广东地区鸽禽Ⅰ型副黏病毒分离株生物学特性研究 被引量：8

1

作者 邹永新 余双祥 +4 位作者 刘思伽 李剑荣 黄爱芳 沙才华 罗映霞 《中国家禽》 北大核心 2008年第16期42-43,共2页

鸽禽Ⅰ型副黏病毒（Avian Paramyxovirus TypeⅠ，PA／PMV—Ⅰ）感染，因其病原及症状均与鸡新城疫（ND）十分相似，通常又称之为鸽新城疫，或鸽瘟，是鸽的一种急性烈性传染病。近年来我们从广东的深圳、东莞、广州市郊等地区发病鸽群... 鸽禽Ⅰ型副黏病毒（Avian Paramyxovirus TypeⅠ，PA／PMV—Ⅰ）感染，因其病原及症状均与鸡新城疫（ND）十分相似，通常又称之为鸽新城疫，或鸽瘟，是鸽的一种急性烈性传染病。近年来我们从广东的深圳、东莞、广州市郊等地区发病鸽群中分离并鉴定到23株禽Ⅰ型副黏病毒，对其中6株病毒进行生物学特性研究。 展开更多

关键词 Ⅰ型副黏病毒 病毒分离株 生物学特性 鸽新城疫 广东地区 禽 烈性传染病 鸡新城疫

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株HLJ-09感染仔猪的组织病理学和电镜观察 被引量：3

2

作者 姜晓晨 刘业兵 +2 位作者 王晶钰 张磊 宁宜宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第9期27-30,共4页

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪的高度接触性传染病,不同年龄、品种和性别的猪均能感染,但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。该病以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊以及仔猪呼吸困难、

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 组织病理学 病毒分离株 仔猪 电镜观察 高致病性 感染 接触性传染病

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我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因的遗传变异分析 被引量：2

3

作者 李和平 吴发兴 +3 位作者 郑忠屹 李晓成 陈德坤 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第10期23-26,共4页

参考Genbank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332的ORF5基因序列,设计 并合成了一对引物,对来自福建、浙江、山东等地的PRRSV分离毒株进行RT-PCR扩增,获得约748 bp的 DNA片断,将其分别克隆入pMD18-T载体中,并进行测序。应... 参考Genbank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332的ORF5基因序列,设计 并合成了一对引物,对来自福建、浙江、山东等地的PRRSV分离毒株进行RT-PCR扩增,获得约748 bp的 DNA片断,将其分别克隆入pMD18-T载体中,并进行测序。应用DNAStar软件分析所测序列,并与ATCC VR-2332、CH-1a、MLV、LV等毒株的ORF5序列进行比较,结果表明:SHD1与FJ14、MLV、ATCCVR-2332 同源性高达98．5％,与CH-1a同源性为91．0％,与其它毒株同源性为86．6％-88．4%;FJ14与MLV、ATCC VR- 2332同源性为99．3％-99．7％,其余分离毒株在遗传关系上和CH-1a又分为明显的两个群,显示近年来各地 PRRSV分离毒株与CH-1a株的遗传差异越来越大。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 系统发育进化树 变异 遗传变异分析 病毒分离株 部分地区 GENBANK 分离毒株 PRRSV

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鸡传染性囊病病毒分离株的毒力测定 被引量：1

4

作者 张艳英 李佩国 +5 位作者 李蕴玉 张香斋 关学敏 孙继国 马艳华 张国庆 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期41-43,共3页

关键词 病毒分离株 毒力测定 鸡传染性囊病 IBDV 传染性囊病病毒 分子流行病学 分子结构 经济损失

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鸡新城疫病毒分离株WF_(00)C HN基因的测序与序列分析 被引量：1

5

作者 胡元庆 路振香 张训海 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第3期15-16,共2页

关键词 病毒分离株 HN基因 鸡新城疫 序列分析 测序 新城疫病毒 virus 腮腺炎病毒

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近年来我国鸡传染性法氏囊病及其病毒分离株的变化特点 被引量：12

6

作者 何秀苗 戴书剑 +4 位作者 官丁明 黄志永 阳秀英 王桂军 韦平 《广西畜牧兽医》 2012年第2期67-70,共4页

1IBD及IBDV的基本情况 传染性法氏囊病（infectiousbursaldisease，IBD）是小鸡的一种急性、高度接触性传染病。

关键词 鸡传染性法氏囊病 病毒分离株 接触性传染病 IBDV 小鸡

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禽流感病毒分离株A/Chicken/Wangcheng/4/2001(H9N2)核蛋白基因(NP)的克隆和序列分析 被引量：1

