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基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究
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作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页
番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 RNA介导的病毒抗性
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番木瓜环斑病毒甜瓜分离物的基因组及其侵染性克隆
2
作者 刘莉铭 彭斌 +3 位作者 康保珊 吴会杰 刘茜 古勤生 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2024年第2期8-14,共7页
番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序... 番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)是瓜类作物主要病毒之一,分析了甜瓜分离物HaNHK10的基因组序列和分子变异,构建了具有侵染性的全长cDNA克隆。结果显示,HaNHK10分离物基因组全长为10332 nt,与其他分离物的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为74.60%~97.80%和85.30%~98.50%。基于全基因组序列的系统进化分析显示,HaNHK10与来自中国的所有分离物均聚集于II组中,并与中国山东的西葫芦分离物PRSV-SD亲缘关系最近。接种试验显示,HaNHK10分离物的全长cDNA克隆具有侵染性,它能系统侵染甜瓜、黄瓜、西瓜、南瓜、西葫芦和瓠瓜6种作物,经接种产生的病毒后代也能够通过摩擦接种侵染植株。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 甜瓜分离物 基因组 侵染性克隆
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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究 被引量:1
3
作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 霍姗姗 杜晓希 麦贤俊 张雨良 郭安平 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页
番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 酶联免疫吸附 荧光定量逆转录PCR
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dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究 被引量:10
4
作者 张帆 姜玲 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期385-391,共7页
以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和烟草(Nicotiana tabacum)及PRSV寄主植物番木瓜(CaricapapayaL.)作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外... 以模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)和烟草(Nicotiana tabacum)及PRSV寄主植物番木瓜(CaricapapayaL.)作为试验材料,开展了番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因dsRNA介导的PRSV病原抗性的研究。利用农杆菌介导法将番木瓜环斑病毒外壳蛋白CP基因反向重复表达载体pHellsgate12-CPIR(简称PHG12-CPIR)分别转化到烟草和拟南芥中,获得阳性植株,并利用渗透法和农杆菌介导的瞬时表达体系将pHG12-CPIR载体导入到番木瓜中。对转基因植株进行攻毒试验并分析了其抗病性。在接种3~7d内,在拟南芥和番木瓜上转基因植株的发病情况较轻,而野生型植株叶片与转基因植株相比,均表现出不同程度的黄化、皱缩和枯斑等症状。在接种PRSV后,番木瓜和拟南芥转化植株表现症状的叶片的比例与对照相比,结果显著低于对照,而在烟草植株上症状表现的差异不明显。在3种植物上RT-PCR检测结果显示,在接种番木瓜环斑病毒PRSV后,野生型植株中有高浓度的病毒积累,而转pHG12-CPIR基因植株中几乎没有病毒积累,推测转pHG12-CPIR基因植株中瞬时表达系统已启动RNAi机制抑制了CP基因的表达。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 CP基因 番木瓜 RNAi 抗病性 渗透法
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dsRNA介导的PRSV-CP基因3′-端同源序列瞬时表达对番木瓜环斑病毒侵染的影响 被引量:2
5
作者 魏军亚 刘德兵 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2007年第3期78-82,共5页
体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法... 体外合成我国番木瓜主产区环斑病毒外壳蛋白(PRSV-CP)基因3'-端278bp同源区段,构建包含278bp正义链、内含子(PDK内含子)及278bp反义链的RNA介导的植物表达载体p2301-CPU,直接转化根癌农杆菌EHA105。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究同源dsRNA对番木瓜环斑病毒(PRSV)侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的dsRNA能够特异地干扰PRSV侵染。 展开更多
关键词 DSRNA 农杆菌浸润法 干扰 番木瓜环斑病毒
