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基于RTCPA-CRISPR/Cas12a的牛病毒性腹泻病毒检测方法的建立及应用
1
作者 蒙琦 常亮 +2 位作者 杨明 曹映辉 贺泂杰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期80-88,共9页
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,... 本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础,设计CPA特异性引物。同时,依据CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物,并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系,此外,借助建立的该方法,开展了临床样品的检测。结果显示:所建立的检测方法对BVDV的最低检出限为8.0 copies/μL,并具有高度特异性,对42份临床样品检测显示,该方法与传统PCR方法的一致性好,符合率能达到92.86%。该研究建立了牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a检测方法,为该病的诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 交叉引物恒温扩增技术 CRISPR/Cas12a 灵敏度 特异性
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青海海北地区牦牛病毒性腹泻病毒流行病学调查及5′-UTR遗传进化分析 被引量：2
2
作者 林伟山 马豆豆 +6 位作者 雷萌桐 魏斌 李国才 王光华 王戈平 简莹娜 李秀萍 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1241-1249,共9页
【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UT... 【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UTR保守区域,建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法,并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测。选取4份BVDV阳性样品,对BVDV 5′-UTR区域序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对,并基于BVDV 5′-UTR区域进行遗传进化分析。【结果】本研究基于BVDV 5′-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线相关系数(R^(2))为0.997,标准品浓度为2.69×10^(2)~2.69×10^(9)拷贝/μL时具有良好的线性关系,最小检出限为2.69×10^(2)拷贝/μL。重复性试验结果显示,变异系数均<1.7%,具有良好的重复性和稳定性。采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV阳性率分别为45.00%、36.00%、30.77%和29.00%。BVDV 5′-UTR序列比对结果显示,分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支,核苷酸序列相似性为76.6%~99.7%。【结论】本研究明确了BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一,为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据,同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据,为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础。 展开更多
关键词 牦牛 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 流行病学 实时荧光定量PCR 遗传进化分析
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牛病毒性腹泻病毒1型E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法的建立 被引量：1
3
作者 刘鑫欢 张纹纹 +8 位作者 程子龙 金前跃 郭志睿 郭大伟 龙云凤 杨蕾蕾 刘茂军 白娟 李文良 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1100-1107,共8页
