5～0.8ml,THP2mg。于术后2周应用免疫组化法分别检测肿瘤组织中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤血管内皮细胞,计数肿瘤组织中的微血管密度(MVD)。结果TAE组和TACE组HIF-1α、VEGF表达与MVD值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),HIF-1α与VEGF的表达及MVD的变化呈正相关(rS=0.537,P<0.01;rS=0.423,P<0.05)。结论TACE能明显上调HIF-1α的表达,HIF-1α通过调控其下级基因VEGF的表达而促进肿瘤血管的生成,影响肝癌的预后。 展开更多

关键词 肝肿瘤 缺氧诱导因子-1Α 新生血管化 免疫组织化学法

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舌鳞癌中IL-8的表达与微血管生成 被引量：2

8

作者 徐文华 周健 +3 位作者 陈乔尔 王元银 王银龙 何家才 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第3期275-277,共3页

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)的表达与舌鳞癌血管形成的关系。方法应用免疫组织化学技术检测60例舌鳞癌手术切除标本和10例正常舌黏膜标本中IL-8的表达及肿瘤内微血管密度(iMVD)。结果舌鳞癌标本中36例(60·00%)IL-8呈阳性表达,舌鳞... 目的探讨白细胞介素-8(IL-8)的表达与舌鳞癌血管形成的关系。方法应用免疫组织化学技术检测60例舌鳞癌手术切除标本和10例正常舌黏膜标本中IL-8的表达及肿瘤内微血管密度(iMVD)。结果舌鳞癌标本中36例(60·00%)IL-8呈阳性表达,舌鳞癌iMVD为38·30±12·87;IL-8评分为高级的舌鳞癌组织iMVD高于IL-8评分为阴性和低级的舌鳞癌组织。iMVD与IL-8呈正相关(rs=0·735,P<0·01)。结论IL-8表达与肿瘤内iMVD明显相关,同时与舌鳞癌的临床分期关系密切。 展开更多

关键词 癌 鳞状细胞 免疫组织化学 白细胞介素8 新生 血管化 病理性

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氧诱导视网膜病变小鼠模型的蛋白表达谱分析 被引量：2

9

作者 漆晨 韩倩 +4 位作者 薄其玉 刘勋 王飞 张琰 李筱荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1069-1075,共7页

背景视网膜新生血管（RNV）是目前世界范围内主要的致盲原因之一，而目前的治疗效果并不理想，因此需要寻找在疾病状态下异常表达的蛋白质标志物，为新生血管性视网膜疾病的治疗提供新的靶点。目的观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型... 背景视网膜新生血管（RNV）是目前世界范围内主要的致盲原因之一，而目前的治疗效果并不理想，因此需要寻找在疾病状态下异常表达的蛋白质标志物，为新生血管性视网膜疾病的治疗提供新的靶点。目的观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型中视网膜血管的形态学特征，筛选并验证差异性表达的蛋白质分子。方法选取7日龄健康清洁级C57BL／6J幼鼠44只，分为OIR组和正常对照组。OIR组幼鼠先在氧体积分数为（75±2）％的环境下饲养5d，然后在正常空气环境中饲养5d，而正常对照组幼鼠仅在正常空气环境下饲养10d。取17日龄幼鼠经球后静脉注射高分子量异硫氰酸葡聚糖（FITC-dextran），然后制备视网膜铺片，观察视网膜血管的形态并统计视网膜无灌注区相对面积；取各组小鼠眼球行石蜡切片和苏木精一伊红染色，计数突破内界膜的血管内皮细胞核数；采用蛋白芯片法检测蛋白质分子在OIR组和正常对照组小鼠眼球中的差异性表达，并用Western blot法和ELISA法对差异表达蛋白进行验证。结果视网膜铺片结果显示，OIR组小鼠视网膜周边血管紊乱，静脉血管迂曲，视网膜中央有明显的无灌注区，在视网膜灌注区和无灌注区的交界处有大量新生血管芽，而正常对照组视网膜血管细密，静脉平滑，分布均匀整齐。OIR组小鼠视网膜无灌注区的相对面积为（25．53±2．16）％，较正常组无灌注区的相对面积（0．66±0．36）％明显增加，差异有统计学意义（t=-27．61，P〈0．01）。石蜡切片苏木精-伊红染色结果表明，OIR组小鼠视网膜平均每张切片突人玻璃体腔的血管内皮细胞核数为（28．41±3．97）／切片，而正常组为（0．16±0．31）／切片，两组间比较差异有统计学意义（t=-54．42，P〈0．001）。蛋白芯片检测结果显示，在检测的62个与新生血管和炎症相关的细胞因子中，表达变化达1．5倍以上者10个，包括3个上调因子和7个下调因子；表达变化达2倍以上的细胞因子4个，包括3个下调因子和1个上调因子。对表达差异最显著的6个细胞因子（上调、下调各3个）进行Western blot和ELISA验证，结果表明血小板因子4（PF-4）、血管内皮生长因子A（VEGF—A）、P-选择素（SELP）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）、可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNF—RⅡ）以及趋化因子半胱氨酸-X-半胱氨酸基元配体16（CXCL16）的表达与蛋白芯片检测的表达趋势一致，其中PF-4、SELP和VEGF—A在OIR眼球中表达显著上调，CXCLl6、sTNF—RⅡ和VCAM-1在OIR眼球中的表达显著下调，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论本研究成功建立OIR小鼠模型。细胞因子PF-4、SELP、VEGF—A、CXCL16、sTNF—RⅡ和VCAM-1在OIR模型和正常对照小鼠的眼球组织中的表达存在显著差异，提示OIR状态下血小板系统处于激活状态，而促炎因子表达下调。PF-4可能成为针对RNV的VEGF非依赖型治疗策略的新靶点。 展开更多