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番木瓜环斑病毒(PRSV)的电镜观察及提纯研究 被引量:1
6
作者 刘志昕 欧阳研 +1 位作者 龚洁敏 郑学勤 《热带作物研究》 1992年第2期45-47,38,共4页
选取表现斑驳、皱缩、畸型症状的感病番木瓜叶片,进行固定、包埋、超薄切片,并用电镜观察,发现感病叶片细胞中存在大量线条状病毒粒体和风轮状(柱状)内含体。以这种感病叶片为材料进行病毒提纯研究,结果表明,以硼酸缓冲液和适当添加剂... 选取表现斑驳、皱缩、畸型症状的感病番木瓜叶片,进行固定、包埋、超薄切片,并用电镜观察,发现感病叶片细胞中存在大量线条状病毒粒体和风轮状(柱状)内含体。以这种感病叶片为材料进行病毒提纯研究,结果表明,以硼酸缓冲液和适当添加剂经两次PEG沉淀、一次差速离心和蔗糖梯度离心可获得一定纯度的病毒。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 电镜观察 提纯
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番木瓜环斑病毒复制酶基因的克隆和序列分析 被引量:8
7
作者 叶长明 陈谷 +2 位作者 黄俊潮 于湄 李宝健 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第6期125-127,共3页
用RT-PCR技术从PRV-AL中分离到复制酶(RP)基因,将基因克隆进载体pUC18,用双脱氧链终止法测定了基因序列,表明其全长为1602bp,与国内外报道的HA5-1、YK和Sm的RP基因相比,同源性分别达82.... 用RT-PCR技术从PRV-AL中分离到复制酶(RP)基因,将基因克隆进载体pUC18,用双脱氧链终止法测定了基因序列,表明其全长为1602bp,与国内外报道的HA5-1、YK和Sm的RP基因相比,同源性分别达82.80%,95.07%和91.83%. 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 复制酶 基因 无性系 序列分析
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番木瓜环斑病毒复制酶基因转化番木瓜的研究 被引量:6
8
作者 陈谷 叶长明 +1 位作者 黄俊潮 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期11-13,共3页
构建了含番木瓜环斑病毒复制酶(PRVRP)基因的植物表达载体pRPTW,导入农杆菌LBA4404,转化番木瓜,转基因植株经点杂交和PCRSouthern检测,证明PRVRP基因已整合进番木瓜基因组。
关键词 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 农杆菌 转化
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番木瓜环斑病毒融合基因植物表达载体的构建 被引量:15
9
作者 饶雪琴 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期325-329,共5页
利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了... 利用PCR重叠延伸技术(genesplicingbyoverlapextension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papayaring-spotvirus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicaseprotein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了改进,并对改进的SOE的反应体系进行了优化,其中以Py-robestDNA聚合酶和60℃的退火温度为最佳。将融合基因VY构建在植物表达载体pCAMBIA2300上,测序结果表明,该融合基因的序列与设计相符。融合基因VY植物表达载体的构建,可为进一步获得对PRSV广谱抗性的转基因番木瓜奠定基础。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 PCR融合基因 SOE法
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番木瓜环斑病毒研究进展 被引量:5
10
作者 黄江华 黄嘉薇 +1 位作者 张建军 彭仁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第8期3257-3259,共3页
综述了番木瓜病毒株系、生物学特性、检测及防治方法的最新研究进展。
关键词 番木瓜环斑病毒 株系 检测 防治
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华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定 被引量:11
11
作者 蔡建和 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第4期13-17,共5页
根据田间调查、病毒粒子和内含体形态、血清反应、寄主范围和症状、昆虫介体、物理性质、潜育期等试验结果、认为华南4省区的番木瓜病毒病只有PRV一种。根据在西葫芦上的症状特点,将PRV初步区分为4个株系,即Ys、Vb、Sm... 根据田间调查、病毒粒子和内含体形态、血清反应、寄主范围和症状、昆虫介体、物理性质、潜育期等试验结果、认为华南4省区的番木瓜病毒病只有PRV一种。根据在西葫芦上的症状特点,将PRV初步区分为4个株系,即Ys、Vb、Sm和Lc。在313份标样中,它们单独所占比例分别为40.57%,10.22%,0.64%,4.47%,Ys+Vb(复合侵染)占44.08%,这表明Ys为优势株系,Vb次之,Lc和Sm发生少分布不广。研究结果还表明,以前有人报道的PMaLV实则是本研究的Vb,而不是一个新病毒。 展开更多
关键词 番木瓜 病毒 环斑病毒株系 鉴定
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番木瓜环斑病毒株系的生物学和血清学研究 被引量:9
12
作者 肖火根 范怀忠 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期50-54,共5页