[目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(... [目的]本研究旨在使用金-银纳米颗粒标记纯化的牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)重组E2蛋白,建立基于金-银纳米颗粒的E2蛋白抗体侧流免疫层析检测方法。[方法]对金-银纳米颗粒标记条件进行优化,选取2 mg·mL^(-1)的金黄色葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A,SPA)和BVDV-1单克隆抗体1E2B3包被于硝酸纤维素(NC)膜上,分别作为检测线(test line,T线)和质控线(control line,C线),对反应条件进行优化后建立侧流免疫层析检测方法。[结果]金-银纳米颗粒最佳标记条件:以pH7.4的硼酸-硼砂缓冲液作为金-银纳米颗粒的溶剂;最佳标记蛋白浓度为10μg·mL^(-1)。优化后的侧流免疫层析检测方法的反应条件:2 mg·mL^(-1)的SPA作为T线,0.6 mg·mL^(-1)的1E2B3作为C线,待检血清稀释度为1∶50。特异性试验结果表明建立的金-银纳米颗粒免疫层析试纸条不与猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛支原体和布鲁氏菌阳性血清发生交叉反应。敏感性试验结果显示,将BVDV阳性血清(中和抗体效价为1∶2048)稀释512倍时金-银纳米颗粒免疫层析试纸条仍可检出。使用金-银纳米颗粒免疫层析试纸条检测125份牛血清,并与中和试验结果比较,两者阴性血清符合率为100%,阳性血清符合率为96.04%,总体符合率为96.80%。[结论]本试验基于金-银纳米颗粒建立的免疫层析抗体检测方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便快捷的特点,为快速检测BVDV-1抗体提供了有力的技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 抗体 金-银纳米颗粒 侧流免疫层析方法
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牛病毒性腹泻病毒1型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用
4
作者 刘飞飞 杨澳飞 +7 位作者 贾东鹭 韩新雨 陈慧敏 陈建 魏颖 丁轲 张春杰 陈松彪 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期363-369,共7页
为建立牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参考GenBank中的不同BVDV-1序列,设计并合成Npro基因保守区域特异性引物,以重组质粒标准品作为模板对反应体系进行优化,初步建立一种BVDV-1特异性SYBR GreenⅠ... 为建立牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参考GenBank中的不同BVDV-1序列,设计并合成Npro基因保守区域特异性引物,以重组质粒标准品作为模板对反应体系进行优化,初步建立一种BVDV-1特异性SYBR GreenⅠRT-qPCR方法,结果显示,RT-qPCR方法的最适退火温度为55℃,最佳引物终浓度为0.4μmol/L;质粒标准品浓度在5.46×10^(1)拷贝/μL~5.46×10^(7)拷贝/μL之间与各自的Ct值具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.2011x+33.6,R^(2)=0.9975,熔解曲线为单一峰值;以BVDV-1、牛病毒性腹泻病毒2型、牛病毒性腹泻病毒3型、边界病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒等的RNA反转录所得cDNA以及大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌总DNA为模板,采用本研究建立的RT-qPCR方法检测,评估该方法的特异性;分别以10倍倍比稀释(10^(1)~10^(9))的pMD19-T-Npro重组质粒标准品作为模板,利用本研究建立的方法与普通RT-PCR方法检测,比较所建方法的敏感性;以5个不同浓度的重组质粒标准品pMD19-T-Npro作为模板,利用RT-qPCR方法分别于同一时间和不同时间分别进行批内和批间重复性试验,评估该方法的重复性。特异性试验结果显示,该方法仅对BVDV-1有特异性扩增曲线,牛病毒性腹泻病毒2型、牛病毒性腹泻病毒3型、边界病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对质粒标准品的检测限为5.46×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;对重组质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。采用本研究建立的RT-qPCR方法和文献中的BVDV-1 RT-qPCR方法分别对50份腹泻牛粪便样品检测,结果显示,两种方法的阳性检出率均为16%(8/50),总符合率达100%。本研究建立的RT-qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为BVDV临床快速检测、流行病学调查及疫病防控工作提供了新的技术支撑和思路。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒1型 Npro基因 荧光定量RT-PCR 应用
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2022—2024年中国部分地区牛病毒性腹泻病毒分子检测及基因分型
5