关键词 病理性新生血管/生理病理 氧诱导视网膜病变 蛋白标志物表达谱 靶点 近交系C57BL小鼠

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卵巢上皮性癌中HIF-1α表达及其与血管生成细胞增殖的关系 被引量：2

10

作者 肖颖丽 梁志清 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1263-1265,共3页

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其与血管生成和细胞增殖的关系。方法:采用免疫组织化学法检测卵巢上皮性癌组织中HIF-1α表达,并检测其微血管密度(CD34标记)和癌细胞增殖指数(PCNA标记)。结果:卵巢上皮性... 目的:探讨卵巢上皮性癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其与血管生成和细胞增殖的关系。方法:采用免疫组织化学法检测卵巢上皮性癌组织中HIF-1α表达,并检测其微血管密度(CD34标记)和癌细胞增殖指数(PCNA标记)。结果:卵巢上皮性癌组织中的HIF-1α、微血管密度(MVD)、PCNA指数明显高于良性肿瘤;HIF-1α表达与临床分期相关,与病理分级和组织学分类无相关性;HIF-1α表达与MVD及PCNA之间存在显著相关性。结论:HIF-1α过度表达可能参与卵巢癌的发生发展,且与卵巢癌新生血管的形成和细胞增殖有密切关系,可作为反映卵巢癌生物学行为的有效指标。 展开更多

关键词 HIF-1Α 血管生成 表达及 卵巢上皮性癌组织 微血管密度(MVD) 缺氧诱导因子-1α 免疫组织化学法 PCNA标记 细胞增殖指数 PCNA指数 癌生物学行为 组织学分类 良性肿瘤 临床分期 病理分级 发生发展 过度表达 密切关系 新生血管

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胶质瘤VEGF、VEGF-C和VEGFR-3表达对间质血管生成及肿瘤细胞增殖的影响

11

作者 陈素琴 何永静 +4 位作者 于士柱 宋杨 安同岭 孙翠云 王虔 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2010年第4期473-478,共6页

