猪脑心肌炎病毒结构蛋白VP1基因的克隆与原核表达 被引量：5

1

作者 盖新娜 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第11期9-11,共3页

关键词 脑心肌炎病毒 克隆与原核表达 病毒结构蛋白 VP1基因 仔猪 急性死亡 virus 病毒性疾病

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尼帕病毒结构蛋白研究进展 被引量：2

2

作者 谢金文 沈志强 +1 位作者 任艳玲 魏凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1077-1079,共3页

关键词 病毒结构蛋白 马来西亚 病毒性脑炎 呼吸道症状 养猪场 神经症状 养猪工人

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新城疫病毒F48E9株病毒结构蛋白的分析 被引量：4

3

作者 曹殿军 刘继红 +2 位作者 王莉林 张莹 卢景良 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第2期13-15,共3页

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、激光扫描技术、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和糖蛋白染色方法对新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ９株的结构蛋白进行了分析，结果表明，它具有ＮＤＶ的典型结构特征。

关键词 新城疫 F48E9 病毒结构蛋白

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口蹄疫病毒结构蛋白抑制宿主天然免疫应答的功能及机制 被引量：10

4

作者 ZHANG KE-SHAN YAN MING-HAO HAO JUN-HONG 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期349-349,共1页

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)感染引起偶蹄动物的一种烈性传染病,严重危害我国及世界畜牧业发展。为突破宿主免疫应答,FMDV通过自身编码的多种结构蛋白和非结构蛋白拮抗宿主天然免疫和适应性免疫应答以达... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)感染引起偶蹄动物的一种烈性传染病,严重危害我国及世界畜牧业发展。为突破宿主免疫应答,FMDV通过自身编码的多种结构蛋白和非结构蛋白拮抗宿主天然免疫和适应性免疫应答以达到免疫逃逸的目的。FMDV结构蛋白VP1是一种具有结合宿主细胞、诱导体液免疫应答和引起细胞凋亡的多功能蛋白。宿主肿瘤进行性位点2(TPL2)是一种重要的宿主免疫调节蛋白,可以调控宿主干扰素和细胞因子的产生,在天然免疫和获得性免疫中发挥重要作用。 展开更多

关键词 烈性传染病 体液免疫应答 口蹄疫病毒 病毒结构蛋白 偶蹄动物 非结构蛋白 FMDV 天然免疫

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表达嵌合性传染性法氏囊病病毒结构蛋白的重组杆状病毒…

5

作者 Snyc.,DB 赵军 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1996年第1期10-14,共5页

作者对传染性氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）变异株ＧＥＳ的大基因片Ａ编码的ＶＰ３结构基因进行修饰，使之编码中和表位Ｂ６９。该表位只在ＨＢＤ古典株中发现，将可编码ＶＰ，ＶＰ４和修饰的ＩＢＤＶ变株ＶＰ３各结构蛋白的较大片段Ａ的嵌合... 作者对传染性氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）变异株ＧＥＳ的大基因片Ａ编码的ＶＰ３结构基因进行修饰，使之编码中和表位Ｂ６９。该表位只在ＨＢＤ古典株中发现，将可编码ＶＰ，ＶＰ４和修饰的ＩＢＤＶ变株ＶＰ３各结构蛋白的较大片段Ａ的嵌合性ｃＤＮＡ克隆在重组件状病毒中表达。用一组中和性单克隆抗体（ＭＡｂ）对所表达的嵌合性蛋白进行测定，表明该嵌合性蛋白不但包含ＧＬＳ变异株的所有表位。 展开更多

关键词 鸡病 IBD 病毒结构蛋白 重组杆状病毒

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5B结合蛋白的酵母双杂交筛选研究 被引量：6

6

作者 张健 成军 +5 位作者 王琳 邵清 陆荫英 梁耀东 陈天艳 洪源 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期768-770,共3页

目前认为丙型肝炎病毒 (HCV)的非结构蛋白 5B(NS5B)是病毒复制酶 ,但是对其生物学特性还不十分清楚 ,我们应用酵母双杂交系统 3,构建NS5B诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合 ,于涂有X α gal营养缺... 目前认为丙型肝炎病毒 (HCV)的非结构蛋白 5B(NS5B)是病毒复制酶 ,但是对其生物学特性还不十分清楚 ,我们应用酵母双杂交系统 3,构建NS5B诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合 ,于涂有X α gal营养缺陷型培养基(SD/ Trp Leu His Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆 ,筛选出 33个与NS5B特异性相互作用的克隆 ,其中有 31个已知功能基因及 2个未知功能基因。所克隆到的基因对以后研究NS5B的功能有一定的提示作用 ,并为研究这些能与NS5B相互作用的基因在肝细胞中的生理功能奠定了基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒 丙型 病毒非结构蛋白质类 酵母双杂交