作者 安乐乐 任晓婷 +5 位作者 蓝秋菊 莫永利 曹小安 丁玉林 马忠仁 马晓霞 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5328-5334,共7页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛群中重要经济损失的病毒之一,尤其对幼牛的健康和发展造成了严重影响。本试验旨在建立通用型BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(BVDV SYBR GreenⅠqPCR)方法并对中国部分地区散养牛群样本进行病原学检测,掌握中国部分地区散养牛群BVDV感染情况、流行基因型及亚型。依据GenBank不同基因亚型BVDV 5′UTR序列建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法。使用该方法对2022年6月—2024年12月采集的712份散养牛血清样本及咳嗽、发烧、拉稀症状犊牛组织样本进行检测及遗传进化分析,同时对犊牛样本进行病毒分离、间接免疫荧光(IFA)鉴定和苏木精-伊红染色法(HE染色)观察。结果显示,建立的BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法标准曲线的线性关系良好、敏感性高、特异性强和重复性好。散养牛血清样本阳性率为19.10%,并成功分离BVDV-24GS毒株。在5′UTR基因系统进化树分析中,BVDV基因亚型包括1c、1m、1o、1i、1q、1b和2。以上结果表明,成功建立通用型BVDV SYBR GreenⅠqPCR方法并实施初步检测,中国部分地区散养牛群中均存在不同程度BVDV感染,病毒基因分型鉴定丰富了BVDV的分子流行病学基础数据,为BVDV的科学防控、疫苗研制和免疫策略优化提供了依据。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 分子检测 基因分型鉴定
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宁夏地区部分规模化牛场牛病毒性腹泻病毒分离鉴定
6
作者 王雅诗 张祥胤 +5 位作者 张冯禧 舒金琪 王向阳 高娟 赵晓民 常玲玲 《动物医学进展》 北大核心 2025年第8期127-132,共6页
牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检... 牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的一种传染病。为了解宁夏地区规模化牛场BVD的流行情况,2023年采集了宁夏地区53个牛场的血液及肛拭子样品共计963份,进行RT-PCR检测,然后利用MDBK细胞对阳性样品分离纯化病毒。结果显示,宁夏地区BVDV的核酸阳性率为2.81%(27/963),牛场感染率为11.32%(6/53);5′UTR遗传进化分析结果显示主要有BVDV-1a、BVDV-1h、BVDV-1r和BVDV-1l共4种基因亚型。RT-PCR阳性样品经MDBK细胞盲传8代未出现细胞病变,荧光定量PCR测定病毒液Ct值,代入制定的BVDV标准曲线测得拷贝数为1.136×10^(6)copies/mL,间接免疫荧光呈BVDV E2蛋白抗原阳性。研究明确了宁夏地区牛场BVDV流行的主要基因亚型,并获得1株纯化的非细胞病变型BVDV-1a野毒株,为后续深入BVDV致病机制研究提供基础资料。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 分离 鉴定 规模化牛场
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及捕获ELISA检测方法的建立
7
作者 宋京格 周佳莹 +5 位作者 夏欣悦 王孟孟 李园 宋厚辉 徐义刚 王静 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期473-479,共7页
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,本研究采用纯化的BVDV作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选获得一株稳定分泌单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株5C7,采用抗体分型试剂盒鉴定其亚类为IgG2α,经IFA鉴定显示MAb 5C7能够特异性识别BVDV,利用间接ELISA测定其抗体效价为1:10^(6)。利用该BVDV特异性MAb作为检测抗体,兔源BVDV E2蛋白多克隆抗体(PAb)作为捕获抗体,经各反应条件的优化,建立了检测BVDV的抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法。采用该方法分别检测BVDV、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型等病毒,分析该方法的特异性;将10^(6.7)TCID_(50)的BVDV 10倍倍比稀释(10^(0)~10^(6)倍)稀释后,采用建立的AC-ELISA检测,评估该方法的敏感性;利用同一批次和不同批次E2蛋白PAb包被的酶标板,采用建立的AC-ELISA方法检测BVDV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能检测到BVDV,与其余病毒均无交叉反应;对病毒BVDV的检测限为10~2TCID_(50);批内、批间重复性试验的变异系数均小于5%。利用该方法对618份牛血清和352份腹泻犊牛粪便样品检测,结果显示两种样品的阳性检出率分别为25.7%(159/618)和38.9%(137/352),与RT-PCR方法检测结果的符合率均达100%。此外,RT-PCR分析显示,阳性样品中BVDV-1的检出率为29.6%,为主要流行基因型,BVDV-2的检出率为0.9%。本研究建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可有效用于BVDV的检测,为BVDV的流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 抗原捕获ELISA E2蛋白 单克隆抗体