7

作者 赵建梅 魏荣 +3 位作者 郑东霞 宋翠平 王志亮 刘清河 《动物检疫》 2004年第4期24-26,共3页

用无特定病原体 (ＳＰＦ)鸡胚增殖禽流感鸡体分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｗａｎｇｃｈｅｎｇ／４／２００１(Ｈ９Ｎ２)(ＷＣ２００１),提取病毒总ＲＮＡ。根据已发表的Ａ型流感病毒株ＮＰ基因序列 ,设计一对引物 ,运用反转录 -聚合酶链... 用无特定病原体 (ＳＰＦ)鸡胚增殖禽流感鸡体分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｗａｎｇｃｈｅｎｇ／４／２００１(Ｈ９Ｎ２)(ＷＣ２００１),提取病毒总ＲＮＡ。根据已发表的Ａ型流感病毒株ＮＰ基因序列 ,设计一对引物 ,运用反转录 -聚合酶链反应(ＲＴ -ＰＣＲ)扩增该病毒分离株的ＮＰ基因 ,克隆后进行序列测定。序列分析表明 ,扩增的ＮＰ基因为相应的开放阅读框架。ＷＣ２００１株ＮＰ基因序列与数株Ａ型流感病毒ＮＰ序列进行比较 ,相互间同源性在８０%左右 ,其中与Ａ／Ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／Ｙ２８０／９７(Ｈ９Ｎ２)有很高的同源性 ,而与人流感病毒株和猪流感病毒株差异较大 ,显示禽流感病毒特征。 展开更多

关键词 禽流感 病毒分离株 核蛋白基因 NP 基因克隆 序列分析

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广西三黄鸡鸡贫血病毒分离株GXC060821的全基因组序列分析

8

作者 Xie Z 谢冰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期31-31,共1页

本研究从中国南部的广西省三黄鸡体内分离出一种新的鸡贫血病毒分离株GXC060821，并对其进行了全基因组序列测序分析。分析结果显示，GXC060821基因组全长2292bp，其中包含3个重叠的开放阅读框（ORFs）。将其与31株已发表的鸡贫血病毒... 本研究从中国南部的广西省三黄鸡体内分离出一种新的鸡贫血病毒分离株GXC060821，并对其进行了全基因组序列测序分析。分析结果显示，GXC060821基因组全长2292bp，其中包含3个重叠的开放阅读框（ORFs）。将其与31株已发表的鸡贫血病毒基因组序列进行比对分析， 展开更多

关键词 全基因组序列 病毒分离株 鸡贫血病毒 三黄鸡 广西省 序列分析 开放阅读框 中国南部

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海安地区鸡新城疫病毒分离株的遗传进化分析

9

作者 梅进 孙银华 《国外畜牧学（猪与禽）》 2013年第12期69-71,共3页

2011-2012年,从来海安县兽医站门诊就诊的20个疑似新城疫发病鸡群中分离到8株有血凝性的病毒,其中5株病毒能够凝集鸡的红细胞,并且血凝性可以被NDV阳性血清所抑制,MDT在49-60.8小时之间,经鉴定为NDV强毒株。新城疫是危害养禽业的重要疫... 2011-2012年,从来海安县兽医站门诊就诊的20个疑似新城疫发病鸡群中分离到8株有血凝性的病毒,其中5株病毒能够凝集鸡的红细胞,并且血凝性可以被NDV阳性血清所抑制,MDT在49-60.8小时之间,经鉴定为NDV强毒株。新城疫是危害养禽业的重要疫病之一[1],由新城疫病毒（NDV）强毒株引起,NDV是有囊膜的单股、负链、不分节段RNA病毒,融合（F）蛋白是位于病毒囊膜表面的一种糖蛋白,在病毒感染过程中介导病毒囊膜与宿主细胞膜的融合,F基因前375个核苷酸序列变异度较大[2],可以反映NDV毒株的遗传进化规律。 展开更多

