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疏水作用色谱填料研究进展 被引量:4
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作者 李玉龙 孙彦 胡宗定 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期114-117,共4页
疏水作用色谱法(HIC)是一种有效的蛋白质分离纯化方法。综述了HIC填料的基质和配基的发展过程,举例说明了不同HIC填料对蛋白质的分离纯化效率,指出了制备型HIC填料的现状及其发展趋势。
关键词 疏水作用 填料 蛋白质
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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文) 被引量:2
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作者 王骊丽 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期36-41,共6页
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基... 为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。 展开更多
关键词 高效疏水相互作用 重组人干细胞因子 包涵体
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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量:3
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作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多
关键词 高效疏水相互作用 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性
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高效疏水作用色谱填料的合成及其在重组人干扰素纯化中的应用 被引量:2
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作者 郭立安 朱宝泉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第9期1462-1464,共3页
The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper.... The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper. It was showed that the packingsynthesized was not only suitable for separating standard proteins, but also for different rhIFNs,i. e., rhIFN-αA expressed in yeast, rhIFN-αA and rh1FN-γ in E. colt. The purify of threerhIFNs purified by one-step HPHIC, which rhIFN-γ expressed in E. colt was recognized as80%, rhIFN-αA expressed in yeast as 70%, and rhIFN-αA expressed in E. colt as 30%, wasmore than that of other chromatography besides affinity chromatography. 展开更多
关键词 高效 疏水作用 干扰素 HPhic 填料 人干扰素
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疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响 被引量:1
5
作者 赵建国 姚丛 +1 位作者 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期481-484,共4页
首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱... 首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱相似 ,芳香醇在HIC中的保留仍存在同系物规律。比较了小分子和生物大分子在不同盐溶液中的Z值变化 ,表明流动相中的盐仅改变小分子与固定相的水合程度 ,而对生物大分子 ,除改变其和固定相水合程度外 。 展开更多
关键词 疏水作用 芳香醇同系物 生物大分子 保留行为 分离 流动相 蛋白质 保留机理
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疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素-α 被引量:5
6
作者 郭立安 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页
使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进... 使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进行了纯度测定 ,纯度达到 95 %以上。该法的活性回收率分别比稀释法和透析法高 1 0倍和 1 展开更多
关键词 高效液相 纯化 重组蛋白质 基因重组人干扰素-α 高效疏水作用
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疏水作用色谱介质的合成及色谱特性研究
7
作者 李华儒 陈国亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第11期1685-1689,共5页
利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料.按照高效疏水作用色谱法,采用梯度洗脱方式分离了6种标准蛋白及唾液中α-淀粉酶和基因工程生产的γ-干扰素.柱子不可逆吸附小、被试验的α-淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收.应用合成的... 利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料.按照高效疏水作用色谱法,采用梯度洗脱方式分离了6种标准蛋白及唾液中α-淀粉酶和基因工程生产的γ-干扰素.柱子不可逆吸附小、被试验的α-淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收.应用合成的色谱填料研究了洗脱剂中盐浓度和温度对蛋白质保留行为的影响,论证了合成填料的色谱属性. 展开更多
关键词 疏水作用 特性 聚醚 疏水介质
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疏水作用色谱进展
8