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牛病毒性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
8
作者 王亚新 陈萌萌 +4 位作者 王露 李欣 赵洪哲 温永俊 王凤雪 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期131-138,共8页
为建立一种针对牛病毒性腹泻病毒的检测方法,本研究针对牛病毒性腹泻病毒的5'UTR设计特异性引物及TaqMan探针,进行扩增,进而构建阳性重组质粒。经过条件优化建立了牛病毒性腹泻病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:建立的实... 为建立一种针对牛病毒性腹泻病毒的检测方法,本研究针对牛病毒性腹泻病毒的5'UTR设计特异性引物及TaqMan探针,进行扩增,进而构建阳性重组质粒。经过条件优化建立了牛病毒性腹泻病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示:建立的实时荧光定量PCR检测方法在阳性标准质粒拷贝数在1×10^(4)~1×10^(8)拷贝/μL时,线性关系良好,线性相关系数R2=0.998;该方法最低检测限为10拷贝/μL;可以特异性检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV),与牛冠状病毒(BCV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3),以及牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)不发生交叉反应,病毒滴度与拷贝数线性关系良好,线性相关系数R2=0.997;与商品化检测试剂盒的符合率为97.5%。该方法为牛病毒性腹泻病毒的早期快速诊断提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 TaqMan荧光定量PCR 5'UTR
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牛病毒性腹泻病毒研究进展
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作者 高进东 匡磊 +6 位作者 刘诗汝 张恬钰 高翎珈 尹金花 张梦迪 吴兴 胡长敏 《现代畜牧科技》 2025年第7期118-121,共4页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是对牛养殖业危害严重的病毒之一。该文从病毒学特征、流行病学、发病机制、诊断方法、治疗与防控以及最新研究成果等多方面对BVDV进行全面综述,旨在深入阐述该病毒的研究现状,为相关领域的科研人员、兽医从业者... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是对牛养殖业危害严重的病毒之一。该文从病毒学特征、流行病学、发病机制、诊断方法、治疗与防控以及最新研究成果等多方面对BVDV进行全面综述,旨在深入阐述该病毒的研究现状,为相关领域的科研人员、兽医从业者以及养殖者提供系统的知识参考,以促进对牛病毒性腹泻的深入研究、有效诊断、科学防控以及新型治疗措施的开发。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 诊断 治疗 防控
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牛病毒性腹泻病毒和牛肠道病毒二重PCR检测方法的建立及病原学分析
10
作者 闫志浩 杨柳菲 +4 位作者 曹馨月 杨钦 李世玲 杨梦晗 陈红英 《养殖与饲料》 2025年第10期52-56,共5页
[目的]为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛肠道病毒(BEV)的早期诊断及防控提供技术支持。[方法]在靶向BVDV和BEV 5’-UTR保守区,各设计1对特异性引物,建立1种能同时检测BVDV和BEV的二重PCR方法,运用该方法对2024-2025年采自河南、四川以及河... [目的]为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛肠道病毒(BEV)的早期诊断及防控提供技术支持。[方法]在靶向BVDV和BEV 5’-UTR保守区,各设计1对特异性引物,建立1种能同时检测BVDV和BEV的二重PCR方法,运用该方法对2024-2025年采自河南、四川以及河北等地牛场患腹泻牛的50份粪便样品进行检测并进行遗传进化分析,评估该方法的特异性和灵敏度。[结果]该方法能同时扩增BVDV的223 bp和BEV的96 bp,而对其他的常见牛病原核酸扩增均为阴性。BVDV和BEV的最低检测值分别为815 copies/μL和783 copies/μL。在50份粪便样品中,BVDV和BEV的检出率分别为68%、42%,二者混合感染率为24%。测序获得12株BVDV和12株BEV的5′-UTR序列。遗传分析显示,获得的12株BVDV均属于BVDV-1m亚型。12株BEV中,有10株属于BEV-F种,余下2株属于BEV-E种。[结论]成功建立1种BVDV和BEV二重PCR检测方法,且我国部分省份牛场中主要流行的是BVDV-1m亚型和BEF-F种。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛肠道病毒 二重PCR 遗传进化
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不同生物型牛病毒性腹泻病毒NS4B蛋白的生物信息学分析 被引量：1
11