本文对华南地区番木瓜环斑病毒(papayaRingspotvirus,PRV)的Ys、Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘... 本文对华南地区番木瓜环斑病毒(papayaRingspotvirus,PRV)的Ys、Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘关系方面,华南3个株系间的关系较密切,而与HA5-1株系的较疏远。在西葫芦植株体内增殖和运转方面,Sm株系病毒增殖和运转最快,在体内的浓度最高;Vb次之;Ys再次之;而HA5-1则更次之。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 株系 生物学
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番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析 被引量:3
13
作者 卢雅薇 沈文涛 +2 位作者 唐清杰 牛艳梅 周鹏 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第9期54-58,共5页
从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分... 从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列。序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸。同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%~93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%~89.1%。P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%~80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高。运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 全基因组 同源性 系统进化树
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根癌农杆菌介导的环斑病毒外壳蛋白基因转化番木瓜的研究 被引量:17
14
作者 周鹏 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1993年第2期71-77,共7页
利用杂种一代番术瓜(cariea papaya L.)实生苗的下胚轴及无菌苗的茎段、叶片等外植体与根癌农杆菌共培养的方法(即改良的叶盘法),将PBIU1质粒上的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)和环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV—CP)导入番木瓜细胞的核基因... 利用杂种一代番术瓜(cariea papaya L.)实生苗的下胚轴及无菌苗的茎段、叶片等外植体与根癌农杆菌共培养的方法(即改良的叶盘法),将PBIU1质粒上的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)和环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV—CP)导入番木瓜细胞的核基因组中。经共培养的外植体在含有卡那霉素(kan,100μg/ml)的选择培养基上产生抗性的愈伤组织,并通过体胚发生途径再生植株。NPTⅡ分析证明,NPTⅡ基因已在再生植株中稳定地表达。Southern blot分子杂交证明,PRSV—CP基因已整合到番木瓜的核基因组中。本研究已获得转PRSV—CP基因植株,并且在苗床移栽成活。 展开更多
关键词 番木瓜 根癌农杆菌 环斑病毒
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番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建 被引量:2
15
作者 赵辉 张雨良 +5 位作者 孔华 贾瑞宗 朱芸 郭安平 曾会才 彭明 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2210-2215,共6页
为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区... 为研究广谱抗环斑病毒(PRSV)海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白(CP)、辅助成分-蛋白酶(HC-Pro)和复制酶(Nib)基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区域和挑选出海南PRSV典型株系的代表样品。以p UCCRNAi为骨架质粒,利用代表样品的CP、NIb、Hc-Pro基因片断保守序列构建RNAi发夹结构,将发夹结构导入p CAMBIA2300-35S-OCS植物表达载体,构建出抗PRSV植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS、p CAMBIA230035S-Hc-Pro-RNAi-OCS、p CAMBIA2300-35S-NIb-RNAi-OCS。实验将PRSV不同株系保守序列的分析与RNAi的高效抗病设计理念相结合,可用于创造高效、广谱抗PRSV病毒病的新种质。 展开更多
关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 RNA沉默 基因转化
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转番木瓜环斑病毒复制酶基因番木瓜的多重定性检测 被引量:4
16
作者 阮小蕾 马丽娟 李华平 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期626-629,682,共5页
