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疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶LipA在毕赤酵母中的重组表达及产量优化
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作者 郑毅恒 侯颖 +3 位作者 赵仕达 成莉凤 李炳坤 李丁 《动物营养学报》 北大核心 2025年第2期1365-1375,共11页
本研究将来源于疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶LipA在毕赤酵母中进行高效表达,并通过多拷贝构建、共表达分子伴侣、高密度发酵等策略对其产量进行优化。首先,在毕赤酵母中对疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶LipA进行异源表达,并对表达产物进行纯化和... 本研究将来源于疏棉状嗜热丝孢菌的脂肪酶LipA在毕赤酵母中进行高效表达,并通过多拷贝构建、共表达分子伴侣、高密度发酵等策略对其产量进行优化。首先,在毕赤酵母中对疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶LipA进行异源表达,并对表达产物进行纯化和酶学性质分析;接着,通过构建多拷贝酵母菌株提高目的基因的转录水平,通过共表达分子伴侣改善蛋白的折叠与运输,通过高密度发酵进一步挖掘酵母菌株的生产潜能。结果显示:LipA的最适pH为9,最适温度为50℃。LipA在温度和pH方面都具有良好的稳定性,非常适合作为饲料添加剂使用。含有2个拷贝菌株的2-α-LipA具有最高的LipA产量,酶活力可达2453.63 U/mL,与单拷贝菌株1-α-LipA的1753.69 U/mL相比提高了39.9%(P<0.05)。在此基础上,共表达了8种不同的分子伴侣,发现其中HAC1显著提高了LipA的产量(P<0.05),使酶活力进一步提高至3233.2 U/mL,增幅达47.6%。通过对优化后的菌株进行高密度发酵,其最高酶活力可达28932 U/mL。综上所述,本研究成功利用毕赤酵母对疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶LipA进行了异源表达,通过综合进行基因剂量优化、共表达分子伴侣和高密度发酵,LipA的最终产量相较于初始产量增加了16.49倍。 展开更多
关键词 疏棉状嗜热丝孢菌 脂肪酶 基因剂量 分子伴侣
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疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶LipTL的酶学性质及脱胶应用研究
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作者 邵化 单明明 +3 位作者 王琼波 徐瑞敏 陈曦 魏涛 《食品与发酵工业》 CAS 北大核心 2025年第1期41-46,共6页
酶法脱胶技术在油脂精炼行业应用潜力巨大,磷脂酶是酶法脱胶技术中的主要用酶,但因现有磷脂酶资源在底物选择性、温度稳定性方面难以满足工业脱胶工艺的要求,限制了磷脂酶在油脂精炼行业中的大规模应用。研究表明,来自疏棉状嗜热丝孢菌(... 酶法脱胶技术在油脂精炼行业应用潜力巨大,磷脂酶是酶法脱胶技术中的主要用酶,但因现有磷脂酶资源在底物选择性、温度稳定性方面难以满足工业脱胶工艺的要求,限制了磷脂酶在油脂精炼行业中的大规模应用。研究表明,来自疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶(LipTL)具有水解磷脂的功能。该研究利用大肠杆菌构建LipTL的基因工程菌,对LipTL进行异源表达,探究LipTL的酶学性质和油脂脱胶效果。序列比对显示,该酶与磷脂酶A1具有高度相似性;SDS-PAGE结果表明,LipTL分子质量约为30 kDa;LipTL的最适温度为55℃、最适pH值为9.0,在55℃条件下处理2 h仍能保持90%以上的相对活力。LipTL在脱胶反应6 h后,将大豆油和花生油的残磷量分别降至5.2、4.9 mg/kg,具有良好的脱胶效果。该研究结果证实该脂肪酶可用于油脂脱胶,不仅为酶法脱胶提供新的酶源,也为该酶的后续改造提供了研究基础。 展开更多
关键词 疏棉状嗜热丝孢菌 脂肪酶 酶法脱胶 同源建模 酶学性质
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VKT多肽介导的固定化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶催化制备生物柴油
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作者 季骁彦 许蕊 +1 位作者 王飞 李迅 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第6期3285-3292,共8页
生物柴油是一种环境友好的生物液体燃料,对于酶法生产生物柴油,迫切需要找到廉价和高效的固定化脂肪酶。本研究利用固体结合肽(SBPs)VKT,将其与疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)融合构建融合脂肪酶,并将其... 生物柴油是一种环境友好的生物液体燃料,对于酶法生产生物柴油,迫切需要找到廉价和高效的固定化脂肪酶。本研究利用固体结合肽(SBPs)VKT,将其与疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)融合构建融合脂肪酶,并将其固定化在硅基材料上,获得了一种新型的生物催化剂。在所测试的硅基材料(ZSM-5、Na-Y、SAR-100、MCM-41和SiO_(2)微粉)中,固定在ZSM-5沸石上的TLL-VKT(TLL-VKT@ZSM-5)表现出最佳的固定化效率和最大负载,且具有优异的pH、温度、储存和洗脱稳定性。以TLL-VKT@ZSM-5为生物催化剂,对麻疯树籽油进行转酯化反应,48h生物柴油得率即达到93.9%。此外,TLL-VKT@ZSM-5还表现出较高的重复使用性能,在7次重复使用后,生物柴油得率依然保持71.9%。本研究的酶固定化方法具有简单高效、稳定性高和重复使用性能高等优点。本研究显示VKT肽在酶蛋白固定化的应用方面具有较好前景。 展开更多
关键词 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 固定化 硅基材料 麻疯树籽油 生物柴油 固体结合肽
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疏棉状嗜热丝孢菌耐热脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达 被引量:4
