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腺病毒滴度不同测定方法比较
被引量：
21
1
作者
孙鹏宇
张艳玲
+6 位作者
荆玉明
张信基
张哲欢
黎诚耀
陈白虹
谭万龙
李红卫
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期234-238,共5页
目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CB...
目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。
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关键词
腺
病毒
病毒滴度测定
壳蛋白免疫法
绿色荧光蛋白
荧光定量PCR
细胞病变法
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职称材料
经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究
被引量：
15
2
作者
江千里
王健民
+2 位作者
江汕
温丽敏
周虹
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第10期1101-1103,共3页
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl...
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;
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关键词
经典方法
LaSRT法
测定
绿色荧光蛋白
病毒滴度测定
法
基因重组逆转录
病毒
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职称材料
草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究
被引量：
2
3
作者
曾令兵
袁明雄
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2000年第4期40-41,共2页
关键词
草鱼
出血病
病毒
高
滴
价培养方法
病毒滴度测定
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职称材料
题名
腺病毒滴度不同测定方法比较
被引量：
21
1
作者
孙鹏宇
张艳玲
荆玉明
张信基
张哲欢
黎诚耀
陈白虹
谭万龙
李红卫
机构
南方医科大学南方医院泌尿外科
南方医科大学生物技术学院
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第2期234-238,共5页
基金
国家自然科学基金(81072113)
有害生物控制与资源利用国家重点实验室开放课题(SKLBC2010K05)~~
文摘
目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。
关键词
腺
病毒
病毒滴度测定
壳蛋白免疫法
绿色荧光蛋白
荧光定量PCR
细胞病变法
Keywords
adenovirus
titer
immunoassay
green fluorescent protein
real-time PCR
cytopathic effect
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究
被引量：
15
2
作者
江千里
王健民
江汕
温丽敏
周虹
机构
第二军医大学长海医院血液科
南京医科大学病理教研室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003年第10期1101-1103,共3页
基金
国家自然科学基金(30172347)
上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划(98BR029)~~
文摘
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;
关键词
经典方法
LaSRT法
测定
绿色荧光蛋白
病毒滴度测定
法
基因重组逆转录
病毒
Keywords
flow cytometry
recombinant retrovirus
virus titration method
green fluorescence protein
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究
被引量：
2
3
作者
曾令兵
袁明雄
机构
华中理工大学生命科学与技术学院
出处
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2000年第4期40-41,共2页
关键词
草鱼
出血病
病毒
高
滴
价培养方法
病毒滴度测定
分类号
S943.112 [农业科学—水产养殖]
S941.411 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
腺病毒滴度不同测定方法比较
孙鹏宇
张艳玲
荆玉明
张信基
张哲欢
黎诚耀
陈白虹
谭万龙
李红卫
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
21
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究
江千里
王健民
江汕
温丽敏
周虹
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2003
15
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
草鱼出血病病毒高滴度培养方法的研究
曾令兵
袁明雄
《淡水渔业》
CSCD
北大核心
2000
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
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