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利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况 被引量：1
1
作者 杨勇 庹德财 +4 位作者 沈文涛 言普 黎小瑛 周鹏 王锐萍 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第10期1866-1872,共7页
利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,Pa MV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体... 利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,Pa MV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体p ET-28a上,获得重组质粒p ET28-PRSV-CP、p ET28-PLDMV-CP和p ET28-Pa MV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,Pa MV CP以可溶蛋白形式存在。利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体。Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应。再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA(Indirect enzymelinked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据。 展开更多
关键词 番木瓜病毒 外壳蛋白 抗血清 ID-ELISA
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番木瓜环斑病毒甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆
2
作者 刘莉铭 彭斌 +3 位作者 康保珊 吴会杰 刘茜 古勤生 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第2期8-14,共7页
番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序... 番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为74.60%~97.80%和85.30%~98.50%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,HaNHK10与来自中国的所有分离物均聚集于II组中,并与中国山东的西葫芦分离物PRSV-SD亲缘关系最近。接种试验显示,HaNHK10分离物的全长cDNA克隆具有侵染性,它能系统侵染甜瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦和瓠瓜6种作物,经接种产生的病毒后代也能够通过摩擦接种侵染植株。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 甜瓜分离物 基因组 侵染性克隆
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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究 被引量：1
3
作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 霍姗姗 杜晓希 麦贤俊 张雨良 郭安平 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页
番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 酶联免疫吸附 荧光定量逆转录PCR
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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
4
作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 RNA介导的病毒抗性
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番木瓜环斑病毒复制酶基因转化番木瓜的研究 被引量：6
5
作者 陈谷 叶长明 +1 位作者 黄俊潮 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期11-13,共3页
构建了含番木瓜环斑病毒复制酶（ＰＲＶＲＰ）基因的植物表达载体ｐＲＰＴＷ，导入农杆菌ＬＢＡ４４０４，转化番木瓜，转基因植株经点杂交和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＰＲＶＲＰ基因已整合进番木瓜基因组。
关键词 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 农杆菌 转化
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侵染番茄的中国番木瓜曲叶病毒基因组结构特征 被引量：9
6
作者 王玉 丁铭 +3 位作者 杨莉 杨长楷 杨向东 张仲凯 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期1917-1922,共6页
从云南元谋采集表现曲叶症状的番茄样品中分离粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTGs)分离物YN678。序列分析表明其DNA-A为单链环状,全序列长度为2739 bp,编码6个ORFs。BLAST比对发现,该分离物与双生病毒科菜豆金色黄... 从云南元谋采集表现曲叶症状的番茄样品中分离粉虱传双生病毒(Whitefly-transmitted geminivirus,WTGs)分离物YN678。序列分析表明其DNA-A为单链环状,全序列长度为2739 bp,编码6个ORFs。BLAST比对发现,该分离物与双生病毒科菜豆金色黄花叶病毒属的中国番木瓜曲叶病毒HeNZM1分离物(PaLCuCNV-[HeNZM1])最为接近,相似性为98.5%,表明番茄中的分离物YN678是PaLCuCNV的1个分离物。利用WTGs卫星分子DNAβ特异引物Beta01/Beta02进行PCR扩增、克隆和测序,在YN678中扩增到DNAβ分子,全长为1357 bp,该序列与中国番茄黄曲叶病毒YN149分离物(TYLCCNV-[YN149])伴随的DNAβ相似性最高,达到99.1%。这是首次从云南番茄中分离到中国番木瓜曲叶病毒。 展开更多
关键词 中国番木瓜曲叶病毒 中国番茄黄曲叶病毒 番茄 DNA-A DNAΒ
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番木瓜环斑病毒研究进展 被引量：5
7
作者 黄江华 黄嘉薇 +1 位作者 张建军 彭仁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第8期3257-3259,共3页
综述了番木瓜病毒株系、生物学特性、检测及防治方法的最新研究进展。
关键词 番木瓜环斑病毒 株系 检测 防治
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番木瓜环斑病毒融合基因植物表达载体的构建 被引量：15
8
作者 饶雪琴 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期325-329,共5页
利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了... 利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了改进,并对改进的SOE的反应体系进行了优化,其中以Py-robestDNA聚合酶和60℃的退火温度为最佳。将融合基因VY构建在植物表达载体pCAMBIA2300上,测序结果表明,该融合基因的序列与设计相符。融合基因VY植物表达载体的构建,可为进一步获得对PRSV广谱抗性的转基因番木瓜奠定基础。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 PCR融合基因 SOE法
