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用于中和抗体评价和进入抑制剂筛选的多变异株SARS-CoV-2假病毒体系构建与评估
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作者 李静璇 刘峰 +3 位作者 王莹 程军平 肖智勇 周文霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期811-817,共7页
目的:构建一种高滴度SARS-CoV-2假病毒(PsV)体系,用于中和抗体体外评价与病毒进入抑制剂的筛选。方法:共转染慢病毒载体质粒psPAX2、pCDH-Luc与SARS-CoV-2 Spike(S)蛋白表达质粒,收获的假病毒上清感染ACE2-293T细胞。通过测定p24蛋白含... 目的:构建一种高滴度SARS-CoV-2假病毒(PsV)体系,用于中和抗体体外评价与病毒进入抑制剂的筛选。方法:共转染慢病毒载体质粒psPAX2、pCDH-Luc与SARS-CoV-2 Spike(S)蛋白表达质粒,收获的假病毒上清感染ACE2-293T细胞。通过测定p24蛋白含量反映PsV滴度,Western blot检测S蛋白在PsV中的表达。利用原始株、D614G、Gamma、Delta、Omicron PsV亚型对1株S蛋白单克隆抗体的中和能力进行评价。采用两种已报道的病毒进入抑制剂氯喹、角叉菜胶检测对Omicron PsV进入的影响。结果:慢病毒载体成功掺入了S蛋白,Western blot结果显示665Y位突变的S蛋白表现出与野生型全长S蛋白(180 kD)不同的切割形式(90 kD)。三质粒体系包装出的PsV滴度更高,S蛋白表达质粒、转移质粒与包装质粒比例在1∶3∶3时为原始株PsV包装的最佳条件。该条件下包装出的5种PsV滴度均在20 ng/ml以上。PsV可有效感染ACE2-293T细胞,双报告基因GFP与萤火虫荧光素酶表达明显,化学发光数值高达106。基于原始株S蛋白的单克隆抗体可有效中和原始株PsV,对原始株PsV的中和作用是对变异株PsV的10~30倍。病毒进入抑制剂氯喹与ι-角叉菜胶可显著抑制Omicron PsV进入宿主细胞。结论:成功构建了高滴度的SARS-CoV-2 PsV进入体系,该体系以荧光素酶报告基因为指示,包含原始株和D614G、PsV Gamma、Delta、Omicron 4种变异株PsV,可有效评价中和抗体与病毒进入抑制剂活性,区分二者对不同变异株的敏感性差异对抗SARS-CoV-2药物研发有重要意义。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 病毒 S蛋白 中和抗体 病毒进入抑制
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马铃薯三糖熊果酸衍生物抑制H5N1流感病毒进入靶细胞 被引量:5
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作者 宋高鹏 申新田 +3 位作者 黎奕斌 郑宇珊 熊平 刘叔文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期789-794,共6页
目的研究马铃薯三糖熊果酸衍生物能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖熊果酸甲酯1为先导化合物,设计并合成4个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化合物的抑制活性... 目的研究马铃薯三糖熊果酸衍生物能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖熊果酸甲酯1为先导化合物,设计并合成4个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化合物的抑制活性。结果化合物1b,1c和1d对源自A/Thailand/Kan353/2004的H5N1假病毒毒株有明显的抑制作用且化合物1 d的活性最好,其IC50达到0.96±0.10μmol/L。结论初步构效关系研究表明,熊果酸的C-17位羧基被酯化后可显著提高其抗病毒活性;将羧基转化成酰胺后可提高抗病毒活性并降低对靶细胞MDCK的细胞毒性。 展开更多
关键词 H5N1 流感病毒进入抑制 血凝素 五环三萜
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3-三氟甲基苯甲酰胺类衍生物对H5N1流感病毒进入靶细胞的抑制活性 被引量:2
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作者 朱志博 蔡云 +3 位作者 杨洁 李湘潋 李润明 刘叔文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期961-964,共4页
