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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
被引量:
2
1
作者
王骊丽
王超展
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期36-41,共6页
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基...
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。
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关键词
高效
疏水相互作用色谱
重组人干细胞因子
包涵体
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职称材料
高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究
被引量:
3
2
作者
王彦
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期218-221,共4页
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性...
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。
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关键词
高效
疏水相互作用色谱
还原变性
溶菌酶
蛋白质
折叠
复性
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职称材料
31ku激发子蛋白的液相色谱分离纯化
被引量:
1
3
作者
马志超
楼健
等
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期22-25,共4页
利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离出一种新的31ku激发子蛋白 ,选择了阴离子交换色谱流动相的最佳 pH值6.0 ,建立了疏水相互作用色谱硫酸铵Tris缓冲液 -水洗脱模式 ,简化了纯化步骤和减少了活性损失的危险。
关键词
阴离子交换
色
谱
疏水相互作用色谱
31ku激发子蛋白
分离
纯化
疫霉菌
植物病原菌
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职称材料
动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响
被引量:
3
4
作者
闵一
陈刚
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期717-723,共7页
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白...
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速(u)的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5~1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼(10mm×20mm i.d.)在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。
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关键词
疏水相互作用色谱
蛋白分离
分离度
色
谱
饼
动力学因素
生物工程
粒细胞集落刺激因子
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职称材料
题名
采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
被引量:
2
1
作者
王骊丽
王超展
耿信笃
机构
合成及天然功能性分子化学教育部重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期36-41,共6页
基金
supported by the National Natural Science Foundation(No.20705028)
the Scientific and Technological Foundation of Shaanxi Province(No.2010K12-01-05)
文摘
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。
关键词
高效
疏水相互作用色谱
重组人干细胞因子
包涵体
Keywords
high performance hydrophobic interaction chromatography(HPHIC)
recombinant human stem cell factor
inclusion bodies
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究
被引量:
3
2
作者
王彦
耿信笃
机构
西北大学现代分离科学研究所现代分离科学陕西省重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期218-221,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(批准号:20175016).
文摘
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。
关键词
高效
疏水相互作用色谱
还原变性
溶菌酶
蛋白质
折叠
复性
Keywords
reduced/denatured
lysozyme
high performance hydrophobic interaction chromatography
protein refolding
分类号
Q556.2 [生物学—生物化学]
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
31ku激发子蛋白的液相色谱分离纯化
被引量:
1
3
作者
马志超
楼健
等
机构
浙江大学华家池校区分析测试中心
出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期22-25,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30170084)
文摘
利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离出一种新的31ku激发子蛋白 ,选择了阴离子交换色谱流动相的最佳 pH值6.0 ,建立了疏水相互作用色谱硫酸铵Tris缓冲液 -水洗脱模式 ,简化了纯化步骤和减少了活性损失的危险。
关键词
阴离子交换
色
谱
疏水相互作用色谱
31ku激发子蛋白
分离
纯化
疫霉菌
植物病原菌
Keywords
Anion exchange chromatography
Hydrophobic interaction chromatography
Elicitor
Protein
分类号
S432.4 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响
被引量:
3
4
作者
闵一
陈刚
耿信笃
机构
西北大学现代分离科学研究所
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期717-723,共7页
基金
陕西省分析化学重点学科基金和现代分离科学陕西省重点实验室基金(0505JS60)
文摘
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速(u)的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5~1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼(10mm×20mm i.d.)在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。
关键词
疏水相互作用色谱
蛋白分离
分离度
色
谱
饼
动力学因素
生物工程
粒细胞集落刺激因子
Keywords
hydrophobic interaction chromatography
protein separation
resolution
chromatographic cake
dynamic factor
biotechnology
granulocyte colony stimulating factor
分类号
O658 [理学—分析化学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)
王骊丽
王超展
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究
王彦
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2003
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
31ku激发子蛋白的液相色谱分离纯化
马志超
楼健
等
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响
闵一
陈刚
耿信笃
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
在线阅读
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职称材料
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