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dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究 被引量：10
9
作者 张帆 姜玲 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期385-391,共7页
以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外... 以模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana）和烟草（Nicotiana tabacum）及PRSV寄主植物番木瓜（CaricapapayaL.）作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外壳蛋白CP基因反向重复表达载体pHellsgate12-CPIR（简称PHG12-CPIR）分别转化到烟草和拟南芥中,获得阳性植株,并利用渗透法和农杆菌介导的瞬时表达体系将pHG12-CPIR载体导入到番木瓜中。对转基因植株进行攻毒试验并分析了其抗病性。在接种3~7d内,在拟南芥和番木瓜上转基因植株的发病情况较轻,而野生型植株叶片与转基因植株相比,均表现出不同程度的黄化、皱缩和枯斑等症状。在接种PRSV后,番木瓜和拟南芥转化植株表现症状的叶片的比例与对照相比,结果显著低于对照,而在烟草植株上症状表现的差异不明显。在3种植物上RT-PCR检测结果显示,在接种番木瓜环斑病毒PRSV后,野生型植株中有高浓度的病毒积累,而转pHG12-CPIR基因植株中几乎没有病毒积累,推测转pHG12-CPIR基因植株中瞬时表达系统已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 CP基因 番木瓜 RNAi 抗病性 渗透法
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番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析 被引量：3
10
作者 卢雅薇 沈文涛 +2 位作者 唐清杰 牛艳梅 周鹏 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第9期54-58,共5页
从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分... 从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%~93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%~89.1%。P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%~80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高。运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 全基因组 同源性 系统进化树
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海南番木瓜环斑病毒全长cDNA克隆及其侵染性克隆构建 被引量：3
11
作者 赵光远 庹德财 +2 位作者 沈文涛 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期911-917,共7页
为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术（RACE）对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物（... 为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术（RACE）对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物（PRSV-HN2）的基因组cDNA进行了全序列测定。PRSV-HN2全长cDNA包含10 326 nt（不包括3′端的polyA,Gen Bank登录号为KF791028）,能编码3 346个氨基酸。对PRSV-HN2基因组核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了结构和功能分析,结果表明,其与其它23个PRSV分离物的核酸序列相似度达81%-91%,氨基酸相似度为88%-94%。利用酵母同源重组系统成功构建其侵染性克隆载体并通过农杆菌转化与侵染,最终获得其侵染性克隆。这为在分子水平上研究PRSV遗传变异、侵染及致病机理奠定理论基础。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 全长CDNA 克隆 酵母同源重组 序列分析 侵染性克隆
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番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建 被引量：2
12
作者 赵辉 张雨良 +5 位作者 孔华 贾瑞宗 朱芸 郭安平 曾会才 彭明 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2210-2215,共6页
为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区... 为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区域和挑选出海南PRSV典型株系的代表样品。以p UCCRNAi为骨架质粒,利用代表样品的CP、NIb、Hc-Pro基因片断保守序列构建RNAi发夹结构,将发夹结构导入p CAMBIA2300-35S-OCS植物表达载体,构建出抗PRSV植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS、p CAMBIA230035S-Hc-Pro-RNAi-OCS、p CAMBIA2300-35S-NIb-RNAi-OCS。实验将PRSV不同株系保守序列的分析与RNAi的高效抗病设计理念相结合,可用于创造高效、广谱抗PRSV病毒病的新种质。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 RNA沉默 基因转化
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中国番木瓜曲叶病毒在南宁的发生及其烟粉虱传播和中间寄主初步研究 被引量：4
13
作者 蔡健和 秦碧霞 +1 位作者 谢艳 陈永惠 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期57-59,共3页
番木瓜曲叶病毒病在广西南宁市郊区发生严重并造成很大经济损失,经2002-2004年调查,重病果园发病率高达47.23%-100%,染病番木瓜矮缩,叶片向下卷曲,叶背部叶脉增生,叶柄扭曲,早期染病植株无法开花结果。番木瓜曲叶病毒病可以通过烟粉虱传... 番木瓜曲叶病毒病在广西南宁市郊区发生严重并造成很大经济损失,经2002-2004年调查,重病果园发病率高达47.23%-100%,染病番木瓜矮缩,叶片向下卷曲,叶背部叶脉增生,叶柄扭曲,早期染病植株无法开花结果。番木瓜曲叶病毒病可以通过烟粉虱传染,但是,室内人工传染效率很低,仅为8.33%;用PCR方法从表现黄脉症状的胜红蓟(Ageratum conyzoides)和田麻(Corchoropsis tomentosa)及表现黄曲叶症状的番茄(Lycopersicon escu-lentum)中检出中国番木瓜曲叶病毒(PaLCuCNV),证明这3种植物是番木瓜曲叶病毒病的中间寄主。 展开更多
关键词 中国番木瓜曲叶病毒病 发生 烟粉虱传播 病毒中间寄主
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转番木瓜环斑病毒复制酶基因番木瓜的多重定性检测 被引量：4
14
作者 阮小蕾 马丽娟 李华平 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期626-629,682,共5页