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日本脑炎病毒非结构蛋白NS5对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用 被引量：6

7

作者 赵慧 邓永强 +6 位作者 陈水平 姜涛 韩剑峰 李晓峰 于学东 秦成峰 秦鄂德 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期811-815,共5页

目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,N... 目的探讨日本脑炎病毒抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路过程中发挥关键作用的病毒特异蛋白,为阐明日本脑炎病毒抑制Ⅰ型IFN介导的JAK-STAT信号转导通路的作用机制奠定基础。方法分别构建日本脑炎病毒编码的7种非结构蛋白基因(NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5)的重组真核表达载体。采用间接免疫荧光法和Western blotting观察它们在细胞内的表达及定位情况。利用含萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,观察表达病毒不同非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的活化程度。构建融合表达红色荧光蛋白的STAT1重组真核表达载体pRed-STAT1,利用该重组载体在表达病毒非结构蛋白的细胞内观察融合蛋白Red-STAT1在IFN-α作用下的细胞内定位情况。同时,对表达病毒非结构蛋白的细胞内IFN-α介导的STAT1分子的磷酸化水平进行检测。结果日本脑炎病毒的7种非结构蛋白均可在哺乳动物细胞内正确表达,而且表达蛋白均位于细胞质中。在这7种非结构蛋白中,NS5可阻断STAT1分子的核转运及抑制STAT1分子的磷酸化水平,从而抑制IFN-α介导的细胞内JAK-STAT信号转导通路的活化。结论日本脑炎病毒的非结构蛋白NS5对Ⅰ型IFN系统的信号转导通路具有显著的抑制作用,可能是一种Ⅰ型IFN系统的拮抗蛋白。 展开更多

关键词 干扰素Ⅰ型 JAK-STAT信号转导通路 脑炎病毒 日本 病毒非结构蛋白质类

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应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白 被引量：4

8

作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 张忠东 杨艳杰 李强 董菁 黄燕萍 刘敏 王建军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期20-22,共3页

目的　筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法　应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬... 目的　筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法　应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果　噬菌体经富集后 ,从随机挑选的 12个克隆中得到 2个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过序列同源性分析 ,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶 5 (MAPKAPK5 )。结论　用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白 ,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 噬菌体展示技术 C型肝炎样病毒属 病毒非结构蛋白质类 基因文库

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非洲猪瘟病毒编码蛋白H240R稳定了正常的病毒粒子形态结构 被引量：8

9

作者 ZHOU PING-PING LI LIAN-FENG ZHANG KE- HUI 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期111-111,共1页

非洲猪瘟(ASF)是严重危害全球养猪业的一种烈性传染病,目前尚无疫苗可用。该病的病原,非洲猪瘟病毒(ASFV),是一种核质大DNA病毒。虽然感染性ASFV颗粒的结构蛋白已经被解析,但大多数病毒结构蛋白的定位及其功能仍然未知。ASFV编码一个主... 非洲猪瘟(ASF)是严重危害全球养猪业的一种烈性传染病,目前尚无疫苗可用。该病的病原,非洲猪瘟病毒(ASFV),是一种核质大DNA病毒。虽然感染性ASFV颗粒的结构蛋白已经被解析,但大多数病毒结构蛋白的定位及其功能仍然未知。ASFV编码一个主要的衣壳蛋白p72和多个小的衣壳蛋白M1249L、p17和p49。已有文献表明,缺失p72和p17的ASFV不能进行衣壳的组装,缺失pB438L的ASFV产生了异常形态的病毒粒子且不具有感染性,而H240R在ASFV复制周期中的功能是未知的。 展开更多

关键词 烈性传染病 非洲猪瘟病毒 病毒结构蛋白 衣壳蛋白 DNA病毒 养猪业 病毒粒子 复制周期

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细小病毒非结构蛋白基因转染对胃癌细胞株细胞因子表达的影响 被引量：1