作者 吴树康 梁滋旺 +3 位作者 姜伟 金彩虹 陈岩 郭明佳 《中国动物检疫》 2025年第2期108-113,共6页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种引起牛病毒性腹泻的高度致死性病原,根据生物型不同可分为致细胞病变型(CP)及非致细胞病变型(NCP)2种。本研究通过多种生物信息学方法,对这2种生物型BVDV毒株NS4B蛋白的差异及相似性进行了比较。结果显示:... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种引起牛病毒性腹泻的高度致死性病原,根据生物型不同可分为致细胞病变型(CP)及非致细胞病变型(NCP)2种。本研究通过多种生物信息学方法,对这2种生物型BVDV毒株NS4B蛋白的差异及相似性进行了比较。结果显示:2种生物型BVDV的NS4B蛋白均属于不含信号肽和跨膜区的不稳定性疏水蛋白,其N端具有较高变异性;亚细胞定位预测发现,NS4B蛋白不含有线粒体导肽(mTP)或分泌通道信号肽(SP),且定位在内质网和线粒体中的概率最高;高级结构预测发现,2种生物型NS4B蛋白的二级与三级结构相似,均以α-螺旋为主;B细胞抗原表位分析发现,NCP型BVDV含有8个B细胞抗原表位肽段,CP型含有9个;蛋白翻译后修饰预测发现,NCP型BVDV具有1个特异性N-糖基化修饰位点,NCP型BVDV具有36个潜在的磷酸化修饰位点,而CP型具有35个。结果表明:2种生物型BVDV NS4B蛋白的基本理化性质及蛋白质结构相似性较高,但亚细胞定位情况和蛋白翻译后修饰有所不同,推测N端氨基酸序列的高突变性及蛋白翻译后修饰的不同可能会影响不同生物型BVDV与发病动物临床症状之间的关系。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 NS4B蛋白 生物信息学 遗传变异
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山东地区牛病毒性腹泻病毒遗传进化分析及临床毒株分离鉴定
12
作者 李树凡 张宇名 +5 位作者 陈志远 迟丽丽 刘健 于泽海 张玫瑜 徐守振 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期153-161,共9页
为了解山东地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)遗传进化情况,本研究采用RT-PCR对2019—2021年山东地区10个地市27家规模化奶牛场收集的76份BVDV阳性样品进行5UTR及部分阳性样品E2扩增,并构建系统进化树及选取部分阳性样品中的病毒... 为了解山东地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)遗传进化情况,本研究采用RT-PCR对2019—2021年山东地区10个地市27家规模化奶牛场收集的76份BVDV阳性样品进行5UTR及部分阳性样品E2扩增,并构建系统进化树及选取部分阳性样品中的病毒进行分离鉴定。结果显示:76份样品中存在BVDV-1a、1c、1m、1o、1q和1v 6种BVDV 1型亚型;在筛选到的32株代表毒株中优势亚型为BVDV-1m(37.5%),其次为BVDV-1q(25.00%)和1v(15.63%);济南、德州及烟台地区BVDV亚型流行情况较其他地区复杂;成功分离得到1株致细胞病变型BVDV毒株。结果表明,山东地区规模化奶牛场存在众多BVDV亚型流行,应采取相应措施对该病进行综合防控。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 系统进化树 分离鉴定
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牛病毒性腹泻病毒NS5A结构域与核糖体内部进入位点的相互作用
13
作者 高明阳 杨宣叶 +3 位作者 胡欣妍 王进千 吴玉湖 周建华 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第8期137-145,共9页
【目的】探究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viru,BVDV)NS5A的3个结构域与核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的相互作用。【方法】采用PCR法扩增Ⅰ型BVDV病毒NS5A基因的3个结构域DomainⅠ、DoaminⅡ和Do... 【目的】探究牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea viru,BVDV)NS5A的3个结构域与核糖体内部进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的相互作用。【方法】采用PCR法扩增Ⅰ型BVDV病毒NS5A基因的3个结构域DomainⅠ、DoaminⅡ和DomainⅢ片段,分别连接到pET-28a(+)载体上,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,对表达产物进行Western Blot鉴定,并用镍柱法进行纯化。PCR扩增IRES DNA,转录获得IRES RNA。使用生物层干涉法(BLI)生物传感器(Gator Bio.)分子互作分析仪器对NS5A 3个结构域与IRES RNA的相互作用进行分析。【结果】成功表达并纯化了DomainⅠ、DoaminⅡ和DomainⅢ结构域重组蛋白,其质量浓度依次为76.2,96.8和57.7μg/mL。体外转录获得了IRES RNA,其质量浓度为2056.2μg/mL。互作分析结果表明,NS5A的3个功能结构域中,只有DomainⅡ与IRES具有明显的相互作用,且这种互作存在快结合快解离的现象,其与IRES的亲和力为7.93×10-6μmol/L。【结论】BVDV NS5A蛋白是调控IRES起始翻译的重要蛋白,其主要作用部位为DomainⅡ。 展开更多