作者 练鸿振 茅力 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期150-153,共4页
疏水作用色谱是利用样品中各组分不同的疏水性质来进行分离的方法,主要分离对象为蛋白质,而蛋白质分子量一般较大,生物活性又不稳定,因此寻找快速、高效且不损伤蛋白质活性的分离方法就显得十分重要。
关键词 疏水作用
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以硅胶为基质的新型高效疏水作用色谱固定相性能研究 被引量:1
9
作者 乔桂娟 王天用 +3 位作者 何秀娟 林启山 吴晓军 刘国诠 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第2期30-34,共5页
以不同醇或醚为配基,发展了一系列以硅胶为基质的新型疏水色谱固定相,研究了以山梨醇及其单丁醚为配基的填料对生物大分子分离的最佳色谱条件。该固定相可以很高的活性回收率使蛋白质得到较好的分离,同时可以纯化白介素-2、α-干... 以不同醇或醚为配基,发展了一系列以硅胶为基质的新型疏水色谱固定相,研究了以山梨醇及其单丁醚为配基的填料对生物大分子分离的最佳色谱条件。该固定相可以很高的活性回收率使蛋白质得到较好的分离,同时可以纯化白介素-2、α-干扰素和甲状腺素结合蛋白。 展开更多
关键词 疏水作用 固定相 蛋白质 硅胶 分离 纯化
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无机基质疏水作用色谱填料的研制及扩试 被引量:1
10
作者 何秀娟 赵睿 +3 位作者 吴晓军 乔桂娟 王萍 刘国诠 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期225-227,共3页
以无机基质可控孔径玻璃(CPG)和大孔硅胶为基质、聚乙二醇(PEG1000)为配基,利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱(HIC)填料,并进行了150g/批的扩大试验,用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明,... 以无机基质可控孔径玻璃(CPG)和大孔硅胶为基质、聚乙二醇(PEG1000)为配基,利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱(HIC)填料,并进行了150g/批的扩大试验,用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明,此类填料对蛋白质的分离性能良好,对胰蛋白酶的活性回收率大于95%。 展开更多
关键词 高效液相 疏水作用填料 蛋白质
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α-淀粉酶在疏水作用色谱中保留的热力学研究(英文)
11
作者 冯小艳 耿信鹏 +3 位作者 戴丽 吴丹 郑长征 耿信笃 《西安工程大学学报》 CAS 2009年第4期71-78,共8页
研究了经不同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶(α-Amylase)在疏水作用色谱(HIC)中的保留行为.结果表明,天然及经盐酸胍变性的α-淀粉酶在HIC中的保留行为都很好地遵循非线性Van′t Hoff方程,且由所计算出的α-淀粉酶在HIC中保留的热力学参数... 研究了经不同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶(α-Amylase)在疏水作用色谱(HIC)中的保留行为.结果表明,天然及经盐酸胍变性的α-淀粉酶在HIC中的保留行为都很好地遵循非线性Van′t Hoff方程,且由所计算出的α-淀粉酶在HIC中保留的热力学参数发现,在实验温度范围内,α-淀粉酶的保留为熵驱动,焓变(ΔH0)、熵变(ΔS0)和热容量变(ΔCP0)3个热力学参数都分别与绝对温度及其倒数之间存在线性关系.同时,对部分胍变α-淀粉酶的折叠自由能ΔΔGF进行了测定,发现变性α-淀粉酶在HIC固定相表面的折叠自由能远比在溶液中的高,且对于相同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶,均以298K时的折叠自由能为最大. 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 疏水作用 折叠自由能 热力学
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一种疏水色谱填料的特性及应用的研究 被引量:7
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作者 王云 郭敏亮 +3 位作者 姜守磊 陈天 姜涌明 陈云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期354-356,共3页
以交联壳聚糖为基质 ,正戊醛为配基 ,利用改进的方法制备了疏水作用色谱 (HIC)填料 ,并对该色谱填料的吸附行为和应用作了研究。结果表明 ,此类填料对蛋白质的吸附行为符合疏水相互作用理论 ,对α 淀粉酶的纯化活性回收率大于 80 %。
关键词 疏水作用 填料 壳聚糖 吸附行为
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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量:1
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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页
蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多
关键词 高效液相 反相液相 亲水相互作用 疏水作用 离子交换 体积排阻 蛋白质组学
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用低交换容量聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂柱色谱分离中性氨基酸 被引量:17
14
作者 刘菊湘 刘国栋 +4 位作者 阎虎生 程晓辉 何炳林 姜根华 杨国英 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第12期2100-2103,共4页
通过磺化苯乙烯 -二乙烯苯共聚物或商品化的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 ( 0 0 1× 7)的逆磺化反应 ,得到一系列不同交换容量的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 .研究了丙氨酸和缬氨酸及缬氨酸和亮氨酸在这些树脂柱上的色谱分... 通过磺化苯乙烯 -二乙烯苯共聚物或商品化的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 ( 0 0 1× 7)的逆磺化反应 ,得到一系列不同交换容量的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 .研究了丙氨酸和缬氨酸及缬氨酸和亮氨酸在这些树脂柱上的色谱分离 .结果表明 ,用两种方法得到的树脂对丙氨酸和缬氨酸的色谱分离性能基本相同 ;同时中性氨基酸与聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂之间的作用包括离子作用和疏水作用 ,且二者之间存在协同作用 . 展开更多