关键词 病毒分离株 鸡新城疫 遗传进化 海安县 新城疫病毒 病毒囊膜 RNA病毒 核苷酸序列

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淋巴囊肿病毒中国分离株基因组序列和结构分析 被引量：5

10

作者 闫秀英 吴灶和 +2 位作者 简纪常 鲁义善 孙修勤 《广东海洋大学学报》 CAS 2011年第1期1-6,共6页

LCDV-cn是分离自中国养殖牙鲆的淋巴囊肿病病原,给中国牙鲆养殖业带来了严重危害。通过PCR、克隆和测序,获得了LCDV-cn部分基因的序列,证明LCDV-cn与LCDV-C的基因组序列是一致的。比较基因组学分析发现,LCDV-cn基因组中有137个ORF是其... LCDV-cn是分离自中国养殖牙鲆的淋巴囊肿病病原,给中国牙鲆养殖业带来了严重危害。通过PCR、克隆和测序,获得了LCDV-cn部分基因的序列,证明LCDV-cn与LCDV-C的基因组序列是一致的。比较基因组学分析发现,LCDV-cn基因组中有137个ORF是其独有的、与LCDV-1及其它虹彩病毒无同源区域。对LCDV-cn基因组进行生物信息学分析发现,在LCDV-cn独有的ORF中,有的编码与宿主同源的蛋白,有的编码与DNA复制相关的蛋白,某些ORF编码的蛋白含有跨膜区等。LCDV-cn的独有基因或许对其毒力和宿主范围有关。 展开更多

关键词 淋巴囊肿病毒中国分离株LCDV-cn 比较基因组学 生物信息学

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斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株ORF63基因的序列特征及表达与启动子活性分析 被引量：2

11

作者 刘惠芬 高绘菊 +4 位作者 王石宝 江峰 李轶女 张志芳 牟志美 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期292-298,共7页

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因。从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63。序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子... 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因。从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63。序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子质量为41.3 kD;起始密码子ATG上游存在一个早期和晚期启动子基序,编码蛋白序列含有CNX、MutH等多种结构域。启动子活性和转录时相分析表明ORF63是一个早、晚期表达的基因,在病毒感染4 h和18 h时有2个转录峰,24 h以后转录水平略有下降,但总体趋于稳定。构建该基因的原核表达载体pET-28a-ORF63,并转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体,Western blot检测制备的多克隆抗体特异性较好,效价可达1∶3 200以上。由以上结果推测,SpltMNPVⅡ分离株的ORF63基因是一个早期和晚期均有表达的病毒基因,可能与SpltMNPVⅡ感染宿主细胞后自身DNA的复制有关,参与早期芽生病毒(BV)的发生和晚期包涵体衍生病毒(ODV)的成熟2个过程。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株 ORF63基因 序列特征 原核表达 多克隆抗体

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浒苔多糖体外抗犬冠状病毒临床分离株的作用研究 被引量：2

12

作者 孙秋艳 沈美艳 +1 位作者 朱明恩 李舫 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期22-26,共5页

利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从山东某宠物医院临床上表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR进行鉴定,确定为犬冠状病毒,命名为CCoV-SW1。为探讨浒苔多糖(EPS)体外抗CCoV-SW1毒株的作用效... 利用A72细胞(犬纤维肉瘤细胞系)从山东某宠物医院临床上表现为急性胃肠炎症状的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒,通过间接免疫荧光(IFA)和RT-PCR进行鉴定,确定为犬冠状病毒,命名为CCoV-SW1。为探讨浒苔多糖(EPS)体外抗CCoV-SW1毒株的作用效果,以A72细胞为细胞模型,通过直接杀灭、抑制复制及阻断吸附3个方面进行研究。结果表明,EPS对A72细胞最大安全浓度为62.5mg/L;EPS对CCoV感染A72细胞抑制率与EPS质量浓度有一定量效关系;EPS对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,并且与EPS浓度具有量效关系;EPS抑制CCoV复制效果不明显,但仍有一定效果,当EPS浓度为62.5mg/L时,细胞存活率为37.2%。EPS在体外对CCoV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,为CCoV的预防和治疗提供依据。 展开更多

关键词 浒苔多糖 犬冠状病毒山东分离株 分离鉴定 抗病毒作用

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2008年之前与2012年分离自克罗地亚本地猪的猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析

13

作者 Prpic J 吴艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期181-181,共1页

猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已于过去20年里在克罗地亚持续存在,对养猪业造成巨大经济损失。感染后的临床症状主要表现为:呼吸系统疾病、体重减轻及较弱的生长性能,同时怀孕母猪繁殖障碍。尽管这些感染在克罗... 猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)已于过去20年里在克罗地亚持续存在,对养猪业造成巨大经济损失。感染后的临床症状主要表现为:呼吸系统疾病、体重减轻及较弱的生长性能,同时怀孕母猪繁殖障碍。尽管这些感染在克罗地亚的一些地区不断被认识,但2012年的病毒分离株的异质性尚未被研究。本试验旨在将克罗地亚2008年之前的PCV2和PRRSV分离株与2012年分离株进行同源性比对分析,以获得关于这2大感染的较好流行病学调查结果。本试验于2012年从已发生猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征这2种疾病的育肥猪中检测到PCV2和PRRSV病毒株,将其与过去20年相同地区分离到病毒株进行同源性比对分析。遗传进化树分析结果显示,循环的PCV2和PRRSV分离株与先前分离的克罗地亚病毒株明显不同。然而,当与GenBank中登录的已知分离株相比,PRRSV分离株与匈牙利、丹麦和荷兰分离株相比有较高的遗传同源性。本试验结果揭示,尽管PCV2和PRRSV在克罗地亚地区持续存在,但2012年病毒分离株的基因与先前检测到的病毒株明显不同。结果表明可能由于猪贸易、新引进猪样本导致了这2种疾病的感染。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 病毒分离株 克罗地亚 遗传进化 本地猪 呼吸系统疾病 母猪繁殖障碍