关键词 NS5A蛋白 牛 核糖体内部进入位点 牛病毒性腹泻病毒复制
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牛、羊、猪感染牛病毒性腹泻病毒的临床症状、鉴别诊断和防控
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作者 王建宾 果磊 《畜牧兽医科技信息》 2025年第8期36-38,共3页
为提升养殖效率,简化养殖,现阶段对牛、羊、猪等家畜在养殖时多采用规模化与集约化养殖。尽管整体优势显著,但实际上在养殖过程中疫病具有较高发病率,其中以牛病毒性腹泻病毒为典型,轻则对家畜生长发育产生抑制,重则导致其死亡。因此,... 为提升养殖效率,简化养殖,现阶段对牛、羊、猪等家畜在养殖时多采用规模化与集约化养殖。尽管整体优势显著,但实际上在养殖过程中疫病具有较高发病率,其中以牛病毒性腹泻病毒为典型,轻则对家畜生长发育产生抑制,重则导致其死亡。因此,有必要提高对此类病毒的重视。本文分别就牛、羊、猪感染牛病毒性腹泻病毒临床症状与鉴别诊断进行研究,并在此基础上探讨合理防控对策,以期为相关养殖场或养殖人员提供一定参考借鉴,推动家畜养殖事业持续稳定发展。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 临床症状 鉴别诊断 防控
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淮安地区肉牛养殖场牛病毒性腹泻病毒的检测与分析
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作者 纪艮峰 《今日畜牧兽医》 2025年第7期14-16,共3页
牛病毒性腹泻-黏膜病的病原是牛病毒性腹泻病毒(BVDV),为了解淮安地区不同养殖场不同阶段牛(犊牛、青年牛、后备牛及育肥牛)在不同季节牛病毒性腹泻-黏膜病的流行情况,2023—2024年采集淮安地区不同阶段腹泻肉牛的粪便、肛拭子及血清等... 牛病毒性腹泻-黏膜病的病原是牛病毒性腹泻病毒(BVDV),为了解淮安地区不同养殖场不同阶段牛(犊牛、青年牛、后备牛及育肥牛)在不同季节牛病毒性腹泻-黏膜病的流行情况,2023—2024年采集淮安地区不同阶段腹泻肉牛的粪便、肛拭子及血清等不同类型的病料样本共计1127份,采用一步法RT-PCR试剂盒对采集病料组织样本(粪便、肛拭子及血清)进行BVDV检测。统计结果表明,采集的1127份不同阶段肉牛病料组织样本中BVDV总阳性率为15.5%,其中犊牛为25.6%、青年牛为7.3%、后备牛为19.2%、育肥牛为7.7%,犊牛和后备牛的BVDV阳性率最高。分析统计采集的病料组织样本中,春、夏、秋、冬四个季节牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性率分别为17.0%、10.1%、10.3%、18.7%,其中春季和秋季阳性率高于夏季和秋季。本研究为该地养殖场不同阶段肉牛病毒性腹泻-黏膜病毒流行病学及综合防控奠定了基础。 展开更多
关键词 肉牛 牛病毒性腹泻-黏膜病 牛病毒性腹泻病毒 检测与分析
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一例牛病毒性腹泻病毒和牛星状病毒混合感染的诊治
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作者 欧阳海杰 邓晓霞 +5 位作者 陶立 李常挺 彭昊 吴翠兰 兰美益 李军 《广西畜牧兽医》 2025年第3期124-126,共3页
牛病毒性腹泻病毒又名黏膜病病毒,由该病毒引发的疾病称为牛病毒性腹泻-黏膜病,以腹泻和整个消化道黏膜坏死、糜烂或溃疡为特征[1]。星状病毒是一种近年来新发报道、无囊膜的单股正链RNA病毒,与多种动物的腹泻症状相关。牛星状病毒由英... 牛病毒性腹泻病毒又名黏膜病病毒,由该病毒引发的疾病称为牛病毒性腹泻-黏膜病,以腹泻和整个消化道黏膜坏死、糜烂或溃疡为特征[1]。星状病毒是一种近年来新发报道、无囊膜的单股正链RNA病毒,与多种动物的腹泻症状相关。牛星状病毒由英国于1978年首次发现,该病毒可引起牛的腹泻、脑炎和脑膜炎以及神经症状[2]。2022年12月,广西某牛场的犊牛发生腹泻并导致死亡,发病数量多,严重影响了牛群的健康生长。经过临床症状观察、死牛剖检和实验室病原检测,发现是由牛病毒性腹泻病毒和牛星状病毒混合感染引起。现将病例报告如下。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 混合感染 牛星状病毒
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羊感染牛病毒性腹泻病毒的诊断与防控
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作者 魏娜娜 王秀峰 《中国畜牧业》 2025年第12期101-102,共2页
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种重要的动物传染性病原体,对牛、羊等反刍动物具有高度传染性。近年来,羊感染BVDV的病例逐渐增多,已对养殖业造成一定损失。因此,掌握该病的具体发病机制,并结合病因开展科学预防与及时治疗,是有效防控羊群... 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是一种重要的动物传染性病原体,对牛、羊等反刍动物具有高度传染性。近年来,羊感染BVDV的病例逐渐增多,已对养殖业造成一定损失。因此,掌握该病的具体发病机制,并结合病因开展科学预防与及时治疗,是有效防控羊群感染BVDV、促进养羊业健康发展的关键。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 传染性病原体 BVDV