目的探讨胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)表达变化,以及对肿瘤细胞增殖和间质血管生成的影响。方法收集2000-2009年手术切除WHO Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤标本各20例,采... 目的探讨胶质瘤血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)表达变化,以及对肿瘤细胞增殖和间质血管生成的影响。方法收集2000-2009年手术切除WHO Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤标本各20例,采用组织微阵列技术及免疫组织化学染色(SPAB法)观察不同级别胶质瘤组织中VEGF、VEGF-C、VEGFR-3和Ki-67抗原的表达及CD31阳性血管密度。结果 60例胶质瘤组织中肿瘤细胞及间质血管内皮细胞VEGF、VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率分别为88.33%(53/60)和100%(60/60)、100%(60/60)和16.67%(10/60)、100%(60/60)和21.67%(13/60),不同级别组间差异均无统计学意义(P>0.05)。Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级及Ⅳ级组的VEGF阳性肿瘤细胞密度分别为(17.65±9.00)、(37.30±18.54)和(83.40±22.98)个/0.05 mm^2;VEGF-C阳性肿瘤细胞密度为(38.00±17.82)、(79.30±5.23)和(102.00±1 3.07)个/0.05 mm^2;VEGFR-3阳性血管密度(3 65±2.01)、(10.50±3.98)和(14.60±7.29)血管数/4 HF;Ki-67抗原阳性肿瘤细胞密度(9.30±3.48)、(31.15±9.44)和(60.15±13.60)个/0.05 mm^2;CD31阳性血管密度(6.75±2.24)、(10.35±2.98)和(14.30±3.51)血管数/4 HF,各组之间以上5种指标比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且彼此间均呈显著性正相关关系(r=0.663～0.910,P<0.01)。结论胶质瘤细胞普遍过表达VEGF和VEGF-C,而胶质瘤间质血管内皮细胞则普遍过表达VEGFR-3,三者表达水平均随着肿瘤级别的升高而相应增加;由此形成的旁分泌环通过诱导问质血管生成促进肿瘤细胞增殖,在胶质瘤的发生、发展过程中起着重要作用。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子类 神经胶质瘤 新生血管化 病理性 免疫组织化学

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自体骨髓间充质干细胞移植对兔角膜碱烧伤炎症反应的抑制作用 被引量：7

12

作者 吴利安 王从毅 +3 位作者 杨文 杨新光 张林 王佳慧 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期798-804,共7页

背景 眼表碱烧伤可引起角膜溃疡及角膜新生血管形成,导致角膜混浊,目前尚无有效的疗法.已有研究认为间充质干细胞（MSCs）移植具有修复角膜损伤的作用,但其在体内对角膜碱烧伤治疗的作用机制尚不清楚. 目的 研究兔自体骨髓间充质干细胞... 背景 眼表碱烧伤可引起角膜溃疡及角膜新生血管形成,导致角膜混浊,目前尚无有效的疗法.已有研究认为间充质干细胞（MSCs）移植具有修复角膜损伤的作用,但其在体内对角膜碱烧伤治疗的作用机制尚不清楚. 目的 研究兔自体骨髓间充质干细胞（BM SCs）对碱烧伤角膜的抗炎机制.方法 抽取2～3月龄日本大白兔骨髓,经体外分离培养得到BMSCs并进行传代,取第3代细胞用于实验,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态,采用流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,对细胞进行生物学鉴定.采用角膜贴敷NaOH滤纸法在24只日本大白兔的右眼建立中度角膜碱烧伤模型,然后将造模成功的实验兔应用随机数字表法随机分为2个组,于碱烧伤后1h分别在模型眼结膜下注射同种自体BMSCs悬液300μl（细胞密度5×106/μ1）（BMSCs组）或等容积PBS（PBS组）,每组各12只.分别于移植后3、14和28 d于裂隙灯显微镜下观察角膜的混浊度变化并进行评分,采用组织病理学方法检查角膜组织中炎症反应程度并进行多形核中性粒细胞（PMNs）计数;采用免疫组织化学染色法定位并检测角膜组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达.结果 体外分离培养的兔BMSCs贴壁生长,呈长梭形,细胞形态均一,传代后其形态无明显改变.细胞表面黏附分子标志物CD29和CD90阳性表达的细胞比例分别为99.18％和97.94％,而造血细胞标志物CD34和CD31的阳性表达分别为0.74％和0.15％.造模后兔右眼出现角膜混浊、上皮脱落、角膜基质水肿和新生血管形成,移植后14d和28 d BMSCs组混浊度评分分别为2.37±0.52和2.25±0.50,均明显低于PBS组的3.00±0.53和3.25±0.50,差异均有统计学意义（t=2.376、2.828,均P＜0.05）;移植后14 d和28 d BMSCs组角膜中PMNs数目分别为（34.17±1.85）/12个视野和（25.64±3.86）/12个视野,明显少于PBS组的（42.70±1.54）/12个视野和（32.67±1.42）/12个视野,差异均有统计学意义（t=10.021、4.832,均P=0.000）;移植后14 d和28 d BMSCs组角膜组织中MMP-2蛋白的阳性表达量（A值）分别为0.388±0.016和0.384±0.006,明显低于PBS组的0.438±0.006和0.412±0.005,差异均有统计学意义（t=10.205、13.514,均P=0.000）.结论 角膜碱烧伤后早期行自体BMSCs移植可减少PMNs浸润,减轻角膜的炎症反应,下调或抑制MMP-2在受损角膜处的表达,抑制基质胶原纤维的降解,从而减少碱烧伤后角膜溃疡的发生。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞移植/方法 生物分子标志物 化学烧伤/治疗 角膜病/治疗 病理性新生血管/化学诱导 炎症/预防和治疗 基质金属蛋白酶 动物模型