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进口鸽的禽结核病及其分离株的致病性

14

作者 Mori.,y 金光明 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1995年第3期53-54,共2页

一只２岁龄公鸽在其泄殖腔后部皮肤上发现一结核病灶（直径１５ｍｍ），从皮肤结构病灶和粪便中分离出血清２型禽分枝杆菌，分离的光滑圆形（ＳｍＤ）变异株（４．９×１０＾６ＣＦＵ）和粗糙粒状（ＲＧ）变异株（３．７×１０... 一只２岁龄公鸽在其泄殖腔后部皮肤上发现一结核病灶（直径１５ｍｍ），从皮肤结构病灶和粪便中分离出血清２型禽分枝杆菌，分离的光滑圆形（ＳｍＤ）变异株（４．９×１０＾６ＣＦＵ）和粗糙粒状（ＲＧ）变异株（３．７×１０＾７ＣＦＵ）静脉接种鸡，用ＲＧ变异株接种的鸡在接种后第３９天死亡，用ＳｍＤ变异株脾肿大，用ＳｍＤ变异株接种鸡的肝，脾和肺中，观察到许多白色结构病变，而用ＲＧ变异株接种的鸡没有观察到大体病变。 展开更多

关键词 鸽病 禽结核病 病毒分离株 致病性

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流行的马立克氏病强毒分离株的一些特性

15

作者 Tan.,MZG 张龙现 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1995年第2期47-48,共2页

关键词 鸡病 马立克氏病 病毒分离株 流行病学

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上海地区猪萨佩罗病毒的检测及遗传进化分析 被引量：4

16

作者 李本强 刘惠莉 +5 位作者 刘佳佳 陶洁 程靖华 石迎 乔长涛 沈晓晖 《上海农业学报》 2023年第2期64-70,共7页

为了明确猪萨佩罗病毒在仔猪腹泻病情中的作用,2016—2020年采集上海市及周边11个猪场腹泻病料,共计1446份。利用RT-PCR方法对其进行PSV筛检,并对阳性样品进行病原分离及病毒特性研究。结果显示:共筛检出256份PSV核酸阳性样品,阳性率17... 为了明确猪萨佩罗病毒在仔猪腹泻病情中的作用,2016—2020年采集上海市及周边11个猪场腹泻病料,共计1446份。利用RT-PCR方法对其进行PSV筛检,并对阳性样品进行病原分离及病毒特性研究。结果显示:共筛检出256份PSV核酸阳性样品,阳性率17.7%。从阳性样品中成功分离到2株PSV病毒,全基因序列遗传进化分析显示2株PSV分离株聚集在中国PSV毒株集群上,分离株在3D区域4696—5945 bp处存在重组区域。病毒核苷酸分析发现中国PSV毒株与韩国PSV毒株核苷酸相似性为87%—88.5%,与欧洲PSV毒株核苷酸相似性为84.9%—87.3%。对VP1基因氨基酸序列分析发现分离株与参考株存在氨基酸位点突变,中间氨基酸序列保守,无突变及插入和缺少现象。PSV分离株与参考株均含有173位潜在糖基化位点,VP1蛋白分子表面抗原表位分布均匀。该研究可为猪萨佩罗病毒病原学及其疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 猪萨佩罗病毒分离株 流行病学调查 VP1基因 遗传进化分析

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鸭副黏病毒F基因变异分析

17

作者 刁有祥 《中国家禽》 北大核心 2010年第22期36-37,共2页

1鸭副黏病毒F基因变异分析 分离到10株鸭源副黏病毒，血凝效价在2^2-2^6，10株副黏病毒分离株MDT为50．4～60．0h，ICPI为1．66～1．78，按照毒力判断标准表明分离株均属于强毒株。鸭副黏病毒F基因起始序列为ACGGGTAGAA、终止序歹0为TT... 1鸭副黏病毒F基因变异分析 分离到10株鸭源副黏病毒，血凝效价在2^2-2^6，10株副黏病毒分离株MDT为50．4～60．0h，ICPI为1．66～1．78，按照毒力判断标准表明分离株均属于强毒株。鸭副黏病毒F基因起始序列为ACGGGTAGAA、终止序歹0为TTAAGAAAAA， 展开更多