10

作者 沈锡中 虞冠华 +1 位作者 江绍基 萧树东 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第3期203-206,共4页

将可诱导表达的细小病毒非结构蛋白基因转染入人低分化胃腺癌细胞株MKN-45,该基因诱导表达后部分宿主细胞死亡,成活细胞生长特性发生显著改变,如细胞间粘附力增强,倍增时间延长,裸鼠体内成瘤能力下降。RNA斑点印迹显示非结构蛋白基因的... 将可诱导表达的细小病毒非结构蛋白基因转染入人低分化胃腺癌细胞株MKN-45,该基因诱导表达后部分宿主细胞死亡,成活细胞生长特性发生显著改变,如细胞间粘附力增强,倍增时间延长,裸鼠体内成瘤能力下降。RNA斑点印迹显示非结构蛋白基因的表达能明显增加胃癌细胞白细胞介素-1α,白细胞介素-1β和白细胞介素6核因子表达,而对白细胞介素6表达无影响。提示细小病毒的抗肿瘤作用部分可能是由其非结构蛋白影响肿瘤细胞的细胞因子表达所介导的。 展开更多

关键词 细小病毒非结构蛋白 基因转染 胃癌 细胞株 细胞因子 表达 癌细胞

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达

11

作者 陈立冬 成军 +3 位作者 洪源 张连峰 韩莉 郭江 《临床肝胆病杂志》 CAS 2010年第4期371-373,共3页

目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体(NS5ATP4A)的原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增NS5ATP4A基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP4A表达重组体,转化DH5α和BL21菌,经IPTG诱导。SDS-PAGE分析,Wester... 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体(NS5ATP4A)的原核表达载体并进行表达。方法用PCR扩增NS5ATP4A基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP4A表达重组体,转化DH5α和BL21菌,经IPTG诱导。SDS-PAGE分析,Western Blot验证蛋白带。结果成功构建大肠杆菌原核表达载体。经IPTG诱导,得到了目的蛋白分子量为35kD,用Western Blot证实其具有良好的抗原性。结论构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP4A,为抗原的制备及临床检测奠定了基础。 展开更多

关键词 病毒非结构蛋白质类 基因表达 肝炎病毒 肝炎 丙型

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克山病患者心肌中肠道病毒Vp1结构蛋白检测

12

作者 钟学宽 周令望 +1 位作者 刘艺 张红毅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1452-1452,共1页

关键词 克山病 心肌 检测 肠道病毒感染 肠道病毒Vp1结构蛋白

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鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1内保守序列LLRKxGxKG的功能研究

13

作者 林磊 吴晓燕 +1 位作者 常国辉 祝庆余 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期508-512,共5页

目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质... 目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质粒转染L929细胞,经新城疫病毒(NDV)刺激诱导后,采用ELISA法检测IFN-β的表达水平,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β表达的影响。通过与含CAT和Luc报告基因的重组质粒进行共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β启动子活性和干扰素刺激应答元件(ISRE)活性的影响。通过与三种报告基因(pRLuc-CMV、pGL3-basic、pGL3-control)共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对共转染基因表达的影响。结果MHVNSP1对真核细胞产生干扰素有一定的影响,并可显著抑制IFN-β启动子或ISRE应答元件的活性,且该抑制作用不受LLRKxGxKG序列缺失的影响。同时,MHVNSP1还可强烈抑制多种共转染报告基因的表达。该抑制作用在LLRKxGxKG序列缺失后显著降低。结论MHVNSP1对Ⅰ型干扰素信号通路有特异的抑制作用。LLRKxGxKG序列是MHVNSP1的一个重要功能域,在抑制共转染基因表达过程中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 冠状病毒属 肝炎病毒 鼠 病毒非结构蛋白质类 保守序列

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丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的研究进展

14

作者 陈庆美 唐霓 《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第5期398-401,共4页

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的非甲-非乙型肝炎,是慢性肝病的主要原因之一。HCV编码至少10种成熟蛋白,而非结构蛋白5A(NS5A)是其重要蛋白之一。磷酸化的NS5A与病毒的复制密切相关,参与病毒的产生和释放,并且能够通过病毒和宿主... 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的非甲-非乙型肝炎,是慢性肝病的主要原因之一。HCV编码至少10种成熟蛋白,而非结构蛋白5A(NS5A)是其重要蛋白之一。磷酸化的NS5A与病毒的复制密切相关,参与病毒的产生和释放,并且能够通过病毒和宿主细胞的相互作用,干扰细胞内重要信号通路,影响细胞周期和免疫系统,最终促使HCV相关慢性肝病的发生与发展。本文就NS5A的生物学功能及其作用机制的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 病毒非结构蛋白质类