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内皮抑素在兔VX2肝移植瘤介入治疗中的应用价值 被引量：4

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作者 蹇兆成 孙业全 +4 位作者 王滨 梁淑娟 刘艳 白旭明 宁厚法 《介入放射学杂志》 CSCD 北大核心 2009年第4期285-289,共5页

目的探讨内皮抑素在兔VX2肝移植瘤介入治疗中的应用价值。方法建立兔肝移植瘤模型,随机分为对照组(NS,10只),TACE组(Lipiodol+ADM,10只)和内皮抑素组(Lipiodol+ADM+ES,10只),多排螺旋CT测量肿瘤大小,计算肿瘤增长率(GR);术后1周取出病... 目的探讨内皮抑素在兔VX2肝移植瘤介入治疗中的应用价值。方法建立兔肝移植瘤模型,随机分为对照组(NS,10只),TACE组(Lipiodol+ADM,10只)和内皮抑素组(Lipiodol+ADM+ES,10只),多排螺旋CT测量肿瘤大小,计算肿瘤增长率(GR);术后1周取出病理标本,利用免疫组化染色及半定量RT-PCR法分别检测残瘤组织微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果3组肿瘤增长率分别为对照组(270.86±148.94)%,TACE组(-8.91±21.77)%,内皮抑素组(-20.40±36.07)%,3组间相互比较,对照组呈明显正增长,与其余2组比较差异均有统计学意义(P<0.01),而TACE组与内皮抑素组之间差异无统计学意义(P>0.05);各组的MVD值分别为80.00±17.14(对照组)、84.22±16.45(TACE组)和57.00±13.26(内皮抑素组),内皮抑素组MVD值最低,与另外2组比较差异均有统计学意义(P<0.05),对照组和TACE组之间差异性不明显(P>0.05);VEGF165mRNA:对照组为(0.85±0.056),TACE组为(1.10±0.087),内皮抑素组为(0.72±0.065),TACE组表达水平最高,与其余2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论兔VX2肝移植瘤的介入治疗中应用内皮抑素后,肿瘤明显缩小,肿瘤组织VEGF的表达减低,MVD的分布减少,提高了肿瘤的治疗效果。 展开更多

关键词 肝肿瘤 实验性 化学栓塞 治疗性 新生血管化 病理性 动物 实验

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趋化因子CX3CL1和CCL2对人单核细胞来源巨噬细胞的作用及意义 被引量：3

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作者 刘高勤 陈磊 +3 位作者 陈源 周文娟 张文朋 陆培荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期206-210,共5页