关键词 副黏病毒 变异分析 F基因 鸭源 病毒分离株 血凝效价 ICPI MDT

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鸭瘟、鸭病毒性肝炎的诊治

18

作者 陈昌海 《农家致富》 2008年第13期42-42,共1页

鸭瘟又名鸭病毒性肠炎，其特征为头肿大（大头瘟）、流眼泪、腿发软、拉绿屎。 病原和流行病学特点 所有鸭瘟病毒分离株的抗原性相似．但彼此间存在毒力上的差异。病鸭和带毒鸭是主要传染源，可通过直接接触感染，也可经过病鸭粪便污... 鸭瘟又名鸭病毒性肠炎，其特征为头肿大（大头瘟）、流眼泪、腿发软、拉绿屎。 病原和流行病学特点 所有鸭瘟病毒分离株的抗原性相似．但彼此间存在毒力上的差异。病鸭和带毒鸭是主要传染源，可通过直接接触感染，也可经过病鸭粪便污染的饲料、饮水、环境物品的间接接触而感染。鸭、鹅和天鹅对本病易感。成年鸭发病率与死亡率高．30日龄内雏鸭较少发病。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎 鸭瘟 诊治 流行病学特点 病毒性肠炎 病毒分离株 直接接触 粪便污染

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军曹鱼淋巴囊肿病毒的系统关系研究及基因型分析 被引量：3

19

作者 闫秀英 孙修勤 +5 位作者 吴淑勤 吴谡琦 张进兴 洪旭光 郑凤荣 曲凌云 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1087-1091,共5页

从患淋巴囊肿病的养殖军曹鱼肿瘤中分离到一种虹彩病毒,命名为淋巴囊肿病毒军曹鱼分离株（LCDV-rc）。为探讨LCDV-rc的系统地位,从DNA水平上分析了该病毒株与淋巴囊肿病毒中国牙鲆分离株（LCDV-cn）、淋巴囊肿病毒韩国鲈鱼分离株（LCDV... 从患淋巴囊肿病的养殖军曹鱼肿瘤中分离到一种虹彩病毒,命名为淋巴囊肿病毒军曹鱼分离株（LCDV-rc）。为探讨LCDV-rc的系统地位,从DNA水平上分析了该病毒株与淋巴囊肿病毒中国牙鲆分离株（LCDV-cn）、淋巴囊肿病毒韩国鲈鱼分离株（LCDV-sb）、淋巴囊肿病毒日本牙鲆分离株（LCDV-jf）、淋巴囊肿病毒欧洲分离株（LCDV-1）和淋巴囊肿病毒日本岩鱼分离株（LCDV-rf）的系统关系。以核衣壳蛋白（MCP）基因为分子标记,通过PCR扩增和克隆测序获得了长度为1356bp的含178个信息位点的mcp基因序列;用最大简约法、最大似然法、邻接法和Bayesian法构建了分子系统树并进行了置信度检验。结果表明,构建的淋巴囊肿病毒ML、NJ、MP和Bayesian系统树的拓扑结构一致,LCDV-rc和LCDV-sb聚为一支,LCDV-cn和LCDV-jf聚为一支,LCDV-1和LCDV-rf分别各为一支。在35种虹彩病毒的系统关系分析中,LCDV-rc与另5株淋巴囊肿病毒在系统树上聚为一大支,说明LCDV-rc与淋巴囊肿病毒的关系近于其他虹彩病毒。根据遗传距离和系统关系分析认为,LCDV-rc属于一种新的基因型,称其为淋巴囊肿病毒Ⅳ型基因型。 展开更多

关键词 虹彩病毒 淋巴囊肿病毒军曹鱼分离株(LCDV-rc) 系统关系 基因型

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禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立 被引量：1

20

作者 余冲 黄勇 +3 位作者 田明星 石敏 李敏 赵芳芳 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期363-370,共8页

根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至p... 根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a（＋）,转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法.结果表明：1）REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2）SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹（Western-blot）结果表明重组蛋白具有生物学活性;3）间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨. 展开更多

关键词 网状内皮组织增生症病毒四川分离株 GP90基因 克隆表达 间接酶联免疫吸附试验

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