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利用DNA免疫技术制备抗登革2型病毒NS2B蛋白多克隆抗体 被引量：4

15

作者 刘丽梅 陈宗涛 +5 位作者 高娜 田衍平 陈炜 张俊磊 王嘉丽 安静 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期327-330,共4页

目的构建登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)非结构蛋白NS2B的真核表达质粒pCAGGS-P7/NS2B,进行DNA免疫,制备小鼠抗NS2B特异性多克隆抗体。方法PCR扩增DV2-NS2B基因片段,构建真核表达载体pCAGGS-P7/NS2B,采用脂质体介导的方法转染... 目的构建登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)非结构蛋白NS2B的真核表达质粒pCAGGS-P7/NS2B,进行DNA免疫,制备小鼠抗NS2B特异性多克隆抗体。方法PCR扩增DV2-NS2B基因片段,构建真核表达载体pCAGGS-P7/NS2B,采用脂质体介导的方法转染Vero细胞,检测目标蛋白的表达。用该表达质粒免疫BALB/c小鼠,制备抗NS2B抗血清。结果成功构建真核表达重组质粒pCAGGS-P7/NS2B,该重组质粒具有良好的免疫原性,免疫小鼠后所获的抗血清,抗体效价达1∶3200,Western blot和间接免疫荧光证实抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。结论通过DNA免疫所制备小鼠抗DV2-NS2B抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。 展开更多

关键词 登革热病毒 病毒非结构蛋白质类 NS2B 小鼠 近交BALBC

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析 被引量：1

16

作者 李波 李伯安 +6 位作者 侯俊 胡艳 曲芬 郭桐生 马洪滨 貌盼勇 毛远丽 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期391-393,共3页

目的将乙型脑炎病毒NS1蛋白基因克隆至pET28-a(+)表达载体,构建原核表达载体pET-NS1,并使该基因在E.coli中高效表达,为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法根据GenBank中提供的乙型脑炎病毒SA14-14-2株全基因序列设计引物,通过反... 目的将乙型脑炎病毒NS1蛋白基因克隆至pET28-a(+)表达载体,构建原核表达载体pET-NS1,并使该基因在E.coli中高效表达,为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法根据GenBank中提供的乙型脑炎病毒SA14-14-2株全基因序列设计引物,通过反转录及巢式PCR方法扩增目的片段,测序后连接pET28-a(+)载体,构建重组表达载体pET-NS1,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增出了1300bp的基因片段,与预期大小一致,测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1蛋白基因序列同源性为100%,成功克隆至表达载体pET28-a(+)并获得高效表达,表达产物分子量约为45kD,Western blot分析表明该表达产物具有良好抗原性。结论该表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性为乙脑的诊断试剂开发提供了依据。 展开更多

关键词 病毒非结构蛋白质类 克隆 分子 基因表达 抗原性

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VP1蛋白可作为禽脑脊髓炎病毒的有效保护性免疫原

17

《中国家禽》 北大核心 2008年第6期63-63,共1页

禽脑脊髓炎病毒（AEV）是一种重要的家禽病原，是一种小核糖核酸病毒。英国科学家通过重组病毒VP1，VP0，VP3蛋白在杆状病毒系统中的表达研究了禽脑脊髓炎病毒结构蛋白的保护性免疫诱导。体内保护实验表明，VP1蛋白是一个针对禽脑脊髓... 禽脑脊髓炎病毒（AEV）是一种重要的家禽病原，是一种小核糖核酸病毒。英国科学家通过重组病毒VP1，VP0，VP3蛋白在杆状病毒系统中的表达研究了禽脑脊髓炎病毒结构蛋白的保护性免疫诱导。体内保护实验表明，VP1蛋白是一个针对禽脑脊髓炎病毒的主要宿主保护性免疫原，病毒中和试验进一步表明， 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎病毒 保护性免疫 P1蛋白 免疫原 病毒结构蛋白 杆状病毒系统 病毒中和试验 小核糖核酸

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登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