为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系... 为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系.退火温度为40~60℃时,都分别扩增出了清晰的目的基因.单基因常规PCR检测转基因模板量的下限为5×10-7g.建立的三重PCR检测技术,检测了包括NPTⅡ、Rep和CaMV35S;NPTⅡ、Rep和Nos;NPTⅡ、Rep和Papain等3个组合.建立了NPTⅡ、ReP、CaMV35S和Nos4个基因的四重PCR检测技术. 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 转基因番木瓜 多重聚合酶链式反应
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海南番木瓜环斑病毒全长cDNA克隆及其侵染性克隆构建 被引量:3
17
作者 赵光远 庹德财 +2 位作者 沈文涛 黎小瑛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期911-917,共7页
为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术(RACE)对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物(... 为了从分子水平上解析番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的致病机理,寻找广谱、有效的抗病毒新策略,培育具有应用前景的抗病新品种,利用RT-PCR和快速cDNA末端扩增技术(RACE)对引起番木瓜环斑病毒病的PRSV海南海口分离物(PRSV-HN2)的基因组cDNA进行了全序列测定。PRSV-HN2全长cDNA包含10 326 nt(不包括3′端的polyA,Gen Bank登录号为KF791028),能编码3 346个氨基酸。对PRSV-HN2基因组核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了结构和功能分析,结果表明,其与其它23个PRSV分离物的核酸序列相似度达81%-91%,氨基酸相似度为88%-94%。利用酵母同源重组系统成功构建其侵染性克隆载体并通过农杆菌转化与侵染,最终获得其侵染性克隆。这为在分子水平上研究PRSV遗传变异、侵染及致病机理奠定理论基础。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 全长CDNA 克隆 酵母同源重组 序列分析 侵染性克隆
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抗环斑病毒番木瓜的开发技术及转基因对基因组影响研究进展 被引量:2
18
作者 方静平 林艺华 +1 位作者 杨川毓 陈如凯 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第2期121-128,共8页
本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究... 本文综述了番木瓜环斑病毒(Papaya Ringspot Virus,PRSV)的生物学特性、防治措施及抗PRSV转基因番木瓜在国内外研究进展,通过基因转化对番木瓜基因组结构和功能的影响及外源基因整合主要技术方法等内容的阐述,展望了转基因番木瓜的研究前景. 展开更多
关键词 转基因 番木瓜环斑病毒 结构与功能 SunUp基因组
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番木瓜环斑病毒海南南瓜分离物全基因组序列分析 被引量:2
19
作者 车海彦 曹学仁 罗大全 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2019年第3期38-43,51,共7页
【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PR... 【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PRSV,采用分段扩增测序方法拼接获得PRSV-HnPumpkin基因组,利用NC-BI中的BLAST工具、DNAStar和MEGA 6.06软件进行序列分析及系统关系树构建。【结果】DAS-ELISA和RT-PCR检测结果表明,采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中存在PRSV(PRSV-HnPumpkin)。PRSV-HnPumpkin基因组全长为10 327nt,具有典型的PRSV基因组结构特征,含有1个开放阅读框,编码1个含有3 345个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-HnPumpkin与已报道的其他PRSV分离物核苷酸和氨基酸之间的相似性分别为80.6%~95.1%和90.7%~97.9%。系统关系分析表明,PRSV-HnPumpkin与亚洲分离物处于同一组中,且与我国台湾分离物亲缘关系较近。【结论】获得了PRSV-HnPumpkin全序列,但其进化来源有待进一步探讨。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 南瓜病毒 基因序列分析
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番木瓜环斑病毒检测新技术的建立及其在病毒——原生质体体系探索中的初步应用 被引量:1
20
作者 陈枝楠 郑冠标 +3 位作者 林孔勋 范怀忠 张春霞 田波 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期75-77,共3页
为了有助于全面了解和评价番木瓜完整植株对番木瓜环斑病毒(PRV)的抗、感病性机制,建立单细胞侵染模型是一个重要途径。本研究首次建立了PRV-番木瓜原生质体实验体系;建立了检测 PRV的间接Dot-ELISA和检测PRV-RNA的 cDNA分子探针的方法... 为了有助于全面了解和评价番木瓜完整植株对番木瓜环斑病毒(PRV)的抗、感病性机制,建立单细胞侵染模型是一个重要途径。本研究首次建立了PRV-番木瓜原生质体实验体系;建立了检测 PRV的间接Dot-ELISA和检测PRV-RNA的 cDNA分子探针的方法和技术,并利用这2个检测技术对PRV在番木瓜原生质体中的行为动态进行了初步探索。 展开更多
关键词 番木瓜 环斑病毒 原生质体
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