云南番木瓜花叶病病原鉴定 被引量：4

1

作者 孙健 李凡 +3 位作者 王钰丽 王海宁 王崇德 陈海如 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期838-841,共4页

西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木... 西双版纳、保山、楚雄以及玉溪等地的感病番木瓜叶片表现为花叶或褪绿,叶片畸形,果实表面布满不规则线纹、环纹及环斑等症状。对感病番木瓜材料进行了电镜观察,在电子显微镜下观察到800 nm左右的病毒粒子;设计PRSV特异性引物对感病番木瓜材料进行RT-PCR检测,获得的扩增产物和引物设计大小相符;利用双生病毒特异性引物没有检测到双生病毒。确定引起云南番木瓜花叶病的病原为番木瓜环斑病毒。 展开更多

关键词 番木瓜花叶病 番木瓜环斑病毒 RT—PCR 病原鉴定

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海南番木瓜花叶病毒全长cDNA克隆及序列分析 被引量：1

2

作者 王永辰 沈文涛 +4 位作者 王树昌 庹德财 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期297-300,共4页

提取海南果园番木瓜病叶样品总RNA,反转录得到cDNA第一链,基于已报道的番木瓜花叶病毒(Papaya mosaic virus,PaMV)全长基因组序列,设计引物,PCR扩增PaMV-CP基因序列,通过测序和序列比对分析确定发病植物感染了PaMV。再通过RT-PCR扩增PaM... 提取海南果园番木瓜病叶样品总RNA,反转录得到cDNA第一链,基于已报道的番木瓜花叶病毒(Papaya mosaic virus,PaMV)全长基因组序列,设计引物,PCR扩增PaMV-CP基因序列,通过测序和序列比对分析确定发病植物感染了PaMV。再通过RT-PCR扩增PaMV全长cDNA序列,克隆及测序结果表明,所获得的cDNA全长为6 656 bp,与国外报道的PaMV分离物全长核苷酸序列的相似性达99.6%。 展开更多

关键词 番木瓜花叶病毒 全长CDNA 克隆 序列分析

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原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究 被引量：2

3

作者 张涛 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第7期1416-1423,共8页

番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（... 番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（879 bp）,运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2～3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染. 展开更多

关键词 番木瓜畸形花叶病毒 原核表达 DSRNA RNA沉默

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海南省抗番木瓜环斑花叶病种质资源评价研究 被引量：2

4

作者 韩剑 王祥和 +1 位作者 李向宏 陈业光 《中国南方果树》 北大核心 2009年第6期25-26,共2页

在48个番木瓜种质资源中,发现琼木瓜18号、琼木瓜27号、琼木瓜28号和琼木瓜29号表现出比对照(穗中红)更强的抗番木瓜环斑花叶病特性,且在产量、长势、可溶性固形物含量、果肉色泽、平均单果重和始瓜高度等方面均有明显优势,可作为鲜食... 在48个番木瓜种质资源中,发现琼木瓜18号、琼木瓜27号、琼木瓜28号和琼木瓜29号表现出比对照(穗中红)更强的抗番木瓜环斑花叶病特性,且在产量、长势、可溶性固形物含量、果肉色泽、平均单果重和始瓜高度等方面均有明显优势,可作为鲜食水果型番木瓜推广。该试验为进行番木瓜种质资源筛选利用和杂交育种研究奠定了基础。 展开更多

关键词 番木瓜 种质资源 番木瓜环斑花叶病 抗病性 评价

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番木瓜感染畸形花叶病毒后的生理变化及扫描电镜观察 被引量：6