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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：3
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作者 刘丹 黄小洁 +5 位作者 吴华伟 孙淼 陈延飞 秦义娴 侯力丹 薛麒 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期51-56,共6页
为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重... 为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 间接ELISA 抗体检测
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牛病毒性腹泻病毒E^(rns)-ELISA抗体检测试剂盒的制备 被引量：3
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作者 王静 陈柯源 +5 位作者 王胜华 丁成志 杨光辉 刘一 尹金花 王九峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期65-70,共6页
为建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的血清学方法,本试验以BVDV NADL毒株结构蛋白E^(rns)作为包被抗原,优化反应条件并组装BVDV酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒,通过重复性试验、灵敏性试验、符合率试验和保存期试验验证该试... 为建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的血清学方法,本试验以BVDV NADL毒株结构蛋白E^(rns)作为包被抗原,优化反应条件并组装BVDV酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒,通过重复性试验、灵敏性试验、符合率试验和保存期试验验证该试剂盒的准确性、灵敏性和稳定性。结果显示,抗原包被浓度为4μg/mL,1%酪蛋白溶液37℃封闭45 min,被检血清以1∶400稀释孵育30 min,兔抗牛HRP标记二抗以1∶20000稀释孵育30 min,TMB底物反应5 min时,ELISA的反应背景下降,区分度最好。优化后方法的批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均在10%以内,表明该试剂盒具有较好的稳定性;灵敏性试验结果显示,当阳性血清稀释度达到1∶6400时仍可以检测为阳性,说明该试剂盒灵敏度较高;该试剂盒与美国爱德士生物科技公司(IDEXX)BVDV总抗体检测试剂盒共同检测466份临床血清样品,两者总符合率为89.1%;保存期试验结果显示,第4个月时该试剂盒仍能检测到阳性血清,说明稳定性较好。综上表明,本试验利用E^(rns)蛋白建立的BVDV间接ELISA抗体检测试剂盒灵敏度高且重复性好,可为BVDV抗体检测和流行性调查提供新的方法。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E^(rns)蛋白 抗体 间接ELISA
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牛病毒性腹泻病毒遗传多样性与防控研究进展 被引量：4
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作者 李志 孟茹 +4 位作者 付永 韩元 尚佑军 高闪电 殷宏 《动物医学进展》 北大核心 2024年第12期106-112,共7页
牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea)是由黄病毒科瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染引起牛的一种传染病,在全球范围内广泛流行,导致严重的经济损失。BVDV可分为BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3基因型和众多的基因亚型,宿主范围比较广泛,... 牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea)是由黄病毒科瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染引起牛的一种传染病,在全球范围内广泛流行,导致严重的经济损失。BVDV可分为BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3基因型和众多的基因亚型,宿主范围比较广泛,而且可形成持续感染,抑制宿主固有免疫和适应性免疫应答,给防控带来困难。虽然在北欧一些国家利用监测淘汰实现了BVD净化,但在BVD流行率较高的地区,免疫控制策略现实可行。目前我国各地均有BVD报道,基于BVDV-1毒株的灭活疫苗已用于该病的防控,但用于预防多病原引起牛腹泻或牛呼吸道综合征的联合疫苗匮乏,多联多价疫苗的创制将有助于我国BVD防控和净化。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 基因型与生物型 致病性 免疫抑制作用
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