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猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
1
作者
郭宏伟
刘妍
+4 位作者
赵绪永
龚婷
马辉
刘薇
郑鸣
《中国兽医杂志》
2025年第9期44-52,共9页
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN...
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达,在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能力及对病毒核衣壳蛋白(N)基因mRNA转录和复制的影响,筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示,pAPN1-Fc、pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc和pAPN_(5)-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达,并可与pAPN兔多克隆抗体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果显示,pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc、pAPN_(5)-Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性,且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV,其中pAPN_(2)(574~678aa)和pAPN_(3)(669~773aa)区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫荧光共聚焦试验结果显示,融合蛋白pAPN_(2)和pAPN_(3)-Fc抑制PEDV和TGEV N基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明,pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV,并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力,pAPN 574~773aa可能是PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。
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关键词
猪氨基肽酶N
肠道冠状
病毒
Fc融合表达
病毒结合活性
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题名
猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
1
作者
郭宏伟
刘妍
赵绪永
龚婷
马辉
刘薇
郑鸣
机构
河南牧业经济学院食品与生物工程学院
出处
《中国兽医杂志》
2025年第9期44-52,共9页
基金
河南省科技攻关项目(222102110158)
河南省自然科学基金面上科学基金项目(252300420187)
河南省重点研发专项项目(251111110700)。
文摘
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达,在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能力及对病毒核衣壳蛋白(N)基因mRNA转录和复制的影响,筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示,pAPN1-Fc、pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc和pAPN_(5)-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达,并可与pAPN兔多克隆抗体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果显示,pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc、pAPN_(5)-Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性,且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV,其中pAPN_(2)(574~678aa)和pAPN_(3)(669~773aa)区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫荧光共聚焦试验结果显示,融合蛋白pAPN_(2)和pAPN_(3)-Fc抑制PEDV和TGEV N基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明,pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV,并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力,pAPN 574~773aa可能是PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。
关键词
猪氨基肽酶N
肠道冠状
病毒
Fc融合表达
病毒结合活性
Keywords
porcine aminopeptidase N
intestinal coronavirus
Fc-fusion expression
viral binding activity
分类号
S852.4 [农业科学]
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题名
作者
出处
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1
猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
郭宏伟
刘妍
赵绪永
龚婷
马辉
刘薇
郑鸣
《中国兽医杂志》
2025
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