5

作者 安娜 张荣萍 陈萍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期714-720,共7页

【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T... 【目的】阐明番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)的侵染机理及侵染后番木瓜自身防御体系对抗病毒的作用机制,为番木瓜病毒病防治提供参考。【方法】以台农二号番木瓜为材料,通过RTPCR检测接种PLDMV处理组(T)与健康空白对照组(CK)的病毒感染情况,采用分光光度法测定PLDMV侵染对番木瓜相关生理指标的影响,运用扫描电镜法观察两组番木瓜叶片的微观结构差异。【结果】通过RT-PCR检测,证明T番木瓜植株已感染PLDMV。T与CK番木瓜叶片在表征、微观解剖结构及生理指标等方面均存在明显差异,与CK番木瓜叶片相比,T番木瓜叶片纵切面栅海比及背部绒毛密度明显小于CK番木瓜,气孔密度大于CK番木瓜;T番木瓜的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性和脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O)含量均显著高于CK番木瓜(P<0.05,下同),过氧化氢酶(CAT)活性和叶绿素(Chl)含量显著低于CK番木瓜,而超氧化物歧化酶(SOD)和几丁质酶活性两组间无显著差异(P>0.05)。【结论】番木瓜受PLDMV侵染后,其叶片结构被破坏,细胞毒害损伤严重,体内代谢紊乱,多种代谢调节平衡被打破,番木瓜的正常生长发育受阻。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV) 扫描电镜

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去雄株留两性花株提高番木瓜产量

6

作者 张显努 《农村实用技术》 2000年第2X期11-11,共1页

番木瓜栽培容易，当年种当年可结果，亩产可达２０００～３０００千克，富含多种维生素，其中维生素Ａ含量是波萝的２Ｃ倍。番木瓜清心润肺有助消化，还能加工成果脯、果汁、果酒及制作罐头，提取木瓜蛋白酶等，是热带、亚热带地区普遍... 番木瓜栽培容易，当年种当年可结果，亩产可达２０００～３０００千克，富含多种维生素，其中维生素Ａ含量是波萝的２Ｃ倍。番木瓜清心润肺有助消化，还能加工成果脯、果汁、果酒及制作罐头，提取木瓜蛋白酶等，是热带、亚热带地区普遍喜好种植的果树。番木瓜雄株花型最小，一般仅有１０枚雄蕊，子房多退化形成针状，不能结果，个别长在花梗顶端的花也只能结少量的小果。而雌株开雌花，雄蕊退化，子房肥大，结果虽多，但果型较小，果腔大，中果皮薄，种子较多。而大于造花小于雌花的两性花植株有发育完全的子房和１～１０枚雄蕊，所发育的果实果肉厚，果腔小、单果大而重。实践证明：由雄株作父本授粉的，后代出现雄株多，而由两性株作父本授粉的， 展开更多

关键词 番木瓜 雄株 花株 木瓜蛋白酶 番木瓜花叶病 亚热带地区 多种维生素 清心润肺 授粉 中间寄主

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番木瓜卧式调控丰产栽培技术

7

作者 邵建明 《中国热带农业》 2015年第5期67-69,共3页

番木瓜属热带优质水果,具有营养丰富、用途广泛、结果快、产量高及效益好等特点。我国目前主要栽培品种有日升、夏威夷、美中红、梭罗二号、红妃、台农二号和香水木瓜等。从2002年开始,广东省茂名市农作物技术推广站（原茂名市农业良种... 番木瓜属热带优质水果,具有营养丰富、用途广泛、结果快、产量高及效益好等特点。我国目前主要栽培品种有日升、夏威夷、美中红、梭罗二号、红妃、台农二号和香水木瓜等。从2002年开始,广东省茂名市农作物技术推广站（原茂名市农业良种示范推广中心）从台湾引进日升等小果番木瓜,开展卧式调控丰产栽培技术的研究,并形成了一套完整的卧式调控丰产高产栽培管理技术规程。 展开更多

关键词 番木瓜属 栽培技术 小果 高产栽培管理 优质水果 番木瓜花叶病 技术规程 梭罗 两性花 技术推广站

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番木瓜品种介绍

8

作者 杨连珍 《世界热带农业信息》 2005年第7期25-27,共3页

关键词 品种介绍 番木瓜花叶病 雌株 果形 番木瓜属 生苗 PAPAYA 平均果重 品种选育 亚热带地区

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一种E.coli-Free的酵母同源重组系统稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的新方法 被引量：3