为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系... 为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系.退火温度为40～60℃时,都分别扩增出了清晰的目的基因.单基因常规PCR检测转基因模板量的下限为5×10-7g.建立的三重PCR检测技术,检测了包括NPTⅡ、Rep和CaMV35S;NPTⅡ、Rep和Nos;NPTⅡ、Rep和Papain等3个组合.建立了NPTⅡ、ReP、CaMV35S和Nos4个基因的四重PCR检测技术. 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 转基因番木瓜 多重聚合酶链式反应
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抗环斑病毒番木瓜的开发技术及转基因对基因组影响研究进展 被引量：2
15
作者 方静平 林艺华 +1 位作者 杨川毓 陈如凯 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第2期121-128,共8页
本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究... 本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究前景. 展开更多
关键词 转基因 番木瓜环斑病毒 结构与功能 SunUp基因组
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番木瓜环斑病毒CP基因同源区段的克隆及植物表达载体的构建 被引量：2
16
作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 蔡群芳 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第2期54-59,共6页
采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p... 采用RT-PCR技术对番木瓜环斑病毒CP基因的同源区段进行了克隆和鉴定分析。序列分析结果表明,获得PRSV-CP基因3′端的278bp DNA片段同源率最高。构建了目的基因包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,并通过电激法导入农杆菌中。经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入获得了农杆菌工程菌株。利用该植物表达载体对番木瓜的遗传转化工作目前正在进行中。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 同源区段 RNA介导植物表达载体 农杆菌工程菌株
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番木瓜环斑病毒海南南瓜分离物全基因组序列分析 被引量：2
17
作者 车海彦 曹学仁 罗大全 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第3期38-43,51,共7页
【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PR... 【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PRSV,采用分段扩增测序方法拼接获得PRSV-HnPumpkin基因组,利用NC-BI中的BLAST工具、DNAStar和MEGA 6.06软件进行序列分析及系统关系树构建。【结果】DAS-ELISA和RT-PCR检测结果表明,采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中存在PRSV(PRSV-HnPumpkin)。PRSV-HnPumpkin基因组全长为10 327nt,具有典型的PRSV基因组结构特征,含有1个开放阅读框,编码1个含有3 345个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-HnPumpkin与已报道的其他PRSV分离物核苷酸和氨基酸之间的相似性分别为80.6%～95.1%和90.7%～97.9%。系统关系分析表明,PRSV-HnPumpkin与亚洲分离物处于同一组中,且与我国台湾分离物亲缘关系较近。【结论】获得了PRSV-HnPumpkin全序列,但其进化来源有待进一步探讨。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 南瓜病毒病 基因序列分析
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dsRNA介导的PRSV-CP基因3′-端同源序列瞬时表达对番木瓜环斑病毒侵染的影响 被引量：2
18
作者 魏军亚 刘德兵 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第3期78-82,共5页
体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法... 体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究同源dsRNA对番木瓜环斑病毒(PRSV)侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的dsRNA能够特异地干扰PRSV侵染。 展开更多
关键词 DSRNA 农杆菌浸润法 干扰 番木瓜环斑病毒
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原核表达dsRNA抗番木瓜畸形花叶病毒的研究 被引量：2
19
作者 张涛 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第7期1416-1423,共8页
番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（... 番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）是一种已对番木瓜种植业构成潜在威胁的新型病害,在转基因植物备受争议的背景下,利用原核表达的dsRNA来防控病毒的策略不失为一种新的选择.本文选取PLDMV CP基因全长（879 bp）,运用OZ-LIC法构建了含有pdk内含子的ihpRNA结构,将其嵌入原核表达载体pSP73中,并转化RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌M-Jm109LacY,构建了1种能高表达dsRNA的原核表达菌株M-Jm109LacY-CP879,以终浓度为0.4 mmol/LIPTG诱导后能够稳定高效的表达CP879-dsRNA.研究共设2个处理：保护性处理与治疗性处理.分别用含有CP879-dsRNA的粗提液对这2个处理的番木瓜植株进行喷施处理,通过统计发病率、观察病症变化以及ELISA分析结果表明,保护性处理能有效抑制番木瓜畸形花叶病毒的侵染,主要表现为发病时间推迟和相对较低的发病率;治疗性处理植株的病毒积累量会在喷施后第3～12天内出现暂时性的降低.结果表明,保护效果优于治疗效果,若每月喷施2～3次dsRNA粗提液,有望能够有效地预防PLDMV的侵染. 展开更多
关键词 番木瓜畸形花叶病毒 原核表达 DSRNA RNA沉默
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番木瓜耐环斑病毒病检测方法的研究 被引量：3
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作者 饶雪琴 宋世文 +2 位作者 张曙光 范怀忠 归树樟 《热带作物学报》 CSCD 2001年第1期66-70,共5页
用汁液磨擦接种法、局部枯斑法、间接ＥＬＩＳＡ法和过氧化物酶检测法研究了组培和杂交一代番木瓜对番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）的耐病性。结果表明：前３种方法可以确定组培番木瓜的耐病性，第４种方法暂未能作出结论。
关键词 组织培养 番木瓜环班病毒 耐病性 检测方法
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