目的 3-三氟甲基苯甲酰胺类衍生物作为新的抗流感药物能否抑制H5N1流感病毒进入靶细胞。方法对先导化合物进行改构,发现并合成具有进入抑制活性的3个化合物,同时从Specs公司化合物库挑选购买了一些化合物,同样发现了4个有抑制活性的化合... 目的 3-三氟甲基苯甲酰胺类衍生物作为新的抗流感药物能否抑制H5N1流感病毒进入靶细胞。方法对先导化合物进行改构,发现并合成具有进入抑制活性的3个化合物,同时从Specs公司化合物库挑选购买了一些化合物,同样发现了4个有抑制活性的化合物,利用建立在细胞水平的H5N1假病毒活性检测方法测试了这些化合物的抑制活性。结果和结论化合物1a,1b,1e和1f对源自A/AnHui/1/2005的H5N1假病毒毒株有明显的抑制作用。化合物1a的活性最好,其IC50达到4.7±0.3μmol/L。 展开更多
关键词 H5N1禽流感病毒 流感病毒进入抑制 血凝素 苯甲酰胺
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泽漆二萜化合物体外抗寨卡病毒机制
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作者 庞攀攀 邱雄 +5 位作者 江英杰 刘欣月 马维喆 尹健秋蓉 肖伟烈 郑昌博 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第8期1436-1444,共9页
目的探究泽漆二萜类化合物9体外抗寨卡病毒(zika virus,ZIKV)的作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞毒性;建立ZIKV感染Vero细胞模型,通过RT-qPCR、病毒噬斑实验、Western blot及免疫荧光技术评价抗病毒活性;结合多细胞系验证、纳米粒度... 目的探究泽漆二萜类化合物9体外抗寨卡病毒(zika virus,ZIKV)的作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞毒性;建立ZIKV感染Vero细胞模型,通过RT-qPCR、病毒噬斑实验、Western blot及免疫荧光技术评价抗病毒活性;结合多细胞系验证、纳米粒度分析、细胞热位移及分子对接技术阐明作用机制。结果化合物9在Vero细胞中对ZIKV的EC 50为(3.95±0.15)μmol·L^(-1),CC 50为(272.12±8.56)μmol·L^(-1),抗病毒效力明显优于阳性对照药利巴韦林(ribavirin,RBV)。其灭活病毒作用呈现时间依赖性,可明显降低病毒载量和斑块形成。研究表明,化合物9可改变ZIKV颗粒的理化特性,包括降低表面电荷、增加粒径分布,并明显增强prM蛋白热稳定性。分子对接结果显示,化合物9与prM蛋白形成高亲和力结合(结合能为-38.52 kJ·mol^(-1)),并通过疏水相互作用稳定蛋白结构。结论化合物9通过直接灭活病毒、干扰病毒粒子完整性及靶向prM蛋白发挥体外抗ZIKV作用。 展开更多
关键词 寨卡病毒 泽漆二萜类化合物 病毒进入抑制 prM蛋白 分子对接 天然产物抗病毒药物
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马铃薯三糖五环三萜类化合物体外抗H5N1流感病毒的活性评价 被引量:7
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作者 宋高鹏 申新田 +4 位作者 李素梅 黎奕斌 范继鸿 梁倩倩 刘叔文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期647-654,共8页
目的研究3种不同类型的马铃薯三糖五环三萜能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖薯蓣皂苷衍生物1为先导化合物,设计并合成3个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化... 目的研究3种不同类型的马铃薯三糖五环三萜能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖薯蓣皂苷衍生物1为先导化合物,设计并合成3个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化合物的抑制活性。结果目标化合物1a、1b和1c对源自A/Thailand/Kan353/2004的H5N1假病毒毒株均具有明显的抑制作用,且化合物1b的活性最好,其IC50达到(1.25±0.22)μmol·L-1。结论初步构效关系研究表明,将先导化合物1结构中的薯蓣皂苷苷元替换成五环三萜苷元后可提高其抗病毒活性;五环三萜的苷元类型对抗病毒活性有重要影响,乌苏烷型的五环三萜为苷元其抗病毒活性最强。 展开更多
关键词 H5 N 1 流感病毒进入抑制 合成 血凝素蛋白 构效关系 五环三萜
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