关键词 氨基酸 阳离子交换树脂 疏水作用 聚苯乙烯 分离 性能 蛋白质水解液
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31ku激发子蛋白的液相色谱分离纯化 被引量:1
15
作者 马志超 楼健 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期22-25,共4页
利用阴离子交换色谱和疏水相互作用色谱从烟草疫霉菌培养液中分离出一种新的31ku激发子蛋白 ,选择了阴离子交换色谱流动相的最佳 pH值6.0 ,建立了疏水相互作用色谱硫酸铵Tris缓冲液 -水洗脱模式 ,简化了纯化步骤和减少了活性损失的危险。
关键词 阴离子交换 疏水相互作用 31ku激发子蛋白 分离 纯化 疫霉菌 植物病原菌
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动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响 被引量:3
16
作者 闵一 陈刚 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期717-723,共7页
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白... 依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的“条件板高”对流动相线速(u)的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色谱饼的1/5~1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此,用装填有HIC填料的色谱饼(10mm×20mm i.d.)在12min内便可完全分离7种标准蛋白。还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化,在50min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39%,比活〉1×10^8IU/mg。可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到“三高”。 展开更多
关键词 疏水相互作用 蛋白分离 分离度 动力学因素 生物工程 粒细胞集落刺激因子
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还原变性核糖核酸酶在疏水性液-固界面上的复性
17
作者 毕晶 白泉 +1 位作者 王军 王骊丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期786-789,共4页
采用疏水相互作用色谱(HIC)对还原变性核糖核酸酶A(RNaseA)在疏水性液-固界面上的复性进行了研究。详细讨论了流动相中脲的浓度、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比例、流动相pH和变性蛋白质浓度对还原变性RNaseA复性效率和... 采用疏水相互作用色谱(HIC)对还原变性核糖核酸酶A(RNaseA)在疏水性液-固界面上的复性进行了研究。详细讨论了流动相中脲的浓度、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比例、流动相pH和变性蛋白质浓度对还原变性RNaseA复性效率和质量回收率的影响。结果表明,在最优化的复性条件(流动相中含有2.0mol/L脲,GSH/GSSG的浓度比为8∶1,流动相pH为8.0)下,还原变性RNaseA能完全复性。当变性蛋白质质量浓度为5.0mg/mL时,还原脲变性RNaseA的活性回收率和质量回收率分别为98.0%和61.9%,还原胍变性RNaseA分别为100.1%和66.8%。研究表明HIC是还原变性蛋白质复性的有力工具之一,可为蛋白质复性研究提供新方法和新思路。 展开更多
关键词 蛋白质复性 疏水作用 还原变性 核糖核酸酶A
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重组灵芝免疫调节蛋白的纯化及其性质 被引量:5
18
作者 朱建强 梁重阳 +3 位作者 冯凯 盖晓东 孙新 孙非 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期753-756,共4页
采用超滤浓缩、强阴离子交换、疏水作用和凝胶色谱等方法,对毕赤酵母表达的rGlip进行分离和纯化,对离子交换色谱中rGlip与固相结合的最佳pH值进行了考察,并对纯化产物的活性进行了鉴定.rGlip在215nm处有强的紫外吸收,经激光解析电离时... 采用超滤浓缩、强阴离子交换、疏水作用和凝胶色谱等方法,对毕赤酵母表达的rGlip进行分离和纯化,对离子交换色谱中rGlip与固相结合的最佳pH值进行了考察,并对纯化产物的活性进行了鉴定.rGlip在215nm处有强的紫外吸收,经激光解析电离时间飞行质谱鉴定其相对分子量为12722,经反相液相色谱鉴定纯度≥97%.设计rGlip的疏水作用色谱,有效地去除色素.凝血实验结果表明,rGlip可以凝集绵羊血红细胞,但对人血A,B,AB和O型等红细胞无凝集作用,有类似凝集素的生物学活性. 展开更多
关键词 灵芝 阴离子交换 疏水作用 凝胶过滤 纯化
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引言
19
作者 梁鑫淼 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期903-903,共1页
反相液相色谱( RPLC)是当前色谱分离中应用最为广泛的色谱模式,依靠疏水固定相与溶质之间的疏水相互作用实现弱极性和中等极性化合物的高效分离。但是,RPLC对极性化合物(如寡糖、强极性寡肽、药物等)的保留很弱,甚至不保留。反... 反相液相色谱( RPLC)是当前色谱分离中应用最为广泛的色谱模式,依靠疏水固定相与溶质之间的疏水相互作用实现弱极性和中等极性化合物的高效分离。但是,RPLC对极性化合物(如寡糖、强极性寡肽、药物等)的保留很弱,甚至不保留。反相离子对色谱( RPIC)、离子交换色谱( IEC)和正相色谱( NPLC)等可以作为RPLC的补充,用于极性化合物的分离。然而,它们又各自存在一定的局限性,不能满足当前复杂样品的分离和表征需求。 展开更多
关键词 极性化合物 疏水相互作用 反相离子对 反相液相 分离 RPLC 离子交换 高效分离
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吉妥单抗复兴史
20
作者 吴仪 刘睿 吕弋 《大学化学》 CAS 2022年第9期170-178,共9页
采用访谈的形式,以首个上市的抗体偶联药物“吉妥单抗”的传奇历程为明线,靶向药物在化学分子设计和分析检测上的进步为暗线,讲述了抗体偶联药物的发展史。较为全面地介绍了抗体偶联药物的化学结构、设计思路、分析方法与发展前景。
关键词 抗体偶联药物(ADC) 吉妥单抗(Mylotarg) 靶向治疗 抗体药物比(DAR) 尺寸排阻(SEC) 疏水作用(hic)
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