背景 研究发现巨噬细胞及其分泌的趋化因子与角膜新生血管（CNV）的发生相关.巨噬细胞具有异质性,在不同的微环境以及不同的刺激条件下发挥不同的作用. 目的 检测C-X3-C趋化因子配体1（CX3CL1）和C-C趋化因子配体2（CCL2）对巨噬细胞增... 背景 研究发现巨噬细胞及其分泌的趋化因子与角膜新生血管（CNV）的发生相关.巨噬细胞具有异质性,在不同的微环境以及不同的刺激条件下发挥不同的作用. 目的 检测C-X3-C趋化因子配体1（CX3CL1）和C-C趋化因子配体2（CCL2）对巨噬细胞增生的作用,并探讨其意义. 方法 7～8周龄雄性BALB/c小鼠20只,用角膜碱烧伤的方法构建左眼CNV模型,术后4d在裂隙灯显微镜下检查小鼠CNV情况,颈椎脱臼法处死小鼠并制备角膜切片.用荧光免疫组织化学法检测小鼠角膜组织中巨噬细胞表面两种趋化因子受体C-C趋化因子受体2（CCR2）和CX3CR1的表达.用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,在含质量分数10％胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养液中加入30 μg/L粒细胞巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）,诱导和培养人外周血单核细胞来源的巨噬细胞.将培养的细胞分为CD68＋CCR2组和CD68＋CX3CR1组,分别加入CD68＋CCR2抗体和CD68＋CX3CR1抗体,每组2管,其中一管作为IgG同型对照.采用流式细胞仪分别检测小鼠碱烧伤角膜组织中巨噬细胞和人外周血巨噬细胞中CX3CR1以及CCR2的表达.分别用人重组CX3CL1和CCL2蛋白刺激巨噬细胞,实时定量PCR（real-time PCR）法检测干预后巨噬细胞中血管内皮生长因子（VEGF）、血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶1（ADAMTS-1）、凝血酶敏感蛋白1（TSP-1）等血管生成相关因子的表达.结果 角膜碱烧伤后4d,裂隙灯显微镜下可见角膜局部有新生血管发生,CNV沿角膜缘向角膜中心区域延伸.荧光免疫组织化学法检测发现,角膜组织内有F4/80阳性的巨噬细胞浸润,其表面可见CCR2和CX3CR1分子的表达,呈绿色荧光.未受GM-CSF诱导培养的巨噬细胞能维持生长约2周,但死亡细胞较多,而经GM-CSF诱导培养的细胞生长稳定,细胞数量增加,无明显悬浮死亡现象.培养的巨噬细胞中CX3CR1表达率平均约为75％,CCR2表达率为45％.Real-time PCR法检测发现,CCL2干预后巨噬细胞中VEGF mRNA的相对表达量明显增加,其中150 mg/L CCL2组VEGF mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义（t=-5.09,P=0.03）,而ADAMTS-1 mRNA、TSP-1 mRNA表达下降,其中150 mg/L CCL2组ADAMTS-1 mRNA、TSP-1 mRNA表达明显低于对照组,差异有统计学意义（t=3.01,P=0.04;t=4.27,P=0.02）.CX3CL1干预后巨噬细胞中VEGF mRNA表达量明显下降,而ADAMTS-1mRNA、TSP-1 mRNA的表达水平升高,与对照组相比,150 mg/L CX3CL1组VEGF mRNA表达量下降,ADAMTS-1 mRNA、TSP-1mRNA表达量下降,差异均有统计学意义（t=6.35,P=0.02；t=-2.92,P=0.04；t=-3.81,P=0.03）. 结论 CCL2、CX3CL1能通过其对应受体影响巨噬细胞VEGF、ADAMTS-1、TSP-1等血管新生相关因子的表达,提示通过CCL2、CX3CL1等干预靶点治疗新生血管性眼病的可能. 展开更多

关键词 角膜新生血管 化学诱导 趋化因子 受体 巨噬细胞 代谢 碱 烧伤 化学 病理

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HIF-1α在大鼠角膜碱烧伤后的作用研究 被引量：4

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作者 易小灵 张明昌 +1 位作者 张奕霞 张红旭 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期575-578,共4页

目的检测大鼠角膜碱烧伤后缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化,探讨其在角膜碱烧伤损伤机制中的作用。方法建立大鼠角膜碱烧伤模型,采用免疫组织化学与原位杂交技术,检测角膜碱烧伤后不同时间HIF-1α在角膜各层中的表达变化。结果在... 目的检测大鼠角膜碱烧伤后缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化,探讨其在角膜碱烧伤损伤机制中的作用。方法建立大鼠角膜碱烧伤模型,采用免疫组织化学与原位杂交技术,检测角膜碱烧伤后不同时间HIF-1α在角膜各层中的表达变化。结果在正常角膜组织中,角膜各层均未见HIF-1α免疫染色,碱烧伤后1d时HIF-1α免疫活性增强,且3d时表达最强,15d时明显下降,30d时仍有高于正常水平的弱表达。原位杂交检测中正常角膜组织有极弱的HIF-1α mRNA表达,碱烧伤后HIF-1α mRNA表达增强,在伤后3d、7d时表达最明显,15d后表达强度恢复至正常组织水平。结论HIF-1α参与碱烧伤后角膜的损伤病理机制,其表达变化影响新生血管形成过程,为寻找角膜碱烧伤新的治疗途径提供了理论依据。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1Α 角膜 碱烧伤 免疫组织化学 原位杂交 新生血管

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