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灰叶斑侵染体系的研究及对不同种质番茄的影响
1
作者
李敏
赵久海
+5 位作者
张武
项鹏
李艳杰
王舒
杨树
王兵
《黑龙江农业科学》
2025年第10期33-41,共9页
为探究适合灰叶斑侵染番茄的最佳喷施条件,以及在此侵染条件下,灰叶斑病原菌对不同种质番茄的影响,对不同来源地的番茄病样,进行病原物的分离、纯化和鉴定,得到纯种的灰叶斑病原菌番茄匍柄霉菌(Stemphylium lycopersici),采用灰叶斑孢...
为探究适合灰叶斑侵染番茄的最佳喷施条件,以及在此侵染条件下,灰叶斑病原菌对不同种质番茄的影响,对不同来源地的番茄病样,进行病原物的分离、纯化和鉴定,得到纯种的灰叶斑病原菌番茄匍柄霉菌(Stemphylium lycopersici),采用灰叶斑孢子菌悬液梯度喷施侵染的方法,确定最佳侵染条件为4×10^(4)个·mL^(-1),单株500μL菌液。随后,对不同遗传背景的番茄病叶进行植物组织切片和台盼蓝染色可观察到,在侵染初期,灰叶斑孢子与番茄叶表皮细胞膨大,且抗病番茄会抑制灰叶斑病原菌的生长。番茄荧光定量PCR检测发现,灰叶斑会诱导水杨酸和茉莉酸合成与转运相关抗病基因的表达,并且抗病植物中抗性基因PR1b1、PR1、PR2b、JA2L、AOS2、PR-STH2、ERF-C3和LOX-D表达水平高于感病植物。
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关键词
番茄
灰叶斑病
抗病种质
病原-宿主相互作用
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职称材料
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
2
作者
于振兴
张兰桥
+3 位作者
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1324-1329,共6页
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大...
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导并经SDS-PAGE检测。结果显示,获得可溶且与硫氧还蛋白-6×His-S标签(Trx-His-S)融合表达的重组FliC蛋白(Trx-His-S-FliC)。采用镍柱亲和层析法纯化Trx-His-S和Trx-His-S-FliC,并分别与猪肠上皮细胞(IPEC-J2)裂解液孵育后,利用anti-His抗体进行免疫共沉淀试验(Co-IP),并对沉淀物利用液质联用串联质谱(LC/MS/MS)技术分析与FliC互作的宿主蛋白,利用Proteome Discoverer 1.4软件在UniProtKB/Swiss-Prot数据库中对互作的宿主蛋白进行肽指纹图谱分析。Co-IP结果显示,检测到了多个与Trx-His-S-FliC互作的宿主蛋白,且通过LC/MS/MS技术共鉴定到50个与FliC互作的蛋白。这些互作蛋白包括蛋白酶、多个核糖体蛋白和线粒体蛋白,广泛参与了细胞质糖酵解、氨基酸代谢、ATP跨膜转运等功能。为了证明质谱数据的可靠性,选择与FliC互作最强的胰蛋白酶经western blot验证,结果显示,胰蛋白酶与FliC蛋白确实存在互作,表明质谱数据可靠。本研究首次鉴定到多个与胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC互作的宿主蛋白,为研究FliC蛋白的功能奠定了基础。
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关键词
增生性肠炎
胞内劳森菌
鞭毛素蛋白FliC
免疫共沉淀
病原
菌
-
宿主
相互作用
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职称材料
题名
灰叶斑侵染体系的研究及对不同种质番茄的影响
1
作者
李敏
赵久海
张武
项鹏
李艳杰
王舒
杨树
王兵
机构
黑龙江省农业科学院黑河分院/黑龙江省黑河有害生物野外科学观测研究站
出处
《黑龙江农业科学》
2025年第10期33-41,共9页
基金
黑龙江省呼玛县、逊克县作物种质资源系统调查与抢救性收集(1921822)。
文摘
