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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒
被引量：
3
1
作者
陈瑾君
刘伟
+4 位作者
刘德莉
陆峻泓
李卿
崔磊
曹谊林
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2004年第4期315-318,共4页
目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清...
目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。
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关键词
GFP基因
逆转录
病毒
假
病毒
疱疹性口腔炎病毒
基因转染
克隆
组织工程
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职称材料
VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达
2
作者
陈瑾君
刘伟
+3 位作者
刘德莉
陆峻泓
崔磊
曹谊林
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期798-801,共4页
目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的...
目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组假病毒液,并通过低温超速离心制备含GFP基因假病毒的浓缩液,测定浓缩前后含GFP基因假病毒液滴度,并分别感染NIH 3T3细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨髓基质干细胞等,荧光显微镜下观察GFP在上述细胞内的表达情况,流式细胞仪检测GFP基因的转染阳性表达率。结果GFP-GP2-293细胞转染VSV-G基因后产生的重组假病毒液滴度为7.36×104CFU/mL,浓缩40倍后其滴度可提高至1.82×106CFU/mL。用浓缩前后含GFP基因假病毒液分别转染NIH 3T3细胞,GFP阳性表达率可由44.21%升高至79.80%;转染兔软骨细胞和成纤维细胞、猪骨髓基质干细胞和脂肪干细胞后,均可见GFP阳性表达明显增强。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以制备出高滴度的假病毒液。浓缩病毒液的高转染率为其在组织工程种子细胞标记方面的广泛应用奠定了基础。
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关键词
疱疹性口腔炎病毒
糖蛋白
绿色荧光蛋白
转染
假
病毒
种子细胞
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职称材料
题名
含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒
被引量：
3
1
作者
陈瑾君
刘伟
刘德莉
陆峻泓
李卿
崔磊
曹谊林
机构
上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室
出处
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2004年第4期315-318,共4页
基金
国家重点基础研究发展规划资助项目("973"项目)(G1999054304)
上海市"重中之重"重点学科基金资助.
文摘
目的 通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法 应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。
关键词
GFP基因
逆转录
病毒
假
病毒
疱疹性口腔炎病毒
基因转染
克隆
组织工程
Keywords
vesicular stomatitis virus G glycoprotein
green fluorescence protein
transfection
pseudotype
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达
2
作者
陈瑾君
刘伟
刘德莉
陆峻泓
崔磊
曹谊林
机构
上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第7期798-801,共4页
基金
国家重点基础研究发展计划("九七三"计划)(2005CB522700)~~
文摘
目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组假病毒液,并通过低温超速离心制备含GFP基因假病毒的浓缩液,测定浓缩前后含GFP基因假病毒液滴度,并分别感染NIH 3T3细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨髓基质干细胞等,荧光显微镜下观察GFP在上述细胞内的表达情况,流式细胞仪检测GFP基因的转染阳性表达率。结果GFP-GP2-293细胞转染VSV-G基因后产生的重组假病毒液滴度为7.36×104CFU/mL,浓缩40倍后其滴度可提高至1.82×106CFU/mL。用浓缩前后含GFP基因假病毒液分别转染NIH 3T3细胞,GFP阳性表达率可由44.21%升高至79.80%;转染兔软骨细胞和成纤维细胞、猪骨髓基质干细胞和脂肪干细胞后,均可见GFP阳性表达明显增强。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以制备出高滴度的假病毒液。浓缩病毒液的高转染率为其在组织工程种子细胞标记方面的广泛应用奠定了基础。
关键词
疱疹性口腔炎病毒
糖蛋白
绿色荧光蛋白
转染
假
病毒
种子细胞
Keywords
vesicular stomatitis virus glycoprotein
green fluorescence protein
transfection
pseudotype virus
seed cell
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒
陈瑾君
刘伟
刘德莉
陆峻泓
李卿
崔磊
曹谊林
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2004
3
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职称材料
2
VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达
陈瑾君
刘伟
刘德莉
陆峻泓
崔磊
曹谊林
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
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