18

作者 梅竹 邓永强 +4 位作者 曹飞 于曼 朱舜亚 秦成峰 秦鄂德 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期659-661,共3页

目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋... 目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白,并通过透析对目的蛋白进行复性;纯化复性后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光法测定抗体效价。结果成功构建了高效表达登革1型病毒NS1蛋白的原核表达载体,表达的重组NS1蛋白占菌体蛋白总量的50%以上,以包涵体形式存在;免疫印迹表明表达的重组NS1蛋白能够为登革病毒兔抗血清识别,纯化后纯度可达95%以上;免疫小鼠后获得了效价>1∶1000的抗登革病毒NS1蛋白的鼠多克隆抗体。结论原核表达的重组NS1蛋白具有良好的免疫原性,诱导产生的多克隆抗体能够有效识别天然NS1蛋白,为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 登革热病毒 病毒非结构蛋白质类 重组表达 抗体

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HCV非结构蛋白5A对HIV长末端重复序列影响的初步探讨

19

作者 彭米林 肖新强 +6 位作者 蒋永芳 田沂 许允 张旻 王文龙 彭锋 龚国忠 《临床肝胆病杂志》 CAS 2014年第2期136-140,共5页

目的本研究拟探讨HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HIV长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)影响,从而为HCV对HIV的影响提供实验依据。方法将构建的LTR启动子驱动的荧光素酶(Luc)报告基因表达质粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCV NS5A基因的表达质粒... 目的本研究拟探讨HCV非结构蛋白5A(NS5A)对HIV长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)影响,从而为HCV对HIV的影响提供实验依据。方法将构建的LTR启动子驱动的荧光素酶(Luc)报告基因表达质粒(pGL3-LTR-Luc)和含HCV NS5A基因的表达质粒pCNS5A共转染肝癌细胞株(Huh7细胞),采用免疫细胞化学技术、Western Blot及逆转录聚合酶链反应检测HCV NS5A蛋白及mRNA的表达;本实验分三组,将质粒pGL3-LTR-Luc(空白组)、质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc(对照组)、质粒pCNS5A+pGL3-LTR-Luc(实验组)分别转染Huh7细胞,48 h后收集细胞,采用Luc活性检测LTR的活性,以观察HCV NS5A对LTR的调控影响。所得荧光活性值以均数±标准差表示,采用Levene's方差齐性检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较行LSD-t检验。结果转染pcNS5A质粒的Huh7细胞质经RT-PCR及Western Blot检测,HCV NS5A mRNA及蛋白在细胞中获得表达。方差分析结果提示LTR荧光活性在三组间有明显的差异(F=7.876,P=0.002),进一步比较各组间的差异,结果提示共转染质粒pcNS5A+pGL3-LTR-Luc组的Huh7细胞中Luc相对活性(22 476±4471)明显高于单转染pGL3-LTR-Luc组(15 887±3039,P=0.002)及共转染质粒pRc/CMV+pGL3-LTR-Luc组(16 321±4162,P=0.008),差异有统计学意义。结论表达HCV NS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞;HCV NS5A蛋白能激活HIV LTR,提示HCV NS5A可能为HCV促进HIV复制的分子机制之一。 展开更多

关键词 肝炎病毒属 HIV 病毒非结构蛋白质类 HIV长末端重复序列

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禽呼肠病毒基因组及其编码蛋白研究进展 被引量：1

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作者 谭伟 谢丽基 谢芝勋 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期165-170,共6页

呼肠病毒能感染鸡、火鸡和番鸭等禽类,主要引起雏鸡病毒性关节炎和腱鞘炎、矮小综合征和吸收障碍综合征及免疫抑制,以及雏番鸭肝坏死等。与哺乳动物呼肠病毒相比,禽呼肠病毒分子生物学方面的研究起步相对较晚。论文阐述了禽呼肠病毒的... 呼肠病毒能感染鸡、火鸡和番鸭等禽类,主要引起雏鸡病毒性关节炎和腱鞘炎、矮小综合征和吸收障碍综合征及免疫抑制,以及雏番鸭肝坏死等。与哺乳动物呼肠病毒相比,禽呼肠病毒分子生物学方面的研究起步相对较晚。论文阐述了禽呼肠病毒的基因组结构及其所编码蛋白的结构与功能,为该病毒的研究提供参考。 展开更多

关键词 禽呼肠病毒 病毒基因组 病毒蛋白的结构及功能

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