为探究适合灰叶斑侵染番茄的最佳喷施条件,以及在此侵染条件下,灰叶斑病原菌对不同种质番茄的影响,对不同来源地的番茄病样,进行病原物的分离、纯化和鉴定,得到纯种的灰叶斑病原菌番茄匍柄霉菌(Stemphylium lycopersici),采用灰叶斑孢子菌悬液梯度喷施侵染的方法,确定最佳侵染条件为4×10^(4)个·mL^(-1),单株500μL菌液。随后,对不同遗传背景的番茄病叶进行植物组织切片和台盼蓝染色可观察到,在侵染初期,灰叶斑孢子与番茄叶表皮细胞膨大,且抗病番茄会抑制灰叶斑病原菌的生长。番茄荧光定量PCR检测发现,灰叶斑会诱导水杨酸和茉莉酸合成与转运相关抗病基因的表达,并且抗病植物中抗性基因PR1b1、PR1、PR2b、JA2L、AOS2、PR-STH2、ERF-C3和LOX-D表达水平高于感病植物。
关键词
番茄
灰叶斑病
抗病种质
病原-宿主相互作用
Keywords
tomato
gray leaf spot
disease resistant germplasm
pathogen
-
host interactions
分类号
S436.412.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
2
作者
于振兴
张兰桥
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
机构
江西农业大学动物科学技术学院
江西农业大学生物科学与工程学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1324-1329,共6页
基金
国家自然科学基金(31660720)。
文摘
为鉴定胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC与猪肠上皮细胞中的互作蛋白,本研究利用PCR方法从回肠炎疫苗提取的DNA中扩增胞内劳森菌鞭毛素基因LI0710,并将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中构建重组质粒pET32aLI0710,经双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导并经SDS-PAGE检测。结果显示,获得可溶且与硫氧还蛋白-6×His-S标签(Trx-His-S)融合表达的重组FliC蛋白(Trx-His-S-FliC)。采用镍柱亲和层析法纯化Trx-His-S和Trx-His-S-FliC,并分别与猪肠上皮细胞(IPEC-J2)裂解液孵育后,利用anti-His抗体进行免疫共沉淀试验(Co-IP),并对沉淀物利用液质联用串联质谱(LC/MS/MS)技术分析与FliC互作的宿主蛋白,利用Proteome Discoverer 1.4软件在UniProtKB/Swiss-Prot数据库中对互作的宿主蛋白进行肽指纹图谱分析。Co-IP结果显示,检测到了多个与Trx-His-S-FliC互作的宿主蛋白,且通过LC/MS/MS技术共鉴定到50个与FliC互作的蛋白。这些互作蛋白包括蛋白酶、多个核糖体蛋白和线粒体蛋白,广泛参与了细胞质糖酵解、氨基酸代谢、ATP跨膜转运等功能。为了证明质谱数据的可靠性,选择与FliC互作最强的胰蛋白酶经western blot验证,结果显示,胰蛋白酶与FliC蛋白确实存在互作,表明质谱数据可靠。本研究首次鉴定到多个与胞内劳森菌鞭毛蛋白FliC互作的宿主蛋白,为研究FliC蛋白的功能奠定了基础。
关键词
增生性肠炎
胞内劳森菌
鞭毛素蛋白FliC
免疫共沉淀
病原
菌
-
宿主
相互作用
Keywords
proliferative enteropathy
Lawsonia intracellularis
flagellin protein FliC
Co
-
immunoprecipitation
pathogen
-
host interaction
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
灰叶斑侵染体系的研究及对不同种质番茄的影响
李敏
赵久海
张武
项鹏
李艳杰
王舒
杨树
王兵
《黑龙江农业科学》
2025
0
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职称材料
2
胞内劳森菌鞭毛素蛋白FliC与猪肠上皮细胞互作蛋白的研究
于振兴
张兰桥
杨莹莹
张锦华
何后军
戴益民
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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