9

作者 庹德财 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1492-1500,共9页

侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶... 侵染性克隆是研究病毒的重要工具,而偏大的病毒基因组及其在大肠杆菌中的不稳定给构建侵染性克隆造成很大困难。通常采用插入内含子和酵母同源重组等方式可以获得稳定克隆,但本实验最初利用酵母同源重组系统并未成功构建番木瓜畸形花叶病毒(PLDMV)的侵染性克隆。经研究证实,该不稳定现象确实存在于大肠杆菌中,而非酵母和农杆菌细胞。通过改良酵母同源重组方法,成功构建了有/无内含子intron 2的PLDMV侵染性克隆p35S-FL和p35S-FL-In2,农杆菌注射接种番木瓜均发病,侵染效率达64.7%~69.7%。本研究通过酵母同源重组质粒直接转化农杆菌,建立了一种10 d内即可稳定快速构建PLDMV侵染性克隆的E.coli-Free酵母同源重组新方法。该方法对其他在大肠杆菌中不稳定的植物病毒侵染性克隆的构建具有重要意义。 展开更多

关键词 酵母同源重组 番木瓜畸形花叶病毒 侵染性克隆 不稳定性

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海南PRSV-CP与rhIFNα-2b双价载体构建新策略 被引量：3

10

作者 周鹏 郭安平 黎小瑛 《热带作物学报》 CSCD 2003年第3期58-62,共5页

为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因... 为了获得抗病毒能力较强的海南番木瓜转基因新品系,采用海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋白(PapayaRing Spot Virus-Capsid Protein of Hainan,HPRSV-CP)和重组人源干扰素α-2b(recombinant human interferon-α 2b,rhIFNα-2b)为目的基因,利用pBI121、pCAMBIA2300载体及相关技术(如技术基因内部位点突变套叠PCR),实施双价基因表达载体的构建策略。本研究成果可为其他多价基因表达载体的构建提供技术依据。 展开更多

关键词 海南番木瓜环斑花叶病毒外壳蛋 重组人源干扰素α-2b 双价基因表达载体 转基因 抗病性

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人工合成靶序列快速构建多靶标RNAi表达载体 被引量：1

11

作者 张秀春 吴坤鑫 +1 位作者 赵平娟 刘志昕 《广东农业科学》 CAS 2016年第7期81-86,共6页

番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部... 番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。 展开更多

关键词 人工合成靶序列 番木瓜环斑病毒 番木瓜叶扭曲花叶病毒 RNAi表达载体

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利用PLDMV/Twin-Strep侵染性克隆纯化HC-Pro病毒蛋白

12

作者 杨秀坤 沈文涛 +5 位作者 庹德财 王赫 言普 黎小瑛 朱国鹏 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第4期684-692,共9页

番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯... 番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)是一种新的潜在威胁番木瓜种植业的病毒,其辅助成分蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是PLDMV编码参与病毒复制、运动、寄主植物症状表现的多功能蛋白,因此纯化获得具有功能活性的HC-Pro蛋白,研究其多功能性具有重要意义。本研究利用In-Fusion拼接策略和E.coli Cell-Free快速构建植物病毒侵染性克隆法,一步快速地将28个氨基酸组成的蛋白标签Twin-Strep插入到PLDMV HC-Pro氨基端,成功获得了基于农杆菌的携带Twin-Strep标签的PLDMV侵染性克隆pPLDMV-Strep。通过农杆菌渗透注射接种番木瓜植株,从感染PLDMV-Strep的番木瓜叶片总蛋白中,利用Twin-Strep蛋白标签亲和层析分离纯化获得PLDMVHC-Pro蛋白,并通过LC/ESI-MS/MS(liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometric)对其进行蛋白N端和C端序列测序,证明了纯化获得完整的PLDMVHC-Pro蛋白。研究结果为后续解析PLDMV HC-Pro在病毒侵染过程中的功能及与寄主蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 番木瓜畸形花叶病毒 HC-PRO 马铃薯Y病毒 蛋白纯化

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