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作者 陈婧 王斌 +1 位作者 李德明 潘力 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期160-163,共4页
综合考虑密码子偏爱性、RNA稳定性以及自由能等因素,对疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)耐热脂肪酶(tll)基因序列进行密码子优化并全基因合成。将合成的tll基因连接到克隆载体,然后亚克隆到表达载体pHGWPT-tll,采用根癌农杆... 综合考虑密码子偏爱性、RNA稳定性以及自由能等因素,对疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)耐热脂肪酶(tll)基因序列进行密码子优化并全基因合成。将合成的tll基因连接到克隆载体,然后亚克隆到表达载体pHGWPT-tll,采用根癌农杆菌介导转化无孢黑曲霉SH-2。经过三丁酸甘油酯平板、SDS-PAGE以及Western Blotting鉴定,成功表达了tll基因。发酵72h,转化子脂肪酶酶活最高达36U/mL。转化子经等离子诱变得到的突变株的脂肪酶比活力比出发菌株提高约37%。 展开更多
关键词 疏棉状嗜热丝孢菌 耐热脂肪酶 黑曲霉 重组表达
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重组疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶对面包烘焙品质的影响 被引量:7
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作者 钱忠英 刘滔 +2 位作者 杨环毓 蔡海莺 冯凤琴 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第9期74-80,共7页
为探究重组疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Recombinant Thermomyces lanuginosus Lipase Produced by Pichia pastoris,PTL)在面包体系中的使用效果,试验以面包比容、组织结构以及面包芯白度为指标得出其最佳用量。进一步研究比较PTL、商业脂... 为探究重组疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Recombinant Thermomyces lanuginosus Lipase Produced by Pichia pastoris,PTL)在面包体系中的使用效果,试验以面包比容、组织结构以及面包芯白度为指标得出其最佳用量。进一步研究比较PTL、商业脂肪酶Lipopan F BG(以下简称FBG)、化学改良剂双乙酰酒石酸单(双)甘油酯(Diacetyl Tartaric Acid Ester of Mono(di)Glycerides,DATEM)对面包烘焙品质的影响,对面团面筋网络结构及面包芯风味物质分别采用扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)和顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(Head-Space Solid Phase Micro-Extraction Coupled with Gas Chromatography-Mass Spectrometer,HS-SPME-GC-MS)进行分析。结果表明,PTL在面包中的最佳用量为10~20 mg/kg,过量PTL造成不良影响。PTL在增大面包比容、强化面筋结构和提高感官整体接受度等方面仅次于FBG,优于DATEM。面包配方中加入15 mg/kg PTL能明显增大面包比容(9.8%),降低面包硬度,气味和组织结构的感官得分最佳(6.48分和6.82分)。综上,适量PTL能有效改善面包的烘焙品质且具有不同于商业酶的独特优势。 展开更多
关键词 重组疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 面包 面筋网络 风味物质
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末端环化疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的稳定性
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作者 宋文 武霞霞 +1 位作者 娄海伟 方惠敏 《食品与机械》 北大核心 2022年第8期40-43,54,共5页
目的:获取活性高、稳定性好的工业脂肪酶。方法:利用哺乳动物细胞和大肠杆菌分别表达Butelase 1和梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL),通过Flag亲和层析和His亲和层析柱进行纯化;通过纯化的Butelase 1连接酶... 目的:获取活性高、稳定性好的工业脂肪酶。方法:利用哺乳动物细胞和大肠杆菌分别表达Butelase 1和梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL),通过Flag亲和层析和His亲和层析柱进行纯化;通过纯化的Butelase 1连接酶对重组TLL(rTLL)进行末端连接,以形成首尾相连的环状TLL(cTLL),通过测定rTLL和cTLL活性、热稳定性、蛋白酶稳定性、抗热聚沉能力等,研究环化处理对脂肪酶的影响。结果:纯化后cTLL与rTLL的比活基本相当;70℃下处理180 min,cTLL大部分可保持可溶状态,相同条件下线性蛋白TLL几乎完全沉淀或降低;环化后的脂肪酶cTLL粒径均一、分子量分布均匀,具有更稳定的蛋白特性。结论:Butelase 1可有效地环化梳棉状嗜热丝孢菌脂肪酶,环化后的蛋白酶酶活未改变,热稳定性大大提高,蛋白特性更好。 展开更多
关键词 环化 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 Butelase 1 稳定性
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嗜热真菌Thermomyces lanuginosus TP-1的培养及其产木聚糖酶性质研究 被引量:3
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作者 赵新河 王剑锋 裴疆森 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期58-63,共6页
从高温酒曲中分离获得1株丝状真菌,暂定为梳棉状嗜热丝孢菌。该菌适宜高温条件生长,木聚糖酶活力也是高温下较高,酶的最适温度为55℃,最适pH为5~7,金属离子对酶活有一定的影响,用GPC方法测定木聚糖酶的分子质量为6500u。
关键词 热真 疏棉状嗜热丝孢菌 木聚